免疫乳及其制品中免疫球蛋白(Ig)对病原菌抑制作用的研究

本文主要研究由病原徽生物引发的以婴幼儿为主的人的传染性腹泻，将其病原作为免疫原制备疫苗．对奶牛迸行人工主动兔疫后产生免疫乳。该免疫乳中免疫球蛋白（Ig）平均活性较非兔疫常乳高8倍，为初乳的14.84％。本试验就是使用由兔疫乳中提取的Ig，从致病性大肠杆菌和沙门氏菌中各选出一株致病性较强的菌株，作为病原菌代表株，即50155和44115。将Ig加入主细菌培养物中进行休外抑菌试验．在不同时间从培养物中取祥用751G分光光度计测定OD值，并用电子显徽镜迸行透射观察，最后将培养物再行接种，试验组经37℃24h培养后无菌生长。结果表明；每m1培养液中（此培养液在37℃24h时．活菌数达108cfu／ml）加入Ig1mg，耐病原菌的生长繁殖具有较强的抑制和杀灭作用。免疫乳中作为生物活性物质的成分，其抗菌效果较显著。     

苹果链格孢菌侵染条件及致病性研究

温度与保湿时间对苹果链格孢菌的侵染有很大的影响.当温度低于10℃,病原菌潜育期需72h;但当温度为25～30℃时,潜育期仅为6.5～8h.叶面保漫时间愈长,愈利于病原菌的侵染,叶面最少保湿时间为6h.病原菌侵染的最佳温度和保湿时间组合为:温度28～32℃,保湿时间24～48h.不同菌株接种试验表明:各菌株致病性有一定的差异,兰1、天2、平3菌株致病性较强,而武4菌株致病性较弱.品种感病性差异显著.印度、红星最易感病,祝、乔纳金抗病性较强.     

杏果实黑斑病病原鉴定及病原菌生物学特性

对杏果实上发生的一种新病害——黑斑病进行了报道，根据病原菌致病性、生物学特性、培养性状及形态研究结果，鉴定其病原是一种链格孢菌(Alternaria sp.)，适宜病原菌生长的温度为25～30℃，最适温度为28℃，适宜pH值为4～8，最适pH值为5．78．以蛋白胨或酵母汁为氮源，淀粉或乳糖为碳源有利于菌丝生长，分生孢子萌发的适宜温度为25～35℃，最适温度为30℃，光照有利于菌丝生长和孢子萌发。     

猪葡萄球菌毒素致死小鼠的初步研究

为观察猪葡萄球菌毒素对小鼠的致病性,用一株能引起猪渗出性皮炎的猪葡萄球菌于24～72 h肉汤培养物和经80℃、30 min灭活的肉汤培养物,肌肉注射小鼠.将77只小白鼠称重标记.随机分为7组,每组11只,1～6组为试验组.依次为第1组肌注培养24 h不灭活的菌液,第2组肌注培养24 h经灭活处理的菌液,第3组肌注培养48 h不灭活的菌液,第4组肌注培养48 h经灭活处理的菌液,第5组肌注培养72 h不灭活的菌液,第6组肌注培养72 h经灭活处理的菌液,每只鼠肌注菌液量为0.5 mL:第7组为对照组,肌注0.5 mL灭菌生理盐水.结果表明,未经灭活处理的培养液均可致小鼠死亡,培养48～72 h经火活处理的培养物仍可致小鼠死亡.     

一株驴源干酪乳杆菌分离、鉴定及生物学特性研究

为了分离出可用于研发驴用微生态制剂的乳酸杆菌,采集健康驴新鲜粪样4份,通过分离培养、形态特征、培养特性筛选出革兰氏阳性,厌氧,无芽孢杆菌1株。通过生理生化鉴定和PCR鉴定,确定该分离菌株为干酪乳杆菌,编号为LV1。生物学特性研究结果表明,干酪乳杆菌LV1安全,无致病性,适宜生长温度范围为30~40℃,培养液初始p H3~8条件下均能生长。研究为研发驴用乳酸杆菌微生态制剂奠定了基础。     

石油降解细菌发酵培养条件初探

从培养液初始pH值、培养温度、摇床转速、培养时间、初始接种量、不同培养基等6个方面对4株石油降解细菌的发酵培养条件进行了初步研究。结果表明:每100 mL培养液中接种0.5 mL种液时,Y-4菌株在30~35℃、pH值7.0~7.5、150 r/min转速条件下培养18 h时产菌量最多,6~24 h为对数生长期;Y-5菌株在35℃、pH值7.3~7.5、150 r/min转速条件下培养24 h时产菌量最多,10~24 h为对数生长期;Y-7菌株在35~37℃、pH值7.0~7.2、150 r/min转速条件下培养30 h时产菌量最多,12~30 h为对数生长期;每100 mL培养液中接种1 mL种子液时,Y-12菌株在35℃、pH值7.9~8.1、150 r/min转速条件下培养36 h时产菌量最多,18~30 h为对数生长期;同时采用4个培养基进行培养,结果表明4个菌株在4种培养基中都能生长,但在营养条件比较丰富的1#培养基中生长较好,在2#、3#、4#培养基中生长较差,4个菌株中Y-7的产菌量最少。     

番茄褐斑病菌的侵染条件及致病性研究

对番茄褐斑病菌侵染条件及致病性的研究表明,温度与保湿时间对番茄褐斑病菌(Helminthosporiumcarposaprum)的侵染有很大的影响。当温度为10℃时,病原菌潜育期达74h;当温度为25~30℃时,潜育期仅为6.0~8.0h。叶面保湿时间愈长,愈利于病原菌的侵染,叶面最少保湿时间为6h。病原菌侵染的最佳温度和保湿时间组合为:温度25~30℃,保湿时间24~48h。不同番茄品种对病菌的敏感性差异较显著,世纪、夏丰为高度感病品种,百果强丰和博爱15号为中抗品种,霸王、皖粉3号和皖粉4号为抗病品种。不同菌龄的H.carposaprum对番茄的致病性也有差异,菌株培养10d时的致病力较强,培养15d的致病力次之,培养5d和培养20d的菌株致病力较差。     

ROS对山羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚发育的影响

【目的】研究周期依赖性蛋白激酶抑制剂(Roscovitine,ROS)对山羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚发育的影响。【方法】将山羊卵母细胞置于含不同浓度(0(对照),20,40,80,120,160,200μmol/L)ROS的成熟液中培养24h统计第一极体排出率,初步筛选山羊卵母细胞成熟培养液中添加ROS的有效浓度;将山羊卵母细胞在含不同浓度(0(对照),40,80,120,160,200μmol/L)ROS的抑制培养液中培养8或16h,再转入常规培养液中培养至24h,统计第一极体排出率,确定ROS适宜的浓度和作用时间。将卵母细胞放入添加40μmol/L ROS的培养液微滴中进行抑制培养,抑制培养8h后分别再常规培养0,2,4,6,8,10,12,14,16h,统计各处理第一极体排出率。将山羊卵母细胞在最佳ROS处理方案下抑制培养后进行孤雌激活,观察孤雌胚的发育情况。【结果】成熟培养液中加入40μmol/LROS抑制培养山羊卵母细胞8h后再转入常规培养液中培养至24h,是比较理想的ROS处理方案。山羊卵母细胞成熟培养的16h以前,全程抑制和抑制8h再常规培养2个试验组第一极体排出率与常规对照组无显著差异;分别培养18,20,22h时,2个试验组第一极体排出率均极显著低于对照组;24h时,抑制8h再常规培养组第一极体排出率(58.76%)与对照组(63.13%)接近,无显著差异。试验组成熟卵母细胞孤雌激活胚的囊胚率(46.75%)显著高于对照组(36.04%,P<0.05)。【结论】山羊COCs成熟培养液中加入40μmol/L ROS培养8h再转入常规培养液培养至24h,是山羊卵母细胞核质同步成熟较适宜的方案,此方案可以有效抑制18～22h核成熟卵母细胞的减数分裂恢复,推迟4～6h成熟,达到培养24h核质同步成熟的目的,提高了体外培养卵母细胞的质量。     

具有潜在抑制肠道致病菌能力的乳酸菌的筛选

[目的]从实验室保藏的乳酸菌中筛选出耐酸耐胆盐能力较强的乳酸菌,并研究其对肠上皮细胞的黏附能力及对肠道病原菌的抑制能力。[方法]通过模拟人工胃肠液及体外与IEC-6细胞共培养来分别研究乳酸菌的耐酸耐胆盐能力及对细胞的黏附能力,并利用单层琼脂平板扩散法测定其抑菌效果。[结果]试验的27株乳酸菌中,10株乳酸菌在p H 3.0的人工模拟胃液中培养3 h的存活率均大于44.00%,在p H 8.0的人工模拟肠液中培养4 h的存活率均大于51.56%,在含0.30%胆盐的培养基中培养24 h的存活率均大20.00%;其中菌株C13、A03、A17及A90对IEC-6细胞的黏附个数均大于8个/cell;菌株C13、A03对艰难梭菌、沙门氏菌和大肠杆菌的抑制能力较强,抑菌圈直径均大于22 mm。经16S rRNA测序将C13和A03分别鉴定为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosu)和植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。[结论]L.rhamnosu C13、L.plantarum A03的耐酸耐胆盐能力及对上皮细胞的黏附能力较强,对肠道病原菌有较好的抑制作用,可作为良好的抑制肠道病原菌的候选益生菌株。     

猪源生物被膜乳酸菌的筛选、鉴定与体外益生特性评价

将分离自健康猪新鲜粪便的乳酸菌进行功能性和安全性评价,旨在筛选出有利于猪健康生长的优良乳酸菌菌株。结果显示,共分离到2株对猪源大肠杆菌等病原菌具有抑制作用的乳酸菌菌株,并从中成功筛选出1株生物被膜形成能力较强的分离菌株L-8。经鉴定,分离菌株L-8为约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii),具有一定的产酸能力,能够耐受胃内pH值4.0～10.0和肠道1%胰蛋白酶环境,对猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)具有一定的黏附性,其生存能力和生长性能均较好。此外,分离菌株L-8对小鼠无致病性,具有安全性。综上,分离菌株L-8具有作为猪用益生菌的潜在益生特性和开发前景。     

酸菜中乳酸菌的分离筛选及富硒性能研究

以丰城市富硒地区的农家酸菜为原料,分离筛选出2株产酸和富硒能力较强的乳酸菌,经生理生化测定和16s rDNA基因序列同源性分析,这2株细菌分别为植物乳杆菌和类植物乳杆菌,命名为LCFC001、LCFC002。在MRS培养基37℃培养,2株乳酸菌的延滞期约4 h,培养18 h左右到达稳定期,浓度达2.5×10~(10)CFU/mL,培养基pH值则从起始的6.3降至3.0。在MRS液体培养时,2株乳酸菌可耐终浓度320μg/mL亚硒酸钠;当培养液含亚硒酸钠浓度为20μg/mL时,菌株对硒的转化率可达74.5%。研究表明,分离的2株乳酸菌具有优良的无机硒耐受和转化性能。     

酵母菌与乳酸菌混合培养条件研究

[目的]研究酵母菌与乳酸菌混合培养的条件。[方法]对产朊假丝酵母（Candida tails）、酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）、植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）、嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）等4种菌的混合培养条件进行了优化,分析了溶解氧、温度、pH值、接种比例及接种量对其菌体生长的影响。[结果]在培养基的起始pH值6.5、酵母菌与乳酸菌混合种子（活菌数约2×109 CFU/ml）中酿酒酵母菌数：产朊假丝酵母菌数：植物乳杆菌数：嗜酸乳杆菌数约为1∶2∶3∶3、酵母菌与乳酸菌混合种子的接种量为0.2%、前期120r/min震荡培养24 h,后期静置培养24 h,培养温度为28℃恒温24 h,32℃恒温24 h条件下,培养液中的总活菌数可达到6.50×108CFU/ml。[结论]该培养基增殖效果好,适合应用于大规模生产混合发酵酵母菌与乳酸菌的发酵剂。     

玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63原生质体形成 和再生条件的初探

玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63在温室及大田试验中都对棉花黄萎病菌表现出很强的拮抗作用,是一株很有应用潜力的生防菌株。不论是菌丝体本身还是其代谢产物都对多种植物病原菌有很强的抑制作用。对该生防菌株进行深入研究,尤其是分子水平的研究尤为重要。笔者通过研究影响链霉菌原生质体形成的多种条件和因素,包括培养基的选择、培养时间、甘氨酸浓度、溶菌酶浓度、酶解时间等,最终成功的制备出了生防菌Men-myco-93-63的原生质体,初步确定了其形成条件:TSB培养基一级培养24h,用SGGP作为二级培养基培养菌丝体40h(补加甘氨酸2%),将菌丝体加入2mg/ml溶菌酶37℃水浴60min后即可得到原生质体,涂在再生培养基R5上再生培养,再生数可达4.8×106个/ml。为该生防菌原生质体的转化、基因表达等研究奠定了重要的基础。     

连翘内生真菌的分离及其抑菌活性初步研究

采用PDA培养基从连翘茎、叶中分离到19株内生真菌,对其分别进行液体培养,将发酵产物中的发酵液用高压蒸汽湿热灭菌,菌丝体晾干研磨后用丙酮提取。用发酵处理液和丙酮粗提物采用生长速率法对一些植物病原菌进行抑菌活性测定。结果表明:抑菌率在50%以上的活性菌株,发酵液组中有1株(5.26%),菌丝体组中有13株(81.25%),表明其抑菌活性成分主要为胞内代谢产物(存在于菌丝体粗提物中)。筛选出2株抗菌谱较广的内生真菌(J4和J8),其中J8对9种病原真菌抑菌活性较强,J4对6种病原真菌抑菌活性较强。     

辽宁地区油松松针枯萎病病原及其培养特性

对辽宁地区油松枯萎病的病原菌及培养特性进行了研究。通过广泛标本采集和分类鉴定,确定油松上5种病害。接种试验证明松落针病[Lophoderm ium conigenum(B runaud)H ilitz]、松赤枯病(Pestalotia funereaDesm.)和松叶枯病(Sphaeropsissp)3种病原有明显致病性。3种病原菌在36h时孢子萌发率达到99%以上。菌丝的最佳生长温度在20~30℃之间,最佳碳源是果糖和蔗糖,最佳pH值6~8。     

脾转移因子(TF)对小鼠巨噬细胞(Mφ)感染弓形虫的影响

弓形虫病的免疫是以细胞介导为主的免疫,其中,Mφ是机体抗弓形虫感染重要的效应细胞.本文旨在明确 TF 在体外激活小鼠腹腔 Mφ后的形态变化及对弓形虫消化的影响进行初步观察.按常规方法制备健康昆明鼠腹腔 Mφ,加含犊牛血清的1640培养液37℃培养,2 h 后洗去非沾附细胞,胰酶消化,洗涤、计数 Mφ,按6×10~5/mL 分装含飞片的培养瓶(1 ml/瓶~(-1)),另制备弓形虫免疫的猪脾脏细胞 TF_1和未免疫健康猪脾 TF_2加入含 Mφ培养瓶.另设不含 TF 的 Mφ对照瓶(组)。37℃密闭培养60 min     

猪瘟病毒E2蛋白A/D抗原域在毕赤酵母中的表达

对含猪瘟病毒E2蛋白A/D抗原区基因插入的重组酵母菌株进行诱导表达,通过对诱导时间、重组酵母菌株、菌体密度、培养液pH、甲醇剂量等培养条件与表达产量关系的分析,对重组蛋白的表达条件进行了优化。优化后的条件为:28～30℃,225r/min振荡培养至BMGY中菌体OD600值为3.0～3.5时,将菌体转入相当于4倍体积BMGY,pH为6.0的BMMY培养基中培养72h,每24h加入甲醇至终浓度为总体积的0.5%～1.0%。在此优化条件下,重组蛋白的表达量可达275.38μg/mL,比较温度对重组蛋白降解率的影响后发现,培养物上清液应保存于-20℃。     

杜鹃炭疽病病原鉴定及其生物学特性研究

从昆明市郊的杜鹃盆花种植基地采集炭疽病样品,经病原分离和纯化得到形态一致的6个菌株;通过形态学观察、分子生物学和致病性鉴定,将该杜鹃炭疽病的病原菌鉴定为博宁炭疽菌(Colletotrichum boninense)。研究了不同碳源、氮源、p H值、温度对该病原菌生长的影响,结果表明:该病原菌能有效利用多种碳源,最适合的为葡萄糖;有利于该病原菌生长的有机氮为蛋白胨,无机氮为硝酸钾;病原菌在15³5℃下均能生长,最适温度为25℃;适于病原菌生长的培养基p H值为635℃下均能生长,最适温度为25℃;适于病原菌生长的培养基p H值为6⁸;适于产孢的培养基为MA培养基。     

猪繁殖—呼吸综合征病毒上海分离株的病毒特性研究

对猪繁殖－呼吸综合征病毒（PRRSV）上海分离株（SH1）的理化特性和结构蛋白进行研究。结果表明，SH1分离株能致Marc-145细胞典型病变，TCID50为10^5.0mL^-1。对氯仿和乙醚、酸（pH5．5以下）、碱（pH8以上）、热（水浴56℃10min以上、37℃24h以上、28℃48h以上）均敏感。病毒负染可见以具囊膜的球形为主，囊膜上有纤突，大小为60－85nm。超薄切片可见病毒存在于细胞浆中。SH1分离株的病毒培养液经差速离心和非线性蔗糖密度梯度纯化，SDS－PAGE显示病毒结构蛋白的相对分子质量24000，19500，16000。免疫转印可见3条结构蛋白均能被PRRSV美洲株高免血清识别。     

黄颡鱼病原嗜水气单胞菌分离鉴定及致病性研究

2015年江苏淮安地区养殖黄颡鱼暴发出血性肠炎。从濒死鱼肠组织和腹水中分离纯化出2株细菌,通过16S rRNA进化树分析显示,这2株菌与气单胞菌属的嗜水气单胞菌亲缘关系较近。致病性试验显示,2株菌对健康黄颡鱼具有较强的致病性,病原菌浓度达到5×10~4CFU/m L时,死亡率在40%~50%,病原菌浓度达到5×10~8CFU/m L时,死亡率在90%~100%。药敏试验显示,分离到的2株菌都对依诺沙星、头孢曲松、舒巴坦、恩诺沙星敏感。确定了淮安地区暴发的黄颡鱼出血性肠炎病原为嗜水气单胞菌,对黄颡鱼健康养殖和疾病防控具有重要意义。