牛羊朊蛋白基因（PRNP）多态性与抗病性的研究进展

 朊蛋白（PRNP）是近年来造成人和部分哺乳动物传染性海绵状脑病(TSE)的主要根源,该基因的多态性显著影响了人和动物对TSE的易感性或抗病性。本文分析了朊蛋白基因及其编码蛋白的结构与功能;简要介绍了绵羊基因编码区突变与致病性的关系;系统分析了牛科动物启动子区域内23bp的插入/缺失、第一内含子区域内12bp的插入/缺失及其与疯牛病（BSE）抗病性的作用机制;全面总结了全球已经报道的牛科动物12和23bp插入/缺失的等位基因与单倍体频率,评价了其发病的可能性。该研究将为牛的分子育种提供指导。     

利用PRNP-/-羊制备朊蛋白多克隆抗体及其特性分析

【目的】利用朊蛋白双基因敲除（PRNP-/-）羊制备朊蛋白多克隆抗体,并对其特性进行分析。【方法】构建山羊朊蛋白（PrP）原核表达载体,转入大肠杆菌并诱导表达,纯化获得羊PrP;将获得的PrP免疫PRNP-/-山羊,制备朊蛋白特异性的多克隆抗体;并对获得的朊蛋白多克隆抗体进行ELISA及Western-blot检测。【结果】获得了大量的朊蛋白特异性抗血清,间接ELASA检测抗血清中朊蛋白多克隆抗体的效价为25600;Western-blot检测显示所制备抗体不仅可以识别鼠、牛、羊脑组织内源性朊蛋白,而且能识别鼠脑组织内朊病毒。【结论】PRNP-/-转基因山羊可用于制备大量高亲和力朊蛋白多克隆抗体,获得的抗体可用于多种动物朊蛋白及朊病毒类疾病的检测。     

疯牛病的研究进展

疯牛病(Bovine Spongiform Encephalopathy,BSE)是一种严重危害畜牧业和人类健康的传染性疾病,该病以侵害中枢神经系统为特征.本文就疯牛病病原、发病机理以及检测方法的研究进展作一综述.     

英国发现一种蛋白质对形成疯牛病起关键作用

<正>据英国研究人员说,他们发现一种蛋白质在疯牛病形成过程中起着关键性作用,如能研制出针对这种蛋白质的药物,将有助于开发治疗疯牛病以及相关人类疾病的新方法。英国利兹大学研究人员在报告上说,他们发现一种     

中国实验小型猪朊蛋白基因的克隆与序列分析

根据已发表的猪朊蛋白基因（PRNP）序列设计特异性引物，进行PCR直接扩增，得到了中国实验小型猪（CEMP）的朊蛋白基因（PRNP），将其克隆到pGEM-TEasy载体中。序列分析表明上述CEMP的PRNP基因ORF区全长为774bp，编码257个氨基酸的前体蛋白，分子质量约为28．3ku，其PRNP序列与已发表的猪PRNP序列（L07623）差异微小，仅在第4位氨基酸残基处有变异（Ser→Asn）；绘制CEMP与其他15种属动物朊蛋白的氨基酸序列进化树发现，CEMP与多种哺乳动物朊蛋白的氨基酸序列遗传距离比较接近，与水貂最近。而与禽类朊蛋白氨基酸的遗传距离较远。     

PrP蛋白缺失小鼠单胺能神经递质及受体mR-NA表达量的变化

以C57BL/6野生鼠及Pr Pc蛋白敲除小鼠为研究对象,采用荧光定量PCR方法研究多巴胺(DA)、5-羟色胺及其特异性受体的mRNA表达量在脑中的变化规律。结果表明:Pr Pc蛋白缺失小鼠脑中5-HTR-1A,5-HTR-1B,5-HTR-2A,5-HTR-2C,DA显著高于野生鼠;5-HT,DR1,DR2,DR3,DR4显著低于野生鼠。说明Pr Pc蛋白对中枢神经系统有着重要的调节作用。     

疯牛病简介

医学上称疯牛病为牛脑海绵状病，简称BSE。1986年首次在英国报刊上报道。10年来，这种病迅速蔓延，英国每年有成千上万头牛患这种神经错乱、痴呆、而后死亡的病。现已证明疯牛病是由于健康牛食入含有致病性朊粒的人工蛋白质饲料所致，这种人工蛋白质饲料含有病牛、病羊的脑和脊髓等脏器成分。人的克一雅氏等病例是由于人吃了患病牛的牛肉及其制品以及牛脑、脊髓、扁桃体、胸腺、脾脏和小肠而传染的。     

CdSe/ZnS核壳型量子点标记朊蛋白的研究

利用组氨酸与锌离子的特异性结合,用水溶性CdSe/ZnS核壳型量子点标记朊蛋白(PrPC).研究了量子点标记朊蛋白的荧光光谱、琼脂糖凝胶电泳以及二者结合比.标记后荧光强度增加两倍多,二者结合比为3∶1.这种方法能快速简便地实现朊蛋白的定位点标记,为进一步深入研究朊蛋白提供了一种新的标记手段.     

细胞型朊蛋白PrP~C与浮舰蛋白flotillin功能的研究进展

朊蛋白和脂筏是当今研究的热点。细胞型朊蛋白(PrPC)能够通过构象转变生成致病型的朊病毒(PrPSc),导致海绵状脑病的发生,但是目前关于PrPC的转变机制还不清楚。PrPC也是重要的信号转导蛋白,引发众多的信号转导事件。Flotillin属于新被命名为SPFH(stomatin/prohibitin/flotillin/HflK/C)的蛋白家族,是重要的脂筏标识性蛋白,它们不仅被动地担当着非胞膜窖脂筏的脚架,为蛋白质的相互作用和蛋白质复合体的组装以及信号转导提供平台,而且本身还主动地扮演着信号蛋白的角色,在许多的细胞事件中发挥重要作用。PrPC与flotillin能够发生相互作用,flotillin蛋白为PrPC的跨膜信号转导和PrPC转变成PrPSc提供了环境。本文重点综述了近5年来关于PrPC和flotillin蛋白功能的研究进展,尤其是信号转导方面的研究。     

利用表面等离子共振技术检测牛奶中的朊蛋白

利用生物传感器——表面等离子共振传感器建立在活体动物中检测朊蛋白的方法,依据抗原—抗体特异性原理检测牛奶中朊蛋白。结果表明:应用表面等离子共振技术进行检测,1 h以内即可达到在缓冲液中标准最低检测限30 ng/mL的水平,牛奶样品的最低检测限是120 ng/mL。     

抗朊蛋白单克隆抗体的免疫学特性研究

以牛、羊重组朊蛋白(PrP)、正常牛、羊的脑组织匀浆、牛海绵状脑病(BSE)及羊痒病阳性的脑组织匀浆及切片为抗原,测定9株抗朊蛋白单克隆抗体的ELISA、免疫印迹及免疫组化等免疫学反应特性.结果表明:5株单抗可用于BSE及羊痒病的ELISA、免疫印迹检测;3株单抗可用于BSE及羊痒病的免疫组化检测;1株单抗在免疫印迹试验中只与羊痒病PrP~(Sc)的核心片段反应,结合该株单抗所识别的抗原表位PrP第78～93氨基酸(aa),证实BSE与羊痒病PrP~(Sc)的蛋白酶K消化位点存在差异.     

杯伞(Clitocybe sp.)培养条件Box-Behnken法优化研究

 在Plackett-Burman试验设计结果基础上，采用Box-Behnken响应曲面法(response surface methodology, RSM)对影响杯伞(Clitocybe sp.) AS 5.112发酵胞外多糖与生长的关键培养条件(培养温度、时间和装液量)进行了探讨。结果表明，在培养温度为24.3～25.8℃、时间为9.7～10.2 d和装液量为76.0～90.0 ml条件下，每毫升发酵醪可获得 1 253.00 ?g胞外多糖；而在培养温度为23.8～24.8℃、时间为9.6～10.3 d、装液量为71.0～98.0 ml范围内，每毫升发酵醪可获得8.32 mg菌丝生长量。通过对胞外多糖曲面方程和菌丝干重二次多项回归方程解逆矩阵得知，在培养温度、时间和装液量分别为25.0℃、9.9 d和83.4 ml时，杯伞AS 5.112胞外多糖的最大预测值为1265.45 ?g·ml-1发酵醪，在上述自变量分别为24.4℃、9.9 d和87.1 ml时，菌丝浓度可达8.50 mg·ml-1发酵醪；在24.5℃、9.9 d和84.7 ml的条件下，每毫升发酵醪可同时获得1 261.60 ?g胞外多糖和8.47 mg菌丝量。验证试验证实了该方程的预测值与实际值之间具有较好的拟合度。     

单抗介导牛海绵状脑病免疫组化检测方法的建立及其应用

 中国鲁西黄牛重组PrPc成熟蛋白免疫PrPc基因敲除小鼠，利用淋巴细胞杂交瘤技术，经免疫组织化学试验筛选出单抗4C11可特异识别牛海绵状脑病标准阳性牛脑样品上PrPSc核心片段。以单抗4C11为核心试剂，建立了单抗介导牛海绵状脑病免疫组织化学检测方法，并已颁布成为中华人民共和国国家标准GB/T19180-2003（牛海绵状脑病诊断技术）。已应用于中国牛海绵状脑病的持续监测，至2002年底共检测了全国各地3344份牛脑样品，结果全为阴性，且每批次所设的阳性对照样品检测结果均呈阳性，与Roche公司单抗6H4检测结果的符合率为100％。     

Protein A磁珠检测朊病毒方法的建立

建立Protein A磁珠法检测朊病毒,将朊病毒抗体IH2包被后的Protein A磁珠与蛋白酶K消化过的攻毒小鼠脑组织匀浆液混合,经免疫沉淀缓冲液温和洗脱杂蛋白,再经0.2M甘氨酸将目的蛋白洗脱并且利用聚丙酰胺凝胶电泳检测。通过聚丙酰胺凝胶电泳检测出25KD的目的蛋白带,经与正常未消化的朊蛋白条带相比较,证实检测出朊病毒。Protein A磁珠具有高效特异的与抗体IgG结合的特点,与多克隆抗体混合后可有效结合IgG。该方法较免疫组织化学和Western-blot技术简便快速,且磁珠可以回收再使用,使成本低廉。     

Impacts of bovine spongiform encephalopathy and avian influenza on U.S. meat demand

This paper examines the U.S. meat demand impacts of the announced outbreaks of bovine spongiform encephalopathy(BSE) and avian influenza(AI). Findings indicate that beef and chicken demand was negatively affected by BSE and AI disease outbreaks. Specifically, in the short run, U.S. consumers shift demand due to both outbreaks but more so due to domestic disease outbreaks than for outbreaks occurring overseas-the impact of U.S. AI outbreaks is about 0.5% for beef and the impact of U.S. BSE cases is around –0.42% for beef and 0.4% for pork, respectively. Regarding the BSE shock on meat demand, there is a high rate of beef demand adjusted from disturbance to the long-run equilibrium and a lower adjustment rate for chicken demand because of the repeated outbreaks of AI worldwide. In the long run, information related to severe, persistently recurring overseas animal disease outbreaks changes U.S. consumers' meat consumption patterns. Although effects of animal diseases on U.S. meat demand were statistically significant, the magnitudes were small-the impact of WHO reported human death numbers for AI is 0.005% for beef, –0.002% for pork, and –0.006% for chicken and the impact of U.S. BSE cases is 1.1% for pork and –0.7% for chicken.     

Emerging diseases. Hunt for mad cow in sheep reassuring

Experts on brain-riddling spongiform diseases have grown steadily more uneasy over signs that so-called mad cow disease or bovine spongiform encephalopathy (BSE), which is linked to a lethal human illness, may be lurking in sheep. A study in the 10 August issue of Nature now offers evidence that BSE is not rampant in sheep after all, although scientists are far from ready to let their guard down.     

Human prion protein with valine 129 prevents expression of variant CJD phenotype

Variant Creutzfeldt-Jakob disease (vCJD) is a unique and highly distinctive clinicopathological and molecular phenotype of human prion disease associated with infection with bovine spongiform encephalopathy (BSE)-like prions. Here, we found that generation of this phenotype in transgenic mice required expression of human prion protein (PrP) with methionine 129. Expression of human PrP with valine 129 resulted in a distinct phenotype and, remarkably, persistence of a barrier to transmission of BSE-derived prions on subpassage. Polymorphic residue 129 of human PrP dictated propagation of distinct prion strains after BSE prion infection. Thus, primary and secondary human infection with BSE-derived prions may result in sporadic CJD-like or novel phenotypes in addition to vCJD, depending on the genotype of the prion source and the recipient.     

种公牛感染温氏枝原体后的生殖健康检测研究（英文）

[目的]研究种公牛感染温氏枝原体后的生殖健康。[方法]通过血常规和生殖健康检测等方法对药物治疗前后种公牛的血液和精液品质进行试验研究。[结果]在未给予磷酸伯氨喹治疗前,病牛有轻度的贫血,血液涂片中可见大量的温氏枝原体;病牛阴囊壁肿大,睾丸变软,精液品质下降,精子活力降低,初级和次级畸形的精子比例增大;药物治疗后,温氏枝原体很快从血液中消失,临床症状逐渐缓解,顺利通过了1个月后生殖健康检测。[结论]该研究为进一步研究温氏枝原体与公牛生殖机能下降之间的关系奠定了基础。     

流产布氏杆菌病的发病机制

牛布鲁氏菌病是一种非常重要的世界流行的动物传染病。在发展中国家流行范围广,经济损失严重。该病的病原是一种革兰氏阴性球杆菌,能够引起怀孕母牛胎盘坏死及间质性乳腺炎,新生小牛多患有纤维素性肺炎。就流产布鲁氏菌的致病性、对吞噬细胞和非吞噬细胞的侵袭力、在胞内的生存机制及阻碍吞噬细小体-溶酶体的粘附进行综述,尤其对获得性免疫反应如何抵抗布鲁氏菌感染作了重要的阐述。