临床型奶牛乳房炎乳腺组织的比较蛋白质组研究

 【目的】采用比较蛋白质组学技术分析、检测了临床健康与乳房炎奶牛乳腺组织中的差异表达蛋白,以寻找药物治疗目标,探讨奶牛乳房炎的发生机理。【方法】采用二维凝胶电泳分离临床健康与乳房炎奶牛的乳腺组织蛋白,考马斯亮蓝染色,PDQuest7.4软件自动匹配检测差异表达蛋白斑点,高效液相色谱串联离子阱质谱分析鉴定。【结果】凝胶图谱中检测出15个差异蛋白斑点,串联质谱分析后有12个蛋白斑点可搜索到相应的结果,对应于10种蛋白质,主要涉及结合、运输和催化活性等分子功能,参与细胞、代谢及生物调节等生理过程。【结论】临床健康与乳房炎奶牛的乳腺组织中蛋白的表达模式存在差异,表达差异蛋白与奶牛乳房炎的发生相关,对其分析有利于探索机体的生理病理状态,还可为揭示奶牛乳房炎的发生机理提供直接依据。     

奶牛乳房炎乳腺膜蛋白的比较蛋白质组学研究

【目的】通过分析临床健康和乳房炎奶牛乳腺组织膜蛋白的差异表达,以期在蛋白质水平探索奶牛乳房炎的发生机理。【方法】采用二维凝胶电泳技术分离了临床健康和乳房炎奶牛的乳腺组织膜蛋白,经考马斯亮蓝染色后PDQuest 7.4软件匹配、检测凝胶中差异表达的蛋白点,对12个差异蛋白点采用高效液相色谱串联离子阱质谱分析,SEQUEST软件搜索NCBInr数据库。半定量RT-PCR分析差异表达蛋白的mRNA水平。【结果】12个差异蛋白点鉴定为11种蛋白质,其中9个蛋白点在临床型乳房炎奶牛乳腺组织膜蛋白中表达量上调而3个蛋白点表达量下调,主要涉及细胞膜骨架系统、信号转导、物质结合和传递等生物学功能。半定量RT-PCR分析表明,乳房炎奶牛乳腺组织中钙粒蛋白B的mRNA表达水平是健康奶牛的1.6倍。【结论】推测这些差异蛋白的表达变化与奶牛乳房炎发生相关,为从蛋白质水平揭示奶牛乳房炎的发生机理以及发现潜在的治疗目标蛋白提供了理论依据。     

临床型乳房炎与正常奶牛血浆的差异蛋白质组研究

 【目的】检测和分析临床型乳房炎与正常奶牛血浆中差异表达的蛋白质。【方法】用二维凝胶电泳分离血浆蛋白,凝胶用硝酸银染色和考马斯亮蓝染色,PDQuest7.4软件自动检测分析差异表达蛋白斑点并经高效液相色谱串联离子阱质谱鉴定。【结果】凝胶图谱分析后得到3个差异蛋白斑点,鉴定为2种蛋白质（结合珠蛋白前体和乳腺球蛋白）。结合珠蛋白前体在临床型乳房炎奶牛血浆中表达量增加,可作为乳房炎诊断标记分子;而乳腺球蛋白的表达量下调。【结论】临床型乳房炎与正常奶牛的血浆中蛋白质的表达存在差异,对差异表达蛋白质的研究有利于探索机体的生理病理状态,可为疾病的诊断和治疗提供全面的信息。     

奶牛隐性乳房炎与乳清中C-反应蛋白相关性

为研究不同程度奶牛隐性乳房炎发病情况与乳清中C-反应蛋白(CRP)含量变化的关系,选取6头健康奶牛和18头患轻、中、重度隐性乳房炎奶牛,采集乳样,分离乳清,利用Elisa CRP检测试剂盒测定样品中CRP含量。结果表明,随着隐性乳房炎病情加重、乳汁体细胞数的增加,乳清中CRP含量逐渐升高,与健康对照组比较升高极显著。结果表明,乳清中CRP含量变化与隐性乳房炎发病具有一定相关性,乳腺损伤程度与乳汁体细胞数增加和乳清中CRP含量呈正相关。     

乳清中淀粉样蛋白A与奶牛隐性乳房炎相关性研究

为研究不同程度奶牛隐性乳房炎发病与乳清中淀粉样蛋白A(SAA)含量变化的关系。选取8头健康奶牛和24头患轻、中、重度隐性乳房炎奶牛为试验动物,采集乳样,分离乳清,利用Elisa SAA检测试剂盒测定样品中SAA含量。结果表明,随着隐性乳房炎病情加重,乳汁体细胞数的增加,乳清中SAA含量逐渐升高,与健康对照组相比差异呈显著或极显著(P﹤0.01或P﹤0.05)。结果表明,乳清中SAA含量变化与隐性乳房炎发病具有一定相关性,乳腺损伤程度和乳汁体细胞数增加与乳清中SAA含量呈正相关。     

隐性乳房炎病牛乳清中IL-8及TNF-α含量的变化

旨在探讨奶牛隐性乳房炎发病与乳清中IL-8和TNF-α含量变化的关系。选取24头患有不同程度隐性乳房炎的奶牛和8头健康奶牛作为试验动物,采集64份乳样并分离乳清,利用ELISA法检测乳清中IL-8和TNF-α含量。结果表明,患有轻、中、重度隐性乳房炎的奶牛乳清中,IL-8和TNF-α含量与健康对照组相比均极显著或显著升高(P0.01或P0.05),且乳清中IL-8和TNF-α含量随着隐性乳房炎病情的加重呈升高趋势。乳清中IL-8和TNF-α含量与奶牛隐性乳房炎的发病程度呈正相关性,IL-8和TNF-α含量随着乳腺炎症的加剧而升高。     

不同程度隐性乳房炎奶牛乳清中结合珠蛋白的变化

为研究奶牛隐性乳房炎发病程度与乳清中结合珠蛋白(HP)含量变化的关系,选取6头健康奶牛和18头患轻、中、重度隐性乳房炎奶牛为试验动物,采集乳样、分离乳清,利用HP ELISA检测试剂盒测定样品中HP含量。结果发现,随着隐性乳房炎病情加重、乳汁体细胞数的增加,乳清中HP含量逐渐升高,与健康对照组比较升高极显著(P0.01)。结果表明,乳清中HP含量变化与隐性乳房炎发病具有一定相关性,乳腺损伤程度和乳汁体细胞数与乳清中HP含量呈正相关。     

白头翁皂苷B4对临床型乳房炎奶牛乳汁体细胞、酶、炎性和抗氧化因子影响

[目的]乳房炎是危害奶牛健康最严重的疾病,常造成奶牛乳汁体细胞数升高和细胞因子水平改变.白头翁皂苷B4是中药白头翁的主要成分,具有抑菌、抗炎、抗氧化和增强免疫力等功能.对临床型乳房炎奶牛注射白头翁皂苷B4注射液,为探究白头翁皂苷B4对临床型乳房炎奶牛乳汁SCC、酶、炎性和抗氧化因子的影响,为临床应用提供依据.[方法]选取规模化奶牛场2～3胎次泌乳高峰期健康中国荷斯坦奶牛(对照组,不注射药物)和临床型乳房炎奶牛(试验组)各12头.乳房炎发病当天记为第0天,按0.05 mL/kg连续颈部肌肉注射白头翁皂苷B4注射液6 d,1次/d,并观察临床疗效至第12天.分别使用体细胞检测仪和ELISA法检测各组奶牛第0、1、3、5、7、9、11天乳汁SCC和乳清酶LDH、NAG、ALT、AST、ALP、ACP,炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α,抗氧化因子T-AOC、GSH-Px、SOD、CAT、MDA含量,并应用SPSS 24.0软件进行统计学分析.[结果]临床型乳房炎奶牛乳汁SCC,乳清酶LDH、NAG、ALT、AST、ALP、ACP,炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、脂质过氧化物MDA含量均显著高于对照组(P<0.05),并随治疗时间推移显著下降(P<0.05);而抗氧化因子T-AOC、GSH-Px、SOD、CAT含量显著低于对照组(P<0.05),并随治疗时间推移显著上升(P<0.05);第11天时除ALP显著高于对照组外(P<0.05),其余指标均与对照组差异不显著(P<0.05).[结论]白头翁皂苷B4可显著降低临床型乳房炎奶牛炎症反应和乳汁SCC,促进乳酶恢复正常水平,增强乳腺抗氧化能力,是治疗奶牛临床型乳房炎的理想药物.     

隐性乳房炎奶牛乳清中部分酶活性变化

选取18头患不同程度隐性乳房炎奶牛和6头健康奶牛为试验动物,采集乳汁,分离乳清,利用比色法检测乳清中LDH、NAG活性,研究奶牛隐性乳房炎发病与乳清中LDH、NAG活性的关系。结果表明,随着隐性乳房炎病情加重,乳清中LDH、NAG活性呈升高的趋势。乳清中LDH、NAG活性与奶牛隐性乳房炎发病严重程度呈正相关性,随着体细胞数增加和乳腺炎症的加剧,乳清中LDH、NAG活性随之升高。     

乳头药浴对奶牛乳房炎防治

奶牛乳房炎是一种复杂的乳腺综合症,一旦发病很难达到对因治疗。故预防乳房炎的发生尤其是隐性乳房炎的发展最为关键。在夏季临床型乳房炎高发期．用乳房消毒液进行乳头药浴预防奶牛乳房炎的发生有很好的控制效果。本试验把炎症较重的乳房炎奶牛分成对照组和药浴组分别处理．结果表明：对照组中转变为临床型乳房炎的比率为13％．治疗组中阻止隐性乳房炎转变为临床型乳房炎的比率为100％。转阴率为53％,对照组与药浴组比较差异极显著（p〈O．01）。用这种方法防治夏季临床型乳房炎效果明显,具有一定的推广价值。     

Comparative Proteomic Analysis of Plasma from Clinical Healthy Cows and Mastitic Cows

The current research presents the protein changes in plasma from healthy dairy cows and clinical mastitic cows using two- dimensional gel electrophoresis （2-DE）. After staining with silver nitrate and Coomassie Blue, differential expression proteins were detected by PDQuest 7.4 software, and then subjected to ion trap mass spectrometer equipped with a Surveyor HPLC System, differential spots of protein were identified. Three protein spots that originated from preparation gels were identified to be two proteins. Overall, haptoglobin precursor was up-regulated in cows infected with clinical mastitis and could be a mastitis-associated diagnostic marker, whereas SCGB 2A1 （secretoglobin, family 2A, member 1） was down-regulated protein. Plasma protein expression patterns were changed when cows were infected with mammary gland inflammation; it suggests that analysis of differential expression protein might be useful to clarify the mechanisms involved in the pathophysiology, and find new diagnostic markers of mastitis and potential protein targets for treatment.     

氮饥饿环境中稻瘟病不同致病力菌株分泌蛋白的双向电泳图谱分析*

 采用双向电泳技术研究了稻瘟病菌株Y99-63和Y98-16在氮饥饿条件下分泌蛋白群的组成及差异。在稻瘟病菌株Y99-63和菌株Y98-16分泌蛋白的2 DE图谱中分别检测出 262±10和253±10个蛋白质点。其中有130个蛋白质点为菌株Y99-63特异表达,121个蛋白质点为Y98-16特异表达,132个蛋白质点为两菌株共同表达。在两菌株共同表达的表达量相差达5倍以上的有38个蛋白质点,其中有25个蛋白质点在菌株Y99-63表达量较大,有13个蛋白质点在菌株Y98-16表达量较大。生物信息学预测稻瘟病菌分泌蛋白的分子量在10-20kDa以及等电点在5.0-5.5范围内蛋白质点数最多。菌株Y99-63特异表达分泌蛋白的分子量10-20kDa范围内蛋白质点最多, 菌株Y98-16特异表达分泌蛋白的分子量在20-30kDa范围内蛋白质点数最多,两菌株共同表达的分泌蛋白分子量在10-20kDa范围内蛋白质点数最多。菌株Y99-63特异表达分泌蛋白的等电点在5.5-6.0范围内蛋白质点数最多,菌株Y98-16特异表达分泌蛋白的等电点在4.5-5.0范围内蛋白质点数最多,两菌株共同表达分泌蛋白等电点在5.0-5.5范围内蛋白质点数最多。稻瘟病菌不同菌株在氮饥饿条件下产生的分泌蛋白有较大差异。     

地肤通乳散治疗奶牛乳房炎临床疗效及作用靶点预测

为探讨地肤通乳散治疗奶牛乳房炎的临床效果、抗菌活性及作用机制,先利用微量肉汤法测定地肤通乳散对奶牛乳房炎主要病原菌体外抗菌活性,再对患有乳房炎的奶牛进行治疗,观察治愈率和有效率,最后利用BATMAN、STRING、Cytoscape等数据库及软件对地肤通乳散治疗奶牛乳房炎作用靶点进行分析。结果显示,地肤通乳散对无乳链球菌抑制、杀灭浓度均为1.52 mg·mL^-1;对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的最小抑制浓度为25 mg·mL^-1,最小杀菌浓度是最小抑制浓度的2倍;对奶牛乳房炎的治愈率为63.16%,有效率可达89.47%。地肤通乳散中共筛选得到21个活性化合物,对应靶点173个,枢纽靶点5个。上述结果说明,地肤通乳散对奶牛乳房炎主要病原菌体外抗菌活性较高,临床疗效确切,可能主要通过枢纽靶点5'-核苷酸酶、白介素-8、雌激素受体1、磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基α和磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基β作用于肿瘤坏死因子、Janus激酶2、Toll样受体4、原癌基因RelA、NF-κB亚基和趋化因子CXCL12来治疗奶牛乳房炎。     

恩诺沙星及其代谢产物在奶牛乳中的消除规律

 【目的】研究乳房炎奶牛单剂量乳房灌注1%恩诺沙星（50 ml/头）后乳中药物浓度的变化规律。【方法】采用HPLC法测定乳中恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星的浓度,用统计矩原理处理药物浓度—时间数据。【结果】在给药区恩诺沙星和代谢产物环丙沙星均于给药后2ｈ左右乳中浓度达到最高值,分别为（13.16±3.10）μg?ml-1和（2.79±0.94）μg?ml-1,然后逐渐下降;12 ｈ后检测不到恩诺沙星,24 ｈ已检测不到环丙沙星。对于非给药区,恩诺沙星给药后1ｈ左右乳中浓度达到最高值（0.19±0.02）μg?ml-1,然后逐渐下降;6 ｈ后检测不到恩诺沙星,而代谢产物环丙沙星于给药后4 ｈ乳药浓度可达最高峰（0.51±0.07）μg?ml-1,24 ｈ已检测不到乳药浓度。给药区代谢物环丙沙星的消除半衰期较恩诺沙星长,平均为（1.67±0.20）h,平均滞留时间（MRT）亦长。在本试验条件下,建议临床休药期不少于3 d。【结论】恩诺沙星吸收较迅速 ,代谢较快、清除较快 ,表明恩诺沙星与环丙沙星在乳中不会形成残留。     

强光对鲻鱼视网膜的光化学损伤的初步研究

给鲻鱼以2 000 lx光照12 h,采用酶学分析的方法,比较了鲻鱼在强光光照前和光照后1、37、d的视网膜内一氧化氮合酶(NOS)酶活力和丙二醛(MDA)含量。结果表明:对照组视网膜内NOS酶活力为(0.106 5±0.015 36)U/mgprot,3个实验组视网膜内NOS酶活力分别为(0.157 8±0.010 84)(、0.126 0±0.017 83)(、0.132 8±0.023 08)U/mgprot,光照后的实验组NOS酶活力显著高于光照前的对照组(P<0.05);对照组视网膜内MDA含量为(0.077 4±0.011 85)nmol/mgprot,3个实验组视网膜内MDA含量分别为(0.125 2±0.013 69)(、0.115 7±0.017 87)(、0.101 6±0.009 12)nmol/mgprot,光照后实验组MDA酶活力极显著高于光照前的对照组(P<0.01)。该实验结果与大鼠、兔等哺乳动物光损伤后视网膜内NOS酶活力和MDA含量变化趋势相似,推断鲻鱼在强光照射后视网膜会产生光损伤,为进一步研究光诱围网船作业对海洋中上层趋光鱼类产生影响打下了基础。     

绵羊肺炎支原体蛋白质组双向电泳图谱的构建

为了建立针对绵羊肺炎支原体蛋白质组学研究的双向电泳图谱及其相关技术体系.采用反复冻融兼Urea-CHAPS-DTT-SB3-10裂解法和超声兼Urea-CHAPS-DTT-SB3-10裂解法提取绵羊肺炎支原体菌体蛋白,取200μg菌体蛋白利用固相pH梯度等电聚焦双向电泳,对硝酸银染色后获得的双向电泳图谱进行图像分析.结果表明反复冻融兼Utea-CHAPS-DTT-SB3-10裂解提取法获得198±2个蛋白斑点,超声兼Urea-CAPS-DTT-SB3-10裂解提取法获得241±2个蛋白斑点.说明超声兼Urea-CHAPS-DTT-SB3-10裂解提取法提高了双向电泳的分辨率,进而可增强生物质谱鉴定蛋白质的准确度.     

福建柏叶片蛋白质双向电泳技术优化

蛋白质双向电泳是蛋白质组学研究方法之一,但蛋白质双向电泳技术体系却因物种不同而有所差异,因而蛋白质双向电泳体系的建立是进行蛋白质分离、鉴定的首要步骤。本文对福建柏叶片蛋白质提取方法、IPG胶条、等电聚焦参数设定、丙烯酰胺分离胶浓度等因子进行单因素分析,对福建柏双向电泳技术进行优化。结果表明,采用三氯乙酸-丙酮提取福建柏叶片的蛋白点多且图像清晰,p H4~7的IPG胶条最适合福建柏叶片蛋白的分离,等电聚焦参数设定为20 000 Vh,浓度为10%的分离胶进行福建柏双向电泳最好。本研究初步建立了福建柏叶片蛋白质双向电泳体系,为深入研究福建柏蛋白质组学提供依据。