体外重折叠核糖核酸酶A及其荧光结构表征

核糖核酸酶A(RNase A)作为蛋白质体外重折叠研究的模型蛋白,考察了稀释复性过程中脲浓度、稀释倍数、氧化还原环境(GSH浓度和GSH/GSSG比例)、pH值、温度以及聚集抑制剂的添加对该酶活性回收率的影响.在变性蛋白浓度为100 μg·mL-1,复性液含有2 mol·L-1脲,GSH浓度2 mmol·L-1,GSH/GSSG比为4:1,pH8.0,并添加终浓0.1%的PEG,转速为150 r·min-1,温度37℃的条件下复性,RNase A的活力回收率可达70%以上.利用荧光分析法对RNase A复性过程的结构变化进行了表征,在此基础上对RNase A体外重折叠过程蛋白质分子的构象变化以及活性中心的形成过程进行了阐述.     

黑木耳原生质体制备及再生的研究

文章用浓度为0.6mol·L-1的MgSO4·7H2O渗透压稳定剂配制浓度为1.5%的溶壁酶,在pH6.0,30℃条件下酶解3h,黑木耳原生质体产量达到最高值为9.2×106个·mL-1。最适合原生质体再生的培养基配方为:马铃薯20%,葡萄糖2%,MgSO4·7H2O0.15%,蛋白胨0.1%,KH2PO40.1%,琼脂2%,甘露醇0.6mol·L-1,在此培养基中的再生率为33.09%。     

培养条件对嗜水气单胞菌胞外蛋白酶合成与分泌的影响

对体外培养嗜水气单胞菌的胞外蛋白酶 (ECPase)产生条件进行了优化。结果发现 ,其产量与碳源、氮源、培养温度、培养基初始pH值等有关。蔗糖能促进蛋白酶的产生 ,NH4 + 抑制蛋白酶的产生。其最佳产酶条件为 :pH 7 5的0 0 2mol·L-1KC1,0 0 6mol·L-1K2 HPO4 ,5g·L-1的蔗糖和 5g·L-1的胰蛋白胨水 ,2 8℃ ,15 0r·min-1摇床培养 6 5h。在此条件下酶活性可达 2 0 8U·mL-1。     

离子交换层析复性重组人γ-干扰素折叠二聚体的形成

SP Sepharose Fast Flow离子交换层析柱作为蛋白质复性系统,采用尿素梯度法进行重组人γ-干扰素包涵体蛋白质的复性实验.结果表明,尿素梯度离子交换层析法能有效地复性重组人γ-干扰素包涵体,复性后的重组人γ-干扰素的纯度达95%,蛋白收率达54%,比活为7.5×105IU·mg-1.以Superdex 75凝胶作为体积排阻层析介质,对离子交换层析复性的样品进行分析,表明离子交换层析复性的样品中没有重组人γ-干扰素聚集体存在.荧光光谱分析表明重折叠的重组人γ-干扰素的构象接近于其天然二聚体构象.     

一种新的PVC膜铬(VI)离子选择电极的研制及应用

以自制的硝基酞菁钯研制了PVC膜铬(VI)离子选择电极.在B R缓冲液(pH为1.97)中,电极在铬(VI)离子浓度为1.0×10-5mol·L-1～1.0×10-2mol·L-1范围内呈良好的线性关系,检测限为2.95×10-6mol·L-1.实验测得的电极响应斜率与混合价态离子斜率的理论推断值相符.在选定的条件下,大部分的离子对铬(VI)的测定基本无干扰,电极用于电镀废水铬(VI)离子的测定,结果令人满意.     

除草剂甲磺隆残留分析的极谱法测定

采用示波极谱法研究了甲磺隆的极谱吸附波及其性质。在0.4mL冰醋酸和0.5mL1mol·L-1醋酸-醋酸钠介质中甲磺隆于-1.20V(vs.SCE)处产生一波形较好的二阶导数极谱波。在此实验条件下,甲磺隆浓度在7.8×10-7～1.30×10-3mol·L-1范围内与导数波峰电流(Ip)呈良好线性关系。检出限为2.60×10-7mol·L-1。本方法用于测定污水模拟体系中甲磺隆的回收率可达95.78%,土壤蔬菜残留的分析测定也较理想。     

HPLC法测定犬血浆及复方麻醉制剂中强痛宁含量的研究

为建立高效液相色谱法(HPLC)-紫外检测器测定犬血浆和复方麻醉制剂(QFM)中强痛宁浓度的方法,本试验采用外标法,以ZorbaxSBC18(4.6mm×250mm,5μm)为固定相,乙腈与去离子水(含0.015mol·L-1的磷酸二氢钠)30:70(v/v)为流动相,流速1.0mL·min-1,紫外检测波长195nm。结果表明,标准曲线在2~100ng·mL-1范围内线性关系良好(r2=0.9975~0.9986),最低检测限浓度为2ng·mL-1,犬血浆和QFM中强痛宁的平均回收率分别为(92.75±3.96)%、(92.50±4.32)%;日内变异系数(4.01±1.38)%、(4.28±1.59)%;日间变异系数(4.60±2.0)%、(44.46±1.87)%。说明本方法简便、准确、检测浓度低,能够满足犬血浆中低浓度强痛宁的测定及临床药代动力学研究的要求。     

厌氧蛋白质氨化细菌筛选及对酸化液pH的影响

将筛选的5株R/r大于3,酶活力200～300U·mL-1,氨态氮产生量大于100mg·L-1,且适宜在起始pH5.0～6.0、35℃下生长的厌氧蛋白质氨化细菌应用于pH5.5的酸化液。其中产低温酸性蛋白酶的k3B37和产低温偏酸性蛋白酶的m1B94菌株,生物量为0.315和0.643时产酶活性达到302.2、271.7U·mL-1;使酸化液氨态氮含量分别提高了373.47、302.89mg·L-1,从而将酸化液pH调至7.29、7.03,为产甲烷菌创造适宜生长、产气条件。     

淡紫拟青霉FZ-0289产几丁质酶的条件优化

通过单因素和多因素正交试验对淡紫拟青霉FZ0289产几丁质酶的条件进行了研究.单因素试验表明:100目几丁质粉末对菌体产几丁质酶的诱导性最强;添加蛋白胨能使产酶高峰提前,产酶量增加.多因素正交试验表明,在添加2g·L-1100目几丁质粉末、2g·L-1蛋白胨、1g·L-1KH2PO4、0.5g·L-1MgSO4、0.2g·L-1CaCl2和0.2g·L-1NaCl的培养基中接入经马铃薯蔗糖培养基(PSA)活化10d的菌碟(接菌孢子量为6×109个·L-1,500mL摇瓶中培养体积为150mL),在28℃、150r·min-1的条件下培养3d,发酵液中几丁质酶活达到0.11U·mL-1.     

鸡类胰岛素生长因子Ⅰ的克隆、表达及其表达产物的生物学活性研究

 应用RT-PCR方法对雏鸡肝脏总RNA中鸡类胰岛素生长因子Ⅰ基因cDNA进行扩增，然后将特异性片段连接到pMD18-T载体，测序结果表明，与已知序列同源性为100%。然后将特异性片段连在pRLC载体上进行表达，经Tricine-SDS-PAGE分析，原核表达产物为7.6 kD的重组蛋白，占菌体总蛋白的23%，Western印迹表明重组蛋白具有IGF-Ⅰ抗原活性。表达产物以包涵体形式存在，经7 mol·L-1盐酸胍的变性液溶解及0.5 mol·L-1精氨酸复性液处理，表达产物随后进行脱盐、凝胶层析纯化、MTT法分析其对NIH3T3和鸡胚成骨细胞的增殖效应，结果表明重组鸡IGF-Ⅰ具有较高的生物学活性。     

杜鹃花属植物基因组DNA RAPD-PCR反应体系的优化

试验通过系统比较研究,确立了杜鹃属植物RAPD-PCR的最佳反应体系,即20μL反应体系中:模板DNA(10 g.L-1)1.5μL;10×PCR buffer 2μL;Taq酶(0.5 U.μL-1)0.3μL;引物(0.8μmol.L-1)4μL;MgCl2(25 mmol.L-1)1.8μL;dNTPs(dATP、dCTP、dTTP、dGTP各含1.0 mmol.L-1)0.6μL。经试验验证,该反应体系重复性高,扩增条带亮度均匀,弥散现象少。     

加替沙星的电化学特性及其应用

用电化学预处理法制备了新型的玻碳电极(PGCE),并在此电极上用循环伏安法和线性扫描伏安法研究了加替沙星(GFLX)的电化学特性。结果表明,在浓度为0.03 mol.L-1,pH为5.0的NaAc-HAc缓冲溶液中,电压为+0.20V条件下富集120 s后,GFLX在+1.05V(vs.SCE)处产生一个灵敏的不可逆氧化吸附峰。氧化峰电流ip与GFLX浓度在6.0×10-8~1.0×10-5mol.L-1范围内呈良好的线性关系,检测下限可达1.0×10-8mol.L-1。该电极可用于直接测定尿样中加替沙星的含量,与其他分析方法相比,结果比较理想。     

山麻鸭睾丸和肝脏中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的分离提取及其性质的比较

山麻鸭的睾丸和肝脏经硫酸铵分级沉淀分离、DEAE-32离子交换柱层析,获得的肝脏N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase,EC3.2.1.52)比活力为85.30 U.mg-1,纯化倍数为10.48.睾丸NAGase再进一步通过Sephacryl S-300凝胶过滤纯化,获得的NAGase比活力为5537.00 U.mg-1,纯化倍数为59.20.睾丸NAGase经聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳,出现单一蛋白带,测定等电点pI为5.05.以对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNP-NAG)为底物研究酶催化底物水解的反应动力学.结果表明:山麻鸭睾丸和肝脏NAGase的最适pH分别为5.70和5.60,酶在pH为3.00-8.43时较稳定,而pH>8.43时很快失活;酶的最适温度分别为45和60℃,当温度为80℃时酶完全失活.睾丸NAGase在40℃下处理30 min,酶活力保持稳定;而肝脏NAGase在30℃下处理30 min,酶活力保持稳定,酶催化pNP-NAG水解反应遵循米氏方程,睾丸和肝脏NAGase水解pNP-NAG的Km分别为0.17和0.21 mmol.L-1,Vm分别为8.82和7.25μmol.L-1.min-1,活化能分别为57.57和79.47 kJ.mol-1.     

乌龙岭龙眼果皮的PPO特性及活性抑制

为探明乌龙岭龙眼贮藏保鲜过程中的褐变问题,以C6H6O2为底物,采用分光光度法研究了底物浓度对龙眼果皮PPO活性的影响规律.采用正交试验方案,分析了不同抑制剂、pH值和温度对乌龙岭龙眼果皮PPO活性的影响.结果表明,龙眼果皮褐变反应的动力学符合米氏方程,米氏常数为0.054 mol.L-1,最大反应速度为1.428×102U.m in-1.适宜的抑制剂可有效延缓龙眼果皮的褐变,保持龙眼质量.在相同条件下,Na2S2O3抑制效果最好.此外,还对影响龙眼果皮PPO活性的因素进行了优化.     

NaCl胁迫对葡萄愈伤组织中白藜芦醇含量及细胞膜保护酶活性的影响

以‘黑比诺’葡萄试管苗叶片诱导并继代1a的愈伤组织作为试验材料,接种后分别添加0、0.1、0.2、0.3、0.4mol·L-1的NaCl溶液,研究不同浓度NaCl对愈伤组织中白藜芦醇含量及细胞膜保护酶活性的影响.结果表明:随着NaCl浓度的升高,葡萄愈伤组织中白藜芦醇的含量逐渐升高,当NaCl浓度为0.3mol·L-1时白藜芦醇含量最高,达到80.76μg·g-1,此时SOD活性也达到最高,为53.7320U·g-1·min-1;较低浓度的NaCl有助于PPO与CAT活性的升高.偏相关分析结果表明,不同浓度NaCl处理下葡萄愈伤组织中白藜芦醇的含量均与CAT活性呈显著正相关,与SOD、PPO活性呈显著负相关;不同程度NaCl胁迫下,细胞膜保护酶间的相关性也出现相应变化.     

微胶囊法固定化糖化酶的研究

酶或细胞固定化技术是微生物发酵的主要手段之一,它可使生产速率和效率获得显著提高。为确定微胶囊法固定糖化酶的最佳条件,以壳聚糖和海藻酸钠为载体,采用微胶囊法固定糖化酶。试验结果表明,最佳固定化条件为:壳聚糖脱乙酰度为85%、海藻酸钠浓度为3%、戊二醛浓度为1.5%、氯化钙浓度为0.2 mol.L-1。固定化酶的最适作用温度为75℃,比游离酶提高了20℃,最适pH为4.5,比游离酶下降0.5个单位。固定化酶的活力最高达2 013.42 U.g-1干胶,相对活力为89.3%,米氏常数Km为1.28%,半衰期为223 h。采用壳聚糖和海藻酸钠为载体微胶囊法固定糖化酶的方法是可行的。     

河田鸡与艾维茵肉鸡睾丸N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的特性比较

河田鸡和艾维茵肉鸡的睾丸,经硫酸铵分级沉淀、DEAE-32离子交换柱层析,获得比活力为54.84 U.mg-1,纯化倍数为8.86的河田鸡睾丸N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)制剂.艾维茵肉鸡睾丸NAGase经Sephacry S-300凝胶过滤层析柱进一步纯化,获得比活力为171.50 U.mg-1,纯化倍数为19.8倍的NAGase制剂.以对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNP-NAG)为底物,研究酶催化底物水解的反应动力学.结果表明:河田鸡和艾维茵肉鸡睾丸NAGase的最适pH分别为5.6、5.7,最适温度分别为55、50℃;NAGase分别在pH为3.0-9.2、4.0-9.2及温度为10-60、10-30℃下能保持稳定;NAGase酶促反应动力学均符合米氏双曲线方程,测得米氏常数(Km)分别为0.223、0.319 mmol.L-1,最大反应速度(Vm)分别为9.438、6.238μmol.L-1.m in-1;NAGase催化pNP-NAG反应的活化能分别为85.74、73.47 kJ.mol-1.     

喹乙醇和分子氨对鲤幼鱼血清SOD和MDA的影响

文章采用双因子多水平试验设计,研究喹乙醇和分子氨同时作用对鲤血清SOD和MDA的影响。喹乙醇在饲料中的添加水平为0,200,500,1500 mg.kg-1,水体中分子氨浓度为0.069,0.137,0.411 mg.L-1。结果显示,试验组鲤血清SOD活性在214.386～551.137 U.mL-1之间,较对照组(631.374 U.mL-1)显著降低(P<0.05);MDA含量在2.427～5.572 nmol.L-1之间,较对照组(1.756 nmol.L-1)显著升高(P<0.05)。多重比较显示,喹乙醇添加量达到500 mg.kg-1、分子氨浓度达到0.137 mg.L-1时,SOD活性的下降并趋于稳定;当喹乙醇和分子氨浓度达到1 500 mg.kg-1,0.411 mg.L-1时,MDA含量显著上升(P<0.05)。喹乙醇与分子氨的交互作用显著。试验结果表明,分子氨和喹乙醇可直接影响鲤幼鱼体内的脂质过氧化水平,且这种氧化损伤的程度与二者浓度密切相关。     

日粮中添加不同剂量大豆黄酮对小尾寒羊血清中SOD和MDA的影响

试验选取来源相同、体重约20kg的健康3月龄雄性小尾寒羊5只,试验采用前后自身对照,研究日粮中添加不同剂量的大豆黄酮对血清中SOD和MDA的影响。试验分3系列进行,每系列试验进行2周。第1系列为对照期,第2系列为低剂量期(按3mg.kg-1饲料添加),第3系列为高剂量期(按6mg.kg-1饲料添加)。结果显示:血清中SOD水平对照期为27.54±11.38U.mL-1,低剂量期为37.41±12.09U.mL-1,高剂量期为41.14±13.80U.mL-1。低剂量期较对照期差异显著(P<0.05),高剂量期较低剂量期差异不显著(P>0.05)。血清中MDA水平对照期为8.99±1.56nmol.mL-1,低剂量期为7.12±2.74nmol.mL-1,高剂量期为6.21±1.04nmol.mL-1。低剂量期较对照期差异显著(P<0.05),高剂量期较低剂量期差异不显著(P>0.05)。结果提示,两种剂量比较大豆黄酮在日粮中按3mg.kg-1饲料添加可以达到提高机体抗氧化水平。     

美系獭兔血液生理生化指标测定

为了给獭兔的饲养管理、品种选育、肉质研究和临床诊疗提供依据,选择美系獭兔20只(雌雄各半),比利时兔10只(雌雄各半),对其血液生理生化指标进行了测定.结果表明:美系獭兔血液指标中的血小板数目、红细胞平均血红蛋白浓度、谷草转氨酶、谷氨酰转肽酶、钾离子和钙离子的含量分别为292.4×109·L-1、379.0 g·L-1...