橡胶树胶乳黄色体死皮相关蛋白的鉴定及分析

本实验通过双向凝胶电泳技术(2-DE)比较橡胶死皮树与健康树胶乳黄色体蛋白表达谱的差异,通过软件分析比较获得37个差异表达的蛋白点,经基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)分析后,搜索NCBInr数据库,结果表明,有11个蛋白点被成功鉴定,其中7个为未知蛋白,其余4个蛋白分别为chloroplast 23 kDa polypeptide of photosystem II、ATP synthase beta chain、NADP-dependent sorbitol-6-phosphate dehydrogenase和vitamin-b12 independent methionine synthase。这4个蛋白在死皮树中表达量均下调,可能在死皮发生过程中起着重要作用。本研究将为进一步阐明橡胶树死皮发生的分子机制提供理论依据。     

巴西橡胶树不同死皮程度植株的胶乳生理参数分析

【目的】分析巴西橡胶树不同死皮程度植株胶乳的各生理参数,为橡胶树死皮的早期预测及死皮发生机理研究提供理论依据。【方法】测定热研7-33-97橡胶树不同死皮程度植株胶乳产量、胶乳硫醇、无机磷、蔗糖、粗酶液蛋白、镁离子含量及黄色体破裂指数等生理参数,分析其与橡胶树死皮发生的相关性。【结果】随着死皮程度的增加,橡胶树胶乳产量显著降低(P<0.05,下同),胶乳的干胶、蔗糖、镁离子含量及黄色体破裂指数增加;其中死皮程度最严重的胶乳产量最低,为13.56 mL/株,胶乳的镁离子含量和黄色体破裂指数分别达41.57 mmol/L和55.22%。胶乳硫醇、无机磷含量及pH随死皮程度的增加而降低,其中胶乳硫醇和无机磷含量均显著低于健康树;粗酶液蛋白含量无显著变化(P>0.05)。【结论】橡胶树胶乳硫醇、无机磷、镁离子含量及黄色体破裂指数等生理指标与其死皮程度密切相关,可作为橡胶树死皮早期预测的关键指标。     

橡胶树胶乳死皮相关蛋白的鉴定及分析

橡胶树死皮(tapping panel dryness,TPD)是一种复杂的生理综合症,严重制约了天然橡胶产量的提高。为了分离鉴定橡胶树胶乳中与死皮发生密切相关的蛋白,采用双向电泳技术(2-DE)比较了其健康树和死皮树胶乳蛋白质组的差异。结果显示,在健康树和死皮树蛋白图谱上分别检测到1 158±25和1 173±30个蛋白点,其中54个蛋白点差异表达。经基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析和数据库检索后,成功鉴定16个蛋白,这些蛋白中的3-磷酸甘油醛脱氢酶、紫色酸性磷酸酶、动力相关蛋白、烯醇酶以及小橡胶粒子蛋白等可能在死皮发生过程中具有关键作用。为从分子水平上阐明橡胶树死皮发生机制提供了一定的理论依据。     

高浓度乙烯利刺激诱导橡胶树死皮发生过程中的胶乳生理研究

采用高浓度乙烯利刺激诱导橡胶树死皮的发生,通过测定死皮发生动态变化过程中胶乳产量、干胶含量及胶乳硫醇、无机磷、蔗糖、黄色体破裂指数等生理参数的变化,阐明橡胶树死皮发生机理。结果表明,乙烯利刺激后,割线由排胶正常逐渐发展为割线内缩,乃至死皮出现。在死皮发生过程中,除黄色体破裂指数呈先下降后上升趋势外,其余各指标均呈先上升后下降趋势。当割线出现内缩症状时,胶乳产量、干胶含量及硫醇、无机磷、蔗糖含量显著提高(P0.05),达最大值,分别为228.20mL、39.09%、1.56mmol/L、32.76mmol/L和58.10mmol/L,此时,黄色体破裂指数下降至最低值14.27%。随后,胶乳产量、干胶含量及硫醇、无机磷、蔗糖含量又逐渐下降,死皮出现时分别为30.20mL、22.11%、0.66mmol/L、23.28mmol/L和25.41mmol/L,而此时黄色体破裂指数显著上升至最大值33.69%。此外,粗酶液蛋白含量和胶乳pH值在死皮发生过程中也发生明显变化。综上所述,高浓度乙烯利刺激诱导橡胶树死皮发生过程中,胶乳黄色体破裂指数、硫醇、无机磷、蔗糖等生理参数发生显著变化,与橡胶树死皮发生密切相关。     

巴西橡胶树HbUBC14基因克隆、生物信息学及表达分析

从巴西橡胶树中鉴定出一个泛素结合酶(UBC)基因,该基因长653 bp,最长开放阅读框504 bp,预测编码蛋白包含167个氨基酸;序列比对分析发现,该基因编码的蛋白具有一段保守的UBC结构域,与拟南芥E2成员UBC14(At3g55380)具有较高的相似性,故将该基因命名为HbUBC14。半定量RT-PCR分析结果表明,HbUBC14在巴西橡胶树胶乳中表达最高,在花药中表达最低。与健康橡胶树相比,死皮树胶乳中HbUBC14表达量明显下降。HbUBC14表达还受乙烯和茉莉酸调控。以上结果表明,HbUBC14可能在巴西橡胶树死皮、乙烯和茉莉酸反应中发挥作用。     

临床型乳房炎奶牛乳清差异蛋白质的双向电泳图谱分析

采用双向凝胶电泳技术和计算机辅助图象分析方法,对临床型乳房炎奶牛和健康奶牛的乳清蛋白质进行分析和比较,结果表明:在等电点为4~8,相对分子量为15 000-75 000 kD的区域内,临床型乳房炎奶牛乳清中有(128±8)个蛋白斑点,而健康奶牛乳清中有(122±4)个蛋白斑点.对临床型乳房炎奶牛与健康奶牛乳清蛋白质图谱匹配比较发现,有31个蛋白质点表达存在明显差异,其中乳房炎乳清中有7个蛋白点表达发生明显上调,6个蛋白点表达发生明显下调,4个蛋白点没有表达,并且乳房炎乳清新出现了10个蛋白点.     

一个橡胶树谷胱甘肽-S-转移酶基因的克隆和表达特性分析

 【目的】从橡胶树中克隆Glutathione-S-transferase（GST）基因的cDNA和基因组DNA,进行序列、结构和系统进化分析,研究胁迫条件和激素处理下的表达谱。【方法】利用产排胶机理课题组构建的胶乳EST数据库,通过PCR技术克隆橡胶树GST基因的cDNA和基因组DNA;在线预测蛋白质保守功能域和亚细胞定位,构建系统进化树,利用实时荧光定量PCR分析割胶、伤害、低温、激素和死皮病等因素对该基因表达的影响。【结果】从橡胶树胶乳中克隆到1个GST基因的全长cDNA（793 bp）,编码25.4 kD（219aa）蛋白,命名为HbGSTU1;克隆了HbGSTU1的基因组DNA（1 313 bp）,包含1个内含子（520 bp）和2个外显子。HbGSTU1属于GST Tau家族,推测是一种无信号肽的细胞质蛋白,其N端结构域包含结合GSH的G位点,C端结构域包含特异结合底物的H位点;HbGSTU1与一个蓖麻GST蛋白的亲缘关系最近,氨基酸序列的一致性为85%;HbGSTU1的表达受割胶、伤害、低温、2,4-D、乙烯利和死皮病等因素调控,但对JA、SA和ABA处理的应答不明显。【结论】HbGSTU1是一个典型的GST Tau家族蛋白,可能在橡胶树抗逆过程中起作用,可作为橡胶树抗逆分子育种的靶标基因。     

球孢白僵菌不同分生孢子特异性表达蛋白分析与筛选

对球孢白僵菌(Beauveria bassiana(Bais.)Vuill)D1-5菌株的3种分生孢子气生孢子、芽生孢子和深层孢子进行电镜观察,并利用双向凝胶电泳技术对3种孢子的特异性表达蛋白进行分析与筛选。结果显示,电镜下气生分生孢子呈球形,外周有棒状结构包裹,具有明显的疏水特性;芽生孢子为圆柱形,大小不均一,表面光滑;深层孢子球形透明,大小均一,表面粗糙,3种分生孢子孢子壁厚度差异不明显。经双向凝胶电泳对3种分生孢子进行特异性表达蛋白分离后,使用PDquest软件对结果进行分析,深层分生孢子与芽生分生孢子蛋白表达图谱相比较,有20个蛋白质表达量发生2倍以上改变,其中8个蛋白质表达量上调,12个蛋白质表达量下调;气生分生孢子与芽生分生孢子蛋白表达图谱相比较,有57个蛋白质表达量发生2倍以上改变,其中43个蛋白质表达量上调,14个蛋白质表达量下调;深层分生孢子与气生分生孢子蛋白表达图谱相比较,有66个蛋白质表达量发生2倍以上改变,其中8个蛋白质表达量上调,58个蛋白质表达量下调。     

橡胶树C-乳清三种蛋白提取方法双向凝胶电泳分析

摘要：C-乳清是胶乳的主要组分,就双向凝胶电泳技术而言,目前仍无有效的蛋白提取方法,这严重制约了双向凝胶电泳技术在橡胶树蛋白组分析上的应用。本文选取3种方法提取C-乳清蛋白,通过对蛋白产量和提取蛋白的双向凝胶电泳图谱分析系统评价3种方法。就蛋白产量而言,三氯乙酸/丙酮沉淀法产量最高（0.86 mg/ml C-乳清）,三氯乙酸沉淀法次之（0.72 mg/ml C-乳清）,酚提取法最低（0. 66 mg/ml C-乳清）。双向凝胶电泳图谱分析表明：酚提取法可检测到447个蛋白点,图谱背景较暗且横纵向纹理多;三氯乙酸沉淀法可检测到821个蛋白点,图谱背景居中;三氯乙酸/丙酮沉淀法可检测到1052个蛋白点,图谱背景清晰且基本无纹理。综上所述,三氯乙酸/丙酮沉淀法最适合C-乳清蛋白提取。本文首次系统评价C-乳清蛋白提取方法,必将推动橡胶树C-乳清蛋白研究发展。     

巴西橡胶树HbUBC5基因克隆、生物信息学及表达分析

为研究巴西橡胶树泛素结合酶(UBC)基因功能,采用PCR技术从巴西橡胶树中克隆了一个UBC基因,用半定量RTPCR分析基因表达模式,同时对基因编码蛋白进行生物信息学分析。结果表明,基因长681 bp,最长开放阅读框555 bp,预测编码蛋白包含184个氨基酸;序列比对分析发现,该基因编码的蛋白具有一段保守的UBC结构域,与拟南芥E2成员UBC5(At1g63800)具有较高的相似性,故将该基因命名为HbUBC5。半定量RT-PCR分析结果表明,HbUBC5在巴西橡胶树胶乳中表达最高,在树皮中表达最低。HbUBC5在叶片不同发育时期表达模式存在变化,在古铜期最低,在稳定期最高。与健康橡胶树相比,死皮树胶乳中HbUBC5表达量明显下降。HbUBC5表达还受乙烯和茉莉酸调控。以上结果表明,HbUBC5可能在巴西橡胶树死皮、产排胶、乙烯和茉莉酸反应中发挥作用。     

1-MCP在橡胶树死皮防控中的应用研究

考察死皮植株割线症状、胶乳产量及各胶乳生理参数，评估1-MCP对橡胶树死皮防控效果。结果表明，施用1-MCP死皮植株割线症状得到显著好转，其死皮长度恢复率为54.44%，死皮指数由试验前的69.33降低为试验后的41.33，防效达48.47%；死皮植株胶乳产量显著增加，试验前后，处理和对照单株胶乳产量分别为:6.40、37.6 mL和10.33、4.87 mL，处理植株单株增产31.2 mL，而对照植株减产5.46 mL。从胶乳生理参数来看，施用1-MCP后死皮植株的各胶乳生理参数得到不同程度的改善,其中胶乳硫醇含量的改善达显著水平。综上所述，施用1-MCP有利于改善死皮植株胶乳生理状况，增强其产排胶潜能，对防控橡胶树死皮、增加胶乳产量具有相对较好的效果。     

巴西橡胶树橡胶粒子蛋白质的16-BAC/SDS-PAGE双向电泳及质谱分析

【目的】分析巴西橡胶树（Hevea Brasiliensis Müll.Arg.）橡胶粒子的蛋白质构成,探索未知的橡胶粒子蛋白质。【方法】采用16-BAC/SDS PAGE双向电泳分离橡胶粒子蛋白质,采用MALDI/TOF-TOF质谱技术进行蛋白质鉴定;此外,利用磺基异硫氰酸苯酯（SPITC）化学辅助质谱测序法进行肽段的从头测序,获得未知蛋白质肽段的氨基酸序列。通过搜索橡胶树胶乳转录组测序获得的EST数据库,获取已知部分氨基酸序列蛋白质的全序列,或通过部分肽段获取为未知蛋白质编码的EST序列。【结果】获得了橡胶粒子蛋白质的16-BAC/SDS-PAGE双向电泳图谱,鉴定了17个橡胶粒子蛋白质;获得1个小橡胶粒子蛋白（small rubber particle protein,SRPP）亚家族成员SRPP(gi|37622210)的完整氨基酸序列以及1个橡胶延伸因子（rubber elongation factor,REF）亚家族新成员(hbREF2)的C端87个氨基酸残基序列,此蛋白质的氨基酸序列与已知的REF(gi|38122474)具有高度的相似性。【结论】采用16-BAC/SDS-PAGE双向电泳有效地分离了橡胶粒子蛋白质,展现了橡胶粒子蛋白质的相对含量,研究结果表明构成橡胶粒子的主要蛋白质组分是REF和SRPP亚家族蛋白质。橡胶粒子的蛋白质组分的全面鉴定,将有助于揭示橡胶粒子的生物学功能。     

橡胶树胶乳全蛋白的提取及双向电泳分析

以橡胶树无性系RRIM600为材料,采用TCA（三氯乙酸）-丙酮沉淀法提取胶乳全蛋白,17cmpH5～8固相pH梯度预制干胶条和快速银染法对提取的蛋白进行分离和染色,所得到的电泳图谱背景清晰,横条纹和竖条纹少,且蛋白点数量多。通过本研究获得了高分辨率的胶乳全蛋白双向电泳（2-DE）图谱的方法,为进一步开展橡胶树胶乳全蛋白质组学研究奠定了基础。     

巴西橡胶树线粒体50S核糖体蛋白L21 cDNA的克隆与分析(英文)

[目的]在橡胶生产中,一种叫做"死皮"的生理综合症严重制约了橡胶树(Hevea brasiliensis)单产的提高。为揭示橡胶树"死皮"发生的分子机理,研究对一差异表达的HbmRPL21进行了克隆,并在此基础上对其进行深入的生物信息学分析。[方法]在早期构建的差减文库中,筛选到一条在死皮植株中下调表达的基因片段,该片段编码的蛋白与线粒体50S核糖体蛋白L21(mRPL21)同源。通过ESTs序列拼接和RT-PCR,获得一条853bp的cDNA序列(命名为HbmRPL21,GenBank登录号为HM800425),该序列包含一个完整的开放读码框。[结果]信息分析表明,HbmRPL21编码271个氨基酸,理论分子量为30.52kD,等电点为8.40,HbmRPL21是一个包含Ribosomal_L21p保守结构域的线粒体定位蛋白。进化分析表明,植物和动物界间mRPL21序列差异很大,而植物界内则相对比较保守。[结论]研究为下一步阐明HbmRPL21在橡胶树"死皮"中的生物学功能奠定了理论基础。     

巴西橡胶树胶乳蛋白质组学研究综述

巴西橡胶树胶乳高速离心后大致可分为橡胶粒子、C-乳清和黄色体3种组分,这些组分中含有约200种不同的蛋白质。随着蛋白质组学的发展,巴西橡胶树胶乳蛋白质组学的研究已相继展开。本文综述近年来巴西橡胶树胶乳蛋白质组学的研究,提出了其存在的问题并进行了展望。     

死皮康复组合制剂在橡胶树品种RRIM600上的防效评价

为有效解决橡胶树品种RRIM600死皮高发的问题,进一步验证死皮康复组合制剂的防效,采用死皮康复组合制剂对其死皮进行防治。试验在海胶集团广坝分公司和山荣分公司两地开展。结果显示,使用死皮康复组合制剂,死皮指数显著降低,降低值为55.89,平均防效达33.85%;恢复全线排胶植株的比例为37.68%。广坝分公司的数据显示,处理后全线恢复植株胶乳产量随季节变化有所波动,但产量相对稳定,经3年持续割胶后,仍然保持较高的胶乳产量,而自然恢复植株经1年持续割胶后,产量显著降低,死皮严重;山荣分公司的数据显示,处理植株胶乳产量明显高于自然恢复植株,相对于自然恢复,处理植株胶乳最高增产54.41%,平均增产也达22.34%。死皮康组合制剂能显著改善RRIM600死皮植株割线排胶症状,提高胶乳产量,且恢复后的植株耐割性较好,能持续3年或以上相对的稳产和高产。死皮康组合制剂及其配套施用技术防效相对较理想,是目前相对较理想的橡胶树死皮防控技术。     

Combining Phytate/Ca2+ Fractionation with Trichloroacetic Acid/Acetone Precipitation Improved Separation of Low-Abundant Proteins of Wheat (Triticum aestivum L.) Leaf for Proteomic Analysis

Proteomic assessment of low-abundance leaf proteins is hindered by the large quantity of ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase (Rubisco) present within plant leaf tissues. In the present study, total proteins were extracted from wheat (Triticum aestivum L.) leaves by a conventional trichloroacetic acid (TCA)/acetone method and a protocol first developed in this work. Phytate/Ca²⁺ fractionation and TCA/acetone precipitation were combined to design an improved TCA/acetone method. The extracted proteins were analysed by two-dimensional gel electrophoresis (2-DE). The resulting 2-DE images were compared to reveal major differences. The results showed that large quantities of Rubisco were deleted from wheat leaf proteins prepared by the improved method. As many as (758±4) protein spots were detected from 2-DE images of protein extracts obtained by the improved method, 130 more than those detected by the TCA/acetone method. Further analysis indicated that more protein spots could be detected at regions of pI 4.00–4.99 and 6.50–7.00 in the improved method-based 2-DE images. Our findings indicated that the improved method is an efficient protein preparation protocol for separating low-abundance proteins in wheat leaf tissues by 2-DE analysis. The proposed protocol is simple, fast, inexpensive and also applicable to protein preparations of other plants.