养殖大菱鲆肠炎病的流行病学和病原学研究

[目的]肠炎病是目前大菱鲆养殖行业中比较常见的疾病之一,该病感染率高,传播迅速。[方法]从山东半岛3个不同的养殖厂肠炎病发病大菱鲆体内分离致病菌,对其进行了常规生理生化特征测试和16S rRNA基因序列对比研究。[结果]从发病大麦鲆体内共分离到了株优势细菌。理化特征分析结果显示这3株菌中有2株分别与溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)和大菱鲆弧菌(Vibrio scophthalmi)表型特征非常相似,另1株细菌被证实为非弧菌属的细菌,具体定种尚需进一步研究。分析这2株弧菌属细菌的16S rRNA基因序列并构建了系统发育树,结果表明这些菌株与溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)和大菱鲆弧菌(Vibrio scophthalmi)的亲缘关系最近。[结论]从发病大菱鲆体内分离菌株的2株细菌被鉴定为溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)和大菱鲆弧菌(Vibrio scophthalmi)。     

海湾扇贝幼体期流行性弧菌病的研究

从辽宁兴城育苗场和辽宁省海洋水产研究所育苗室患面盘解体的海湾扇贝Argopecten irradians Lamarck幼体中分离出6株菌,经感染试验表明,其中3株菌B01、Y01和Y02为病原菌。根据菌体形态及生理、生化测试,B01鉴定为需钠弧菌Vibrio natriegen,Y01和Y02具有相同的形态、生理、生化特征,鉴定为弧菌属Vibrio。需钠弧菌对庆大霉素、痢特灵、菌必治、诺氟沙星、氯霉素、环丙沙星、多粘菌素B敏感;Y01和Y02菌对诺氟沙星、菌必治、氯霉素、复方新诺明、环丙沙星、磺胺异嗯唑敏感。对海湾扇贝育苗水体中细菌总数和弧菌数量的监测结果表明,幼体发生病变之前的水体中,细菌和弧菌的密度高于正常育苗水体的。文中还对病原菌的传播途径等问题进行了讨论。     

凡纳滨对虾苗空肠空胃病原的分离鉴定及药敏试验

[目的]对伴有空肠空胃症状的发病凡纳滨对虾苗进行病原分离鉴定及药敏试验,为有效防治对虾早期死亡综合症(EMS)及开展相关领域研究提供基础资料.[方法]以常规方法进行患病虾苗病原菌分离,通过透射电镜观察、Vitek 2 GN全自动细菌鉴定系统及16S rRNA序列扩增等进行病原菌鉴定,并以K-B纸片扩散法进行药敏试验.[结果]从患病虾苗中分离获得2株优势菌株(HTW 140601和HTW140602),根据分离菌株的菌体形态、生理生化特性及16S rDNA序列分析结果,分别判定为鲍希瓦氏菌(Shewanella haliotis)和创伤弧菌(Vibrio vulnificus).菌株HTW140601和HTW140602对头孢曲松、庆大霉素、氧氟沙星均表现出高度敏感.[结论]创伤弧菌是引起凡纳滨对虾苗空肠空胃的致病菌,实际生产中可选用头孢曲松、庆大霉素、氧氟沙星进行防治.     

大菱鲆出血性败血症病原茵的分离与鉴定

从全身呈弥漫性出血的养殖大菱鲆.Scophthalmus maximus肝脏、腹水和肾脏中分离到3株菌落形态相同的优势菌,取菌株L-59231通过注射(菌液浓度分别为4×lO.、5×107 cfu/mL,剂量0.1 mL/尾)、灌喂(4×106 cfu/mL,0.5 mL/尾)和创伤浸泡(4.7×105 cfu/mL)三种途径对大菱鲆进行人工感染试验.结果表明:以上三种途径均可造成大菱鲆的发病,灌喂感染和创伤浸泡对试验鱼的感染率为100%和57.1%,未发现死亡;注射感染的死亡率分别为100%和71.4%.药敏试验表明,庆大霉素、四环素、氯霉素、红霉素、链霉素等对L-59231菌株有较强的抑制作用.该菌呈短杆状,革兰氏染色阴性,氧化酶阳性,接触酶阴性,V-P试验阴性,硝酸盐还原反应阳性.根据<常见细菌系统鉴定手册>所描述的弧菌属的生理生化特性,综合形态观察、生理生化特征、16S rRNA基因序列等试验结果,可将L-5923l菌株鉴定为创伤弧菌.     

斜带髭鲷感染鱼肠道弧菌的分离及分析

[目的]对患病斜带髭鲷(Hapalogenys nitens)幼鱼进行病原菌的分离及鉴定。[方法]对2013年1月福州罗源湾某海水网箱养殖场斜带髭鲷幼鱼死亡病例进行了发病情况、临床表现及病原学方面的检验;对其中5尾患病斜带紫鲷的肝脏、脾脏、肾脏及鳃丝进行细菌分离与纯培养,对病原菌进行形态、生理生化测定和16S rRNA基因序列测定及系统发育学分析,并用30种抗菌类药物对5株菌进行了药敏试验。[结果]斜带髭鲷幼鱼死亡病例为细菌性感染症,分离纯培养的菌株(fzlyw201301071和fzlyw201301072)与弧菌属(Vibrio)的鱼肠道弧菌(Vibrio ichthyoenteri)可认定为同一种属。药敏试验结果显示,在不同菌株间无明显的敏感与耐药性差异。[结论]为水产养殖动物的疾病防治提供了理论依据。     

文蛤生物体及内脏中弧菌的研究

[目的]鉴定文蛤体内弧菌的类型及致病性强度,并筛选治疗这些病原菌的最佳药物。[方法]用TCBS培养基从文蛤生物体内分离出12株弧菌,对其进行致病性试验,对致病性较强的3株弧菌进行鉴定及药物敏感试验。[结果]该3株菌分别为河流弧菌H04（Vibrio fluvialis）,H06副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）,H11创伤弧菌（Vibrio vulnificus）,其对环丙沙星、先锋赛高度敏感,对青霉素G、先锋霉素V有耐药性,临床上可以首选环丙沙星、先锋赛作为治疗这些病原菌的药物,其次是头孢曲松、氟哌酸、丁胺卡那、四环素、庆大霉素等。[结论]结果为文蛤疾病的防治提供了理论依据。     

从皮肤溃疡的鮸状黄姑鱼检出弧菌

从网箱养殖患病的Mian状黄姑鱼（Nibea miichthioides)患处分离到两株病原菌，根据它们的形态特征，生理生化特性，鉴定为溶藻弧菌（Virbrio alginolyticus)和副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus)；药敏试验的结果表明，复方新诺明片（复方磺胺甲恶唑片），氟哌酸对该两菌株有较强的抑制作用。     

大菱鲆出血性败血症病原菌的分离与鉴定

从全身呈弥漫性出血的养殖大菱鲆Scophthalmus maximus肝脏、腹水和肾脏中分离到3株菌落形态相同的优势菌,取菌株L一59231通过注射（菌液浓度分别为4&#215;10^8、5&#215;10^7cfu／mL,剂量0．1mL／尾）、灌喂（4&#215;10^6cfu／mL,0．5mL/尾）和创伤浸泡（4．7&#215;10^5cfu／mL）三种途径对大菱鲆进行人工感染试验。结果表明：以上三种途径均可造成大菱鲆的发病,灌喂感染和创伤浸泡对试验鱼的感染率为100％和57．1％,未发现死亡;注射感染的死亡率分别为100％和71．4％。药敏试验表明,庆大霉索、四环索、氯霉素、红霉素、链霉素等对L-59231菌株有较强的抑制作用。该菌呈短杆状,革兰氏染色阴性,氧化酶阳性,接触酶阴性,V—P试验阴性,硝酸盐还原反应阳性。根据《常见细菌系统鉴定手册》所描述的弧菌属的生理生化特性,综合形态观察、生理生化特征、16SrRNA基因序列等试验结果,可将L-59231菌株鉴定为创伤弧菌。     

养殖半滑舌鳎腹水病的病原分离鉴定及药物敏感性分析

从患腹水病的养殖半滑舌鳎腹水中分离到优势生长的细菌,人工感染试验证明,其中一株细菌(HST2)为致病菌。通过细菌的形态学特征、培养特性、生理生化特性及16S rRNA基因序列分析对病原菌进行鉴定,结果表明,HST2为副溶血弧菌。应用50种抗菌药物对HST2进行药物敏感性分析,结果显示,HST2对氨曲南等43种药物高度敏感,对林可霉素敏感,对青霉素G、氨苄青霉素、羧苄青霉素、苯唑青霉素、杆菌肽、阿洛西林6种药物不敏感。     

鳗鲡溃烂病病原的分离与鉴定

从广东深圳患溃烂病的病鳗肝脏分离到一株致病性细菌AnGS020501。该菌的主要特征为:革兰氏阴性,端生鞭毛,TCBS平板上生长,氧化酶阳性,葡萄糖发酵型,对弧菌抑制剂O/129(50μg/片)敏感。通过常规细菌学方法和应用ATB细菌自动鉴定仪,鉴定该菌为创伤弧菌(Vibrio vulnificus)。人工感染实验结果证明,该菌是鳗鲡溃烂病的病原菌,对鳗鲡、罗非鱼、鲫、斜带石斑鱼和小鼠的半数致死量(LD50)分别为2.69×105、1.64×105、4.23×105、6.1×106、1.56×106CFU/g。该菌胞外产物对鳗鲡的LD50为1.02μg蛋白/g鱼体重。药敏试验结果表明:诺氟沙星、庆大霉素、四环素、多西环素及利福平等对该菌有显著的抑制作用。     

灰额刺尾鱼溃疡病病原分离及鉴定

从灰额刺尾鱼(Acanthurus glaucopareius)体表溃烂处及内脏器官中分离到5株较强致病力的菌株,经过人工感染健康鱼证实该菌株是致病菌。对该病原菌进行了形态、生理生化反应测试,结果显示为溶藻弧菌(Vibrioalginolyticus)。应用细菌16S rDNA的通用引物对该菌基因组DNA进行PCR扩增、克隆测序,得到1条长度为1 392 bp的核苷酸序列,该序列与溶藻弧菌(登录号GQ455008)的16S rDNA基因序列同源性达99%,进一步确定该致病菌为溶藻弧菌。药敏试验结果表明,该菌株对痢特灵、氟哌酸、环丙沙星等药物敏感,对甲氧胺嘧啶、氨苄青霉素、阿米卡星、青霉素等药物耐药。研究亮点:通过系统的病原学试验研究,证实了灰额刺尾鱼溃疡病的病原为溶藻弧菌,并验证了该病原菌的药物敏感性等特性,以及对该病的病症、病因及临床治疗方法进行了分析,这些结论尚属首次报道,为灰额刺尾鱼溃疡病以及其他海水观赏鱼同类疾病的临床诊断和防治技术提供科学依据。     

白菜黑斑病拮抗细菌8-59的筛选及鉴定

[目的]筛选对白菜黑斑病病原菌具有拮抗作用的细菌。[方法]从各地的土壤中分离到200多株拮抗细菌,进行初筛、复筛,再对筛选到的菌株进行菌体形态、菌落特征的观察及一系列生理生化试验。[结果]200多株拮抗细菌中菌株8-59有显著的抑菌活性,根据8-59菌株的形态特征和生理生化特征综合考察,初步判断其为巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）。[结论]该研究可为细菌拮抗机理研究及后续的生产与田间应用奠定基础。     

利用PCR技术快速检测水产品中副溶血性弧菌

[目的]对副溶血性弧菌的检测进行研究。[方法]采用聚合酶链式反应（PCR）,以标准菌株（单增李斯特菌、哈氏弧菌）作为阴性对照对3株副溶血性弧菌进行特异性扩增,扩增引物采用副溶血性弧菌如基因中的tlh-3和tlh-4,同时利用PCR对人工污染的白对虾中的副溶血性弧菌进行检出限测定。[结果]结果表明,通过PER扩增,副溶血性弧菌在约449bp处扩增出特异性条带,单增李斯特菌、哈氏弧菌均未出现任何条带,扩增片段表现出极好的特异性。菌液稀释到3．3×10^2cfu／ml时,将其污染到白对虾中作PCR仍可扩增出目的片断。[结论]该研究表明PER检测方法快捷、特异性好、敏感性高,可以作为副溶血性弧菌辅助检测方法。     

甘蔗渣淀粉功能降解菌筛选及s2g5-1和s3g4-8的鉴定

[目的]筛选甘蔗淀粉功能降解苗,并对菌株s2g5-1和s3g4-8进行鉴定。[方法]利用多种选择性培养基,从自然发酵不同阶段的甘蔗渣中分离到多种淀粉分解菌,并对其进行初筛和复筛。[结果]并对其进行了获得了淀粉降解功能菌株s2g5-1和s3g4-8,及其最适培养基改良NA培养基和淀粉培养基,并进行了培养基优化。通过形态、生理生化和分子综合鉴定得出s2g5-1和s3g4-8菌株均为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。[结论]该研究结果为甘蔗渣工厂化应用提供了原论依据。     

一株压砂甜瓜采后病害生防菌的筛选及鉴定

[目的]从甘草内生细菌中筛选拮抗压砂甜瓜采后病害病原菌的生防菌.[方法]以初步检测具有抑菌活性的19株乌拉尔甘草内生细菌为供试菌株,以甜瓜采后病害病原菌粉霉病菌（Trichothecium roseum）、白霉病菌（Fusaium sp.）、黑腐病菌（Alternaria alternata）和软腐病菌（Rhizopus stolonifer）为指示菌株,经过离体和活体筛选测定内生细菌对甜瓜采后病原菌的抑制作用;应用16S rDNA序列分析,结合生理生化指标对1株拮抗活性较强的菌株进行鉴定.[结果]从19株供试内生细菌株中筛选出5株菌株对4种指示病菌的抑制能力较强,其中菌株S0806082的拮抗能力最强,鉴定为Delftia tsuruhatensis.[结论]内生细菌S0806082具有一定的生防应用潜力.     

舟山海域海泥细菌的分离及抗水产病原弧菌的筛选

采集中国东海舟山海域海底不同层次9个海泥样品,通过稀释培养分离纯化得到海洋细菌78株。采用滤纸片琼脂扩散法测定上述分离所得海洋细菌对鳗弧菌、溶藻弧菌、哈维氏弧菌、创伤弧菌、费氏弧菌等5种水产病害常见病原弧菌的抑制作用,获得具有抑弧菌作用的海洋细菌17株,占21.8%。其中6株菌株对费氏弧菌有明显的抑菌作用,占7.7%。7株菌株对哈维氏弧菌的抑菌作用较显著,占9.0%。2株菌株对创伤弧菌有明显的抑菌作用,占2.6%。2株菌株对溶藻弧菌和鳗弧菌显示一定的抑制作用,各占1.3%。研究结果表明：通过稀释培养法能分离到一定数量和种类的海洋细菌;来自海底泥的海洋细菌中存在较多的具有水产病原弧菌拮抗活性的菌株。     

常德地区山羊上呼吸道病原菌的分离鉴定及药敏试验

[目的]调查常德地区山羊上呼吸道病原菌感染的分布情况,为降低山羊呼吸道疾病的发病率奠定基础。[方法]根据细菌形态学和生理生化特性,对常德地区20头山羊上呼吸道分泌物中的病原菌进行分离和鉴定,并用Kirby-Barer法测定分离菌株对16种抗菌药的敏感性。[结果]山羊上呼吸道病原菌以混合感染为主,经分离鉴定获得6种细菌(25株),且革兰氏阳性菌株检出率达76%。6种分离菌株对环丙沙星、氟嗪酸、庆大霉素和氯霉素敏感率高达100%,而对万古霉素、头孢呋肟、利福平、青霉素和先锋Ⅵ产生耐药性。[结论]环丙沙星、氟嗪酸、庆大霉素和氯霉素可作为山羊疫病暴发时的首选药物。     

副溶血性弧菌的检测研究

[目的]对toxR进行副溶血性弧菌特异性检测,探讨toxR靶基因能否准确检测副溶血性弧菌,从而消除其他研究者对该基因特异性的疑虑。[方法]采用SN/T1870—2016中副溶血性弧菌toxR的引物探针对副溶血性弧菌和其亲缘关系接近的弧菌标准菌株进行检测。[结果]采用实时荧光PCR方法证实该引物探针只能扩增出副溶血性弧菌,其他弧菌诸如溶藻弧菌、创伤弧菌、霍乱弧菌等未得到扩增。[结论]证实SN/T1870—2016中toxR的引物探针特异性高。该研究可为各检测机构提供数据支持,为副溶血性弧菌的检测与研究奠定更为坚实的基础。