脂肪细胞膜免疫研究进展

脂肪细胞膜免疫技术作为一种高效、安全、作用持久的方法,用于降低肉品脂肪含量,并已在大鼠、绵羊和猪的体脂调控方面取得了显著成效。对脂肪细胞膜免疫方法、作用机理以及脂肪细胞膜免疫中存在的问题进行了综述,并展望了脂肪细胞膜免疫技术的发展方向和应用前景。     

山羊抗猪脂肪细胞膜蛋白抗体的制备与ELISA鉴定

猪屠宰后,迅速采取其皮下脂肪在３７℃下的膜提取液中的匀浆,于３７℃温箱中孵育３０ｍｉｎ后,用差速离心法和高速离心法提取脂肪细胞膜蛋白,并作ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析脂肪细胞膜蛋白与其它组织细胞膜蛋白 差异。从电泳图上看出,脂肪细胞有很多特异膜蛋白,也有一些与其它组织细胞膜蛋白相似的条带。膜蛋白与佐剂充分乳化后主动免疫３只山羊,免疫后７０ｄ取因清,用ＥＬＩＳＡ检测抗体效价为１：６４００。同样,用ＥＬＩＳＡ测定抗体与其它组织细胞膜的交叉反应,结果显示：抗猪脂肪细胞膜抗体与其它组织细胞膜有交叉反应,但反应性不高。     

脂肪细胞膜蛋白免疫研究进展

为了降低生产成本，满足消费对肉品的更高要求，一直在探索促进动物生长和提高胴体品质新方法的学提出了一种非激素途径的免疫学方法－脂肪细胞膜抗体免疫方法，目前这一高效，安全和作用持久的方法已日益引起重视。     

脂肪细胞膜蛋白抗体免疫对猪胴体品质调控的研究

为了降低生产成本并满足消费者对低脂肪的需求,科学家开始寻求一种新的、可行的、更有效的办法来降低动物脂肪。本文对非激素手段———脂肪细胞膜蛋白抗体免疫对猪胴体品质进行的调控及抗脂肪细胞膜蛋白抗体免疫的原理、作用机制、应用效果进行了全面阐述,并指出了尚需要解决的学术性和技术性关键问题.     

脂肪细胞膜蛋白抗体对猪胴体品质的影响

提取猪脂肪细胞膜蛋白，通过山羊制备成脂肪细胞蛋白抗体，用此抗体被动免疫二元杂交公猪。试验分皮下免疫和腹腔免疫两个试验组，以及一个注射阴性血清的对照组。结果显示，两试验组体重比对照组分别增加６２１ ％ 和７９９ ％ ，料肉比分别降低６１５ ％ 和９８５ ％ ；胴体脂肪率分别比对照组下降１１９６ ％ 和８０３ ％ ，瘦肉率分别升高２３８ ％ 和３１１ ％ 。此外，免疫对猪某些器官如肝、脾有一定影响。     

猪脂肪细胞膜的检测及对小白鼠生长的影响

采用猪脂肪制备脂肪细胞膜抗原 ,免疫兔子制备抗血清 ,注射小白鼠 ,具有促进生长的作用。利用蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS -PAGE)可分离膜蛋白 ,用酶联免疫吸附试验 (ELISA)可快速、简单地检测到抗体。     

脂肪细胞膜抗血清对猪胴体品质和肉品质的影响

将36头5周龄的断奶上海大白猪随机分成6组.对照组C1和C2、皮下免疫试验组S1和S2、腹腔免疫试验组A1和A2,每组6头猪.试验周期为11周和17周.试验组A1和A2腹腔注射5.0 ml/kg BW山羊抗猪脂肪细胞膜抗血清,试验组S1和S2皮下注射5.0 ml/kg BW山羊抗猪脂肪细胞膜抗血清,对照组C1和C2以相同剂量注射正常山羊血清.11周末和17周末屠宰结果显示:①各试验组猪板油重和背膘厚都显著低于对照组(P＜0.05);11周末,与对照组相比,试验组S1和A1中猪眼肌面积均显著升高;17周末,腹腔免疫组猪眼肌面积显著高于对照组(P＜0.05).②11周末,腹腔免疫组猪半腱肌和里脊、皮下免疫组猪背最长肌和里脊中脂肪含量均明显低于对照组(P＜0.05);17周末,与对照组相比,腹腔免疫组猪半腱肌中脂肪含量显著下降(P＜0.05).③11周末,腹腔免疫组猪背最长肌和里脊中蛋白质含量显著高于对照组(P＜0.05);17周末,各试验组背最长肌和里脊中蛋白质含量与腹腔免疫组半腱肌中蛋白质含量均显著高于对照组(P＜0.05).表明,山羊抗猪脂肪细胞膜被动免疫具有较好改善猪胴体品质和肉品质的作用.     

饲料脂肪水平对锦鲤体色和几项免疫指标的影响

研究了在螺旋藻添加的质量分数为12%时,饲料脂肪水平（5.36%、7.74%、10.52%、12.85%和15.45%均为质量分数）对红白锦鲤Ornmmental carp幼鱼（初始体质量为5.85 g±0.19 g）体色和免疫指标的影响。每组设3个重复,每个重复组饲养10尾锦鲤,表观饱食投喂60 d。结果表明：当饲料中脂肪水平为10.52%时,试验鱼皮肤中类胡萝卜素含量显著高于其它试验组（P〈0.05）,体表红质的a＊值最高;试验鱼肝胰脏中超氧化物歧化酶、过氧化氢酶的活力随脂肪水平的升高而下降,饲料脂肪水平对碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶等免疫指标没有产生显著影响（P〉0.05）。上述研究说明,在配合饲料中添加一定量的螺旋藻时,锦鲤着色效果最好时的适宜饲料脂肪水平为10.52%,提高饲料脂肪水平不会持续提高锦鲤对螺旋藻的利用效率。     

温度和饲料脂肪水平对松浦镜鲤免疫及抗氧化能力的影响

在实验室条件下,进行了不同温度(16、23、30℃)与不同饲料脂肪水平(5％、8％、11％、15％)对松浦镜鲤Cyprinus carpio Songpu mirror幼鱼(体质量为5.51 g±0.05 g)免疫和抗氧化能力的影响试验.试验在36个盛水150 L的循环水族箱中进行,共饲养70 d.结果表明:1)16℃时,肝胰脏超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性均随饲料脂肪水平的增加而降低,低脂组(5％、8％)显著高于高脂组(11％、15％)(P＜0.05);15％脂肪组肝胰脏丙二醛(MDA)含量显著高于8％脂肪组(P＜0.05),低脂组(5％、8％)脾脏MDA含量显著高于15％脂肪组(P＜0.05).2)23℃时,肝胰脏溶菌酶(LYZ)活性随着饲料脂肪水平的增加先升高后降低,15％脂肪组肝胰脏LYZ活性显著低于8％脂肪组(P＜0.05),5％和15％脂肪组肝胰脏SOD活性显著低于8％和11％脂肪组(P＜0.05);肝胰脏MDA和脾脏SOD、MDA均随饲料脂肪水平的增加显著升高(P＜0.05).3)30℃时,15％脂肪组肝胰脏LYZ活性显著低于其他组(P＜0.05),5％脂肪组血清IgM质量浓度显著低于11％脂肪组(P＜0.05).4)各温度下,饲料脂肪水平对松浦镜鲤幼鱼脾脏LYZ、血清ALP、C3、c4以及脾脏CAT活性均无显著影响(P＞0.05);5)各饲料脂肪水平下,温度都对松浦镜鲤幼鱼免疫和抗氧化指标均产生了显著影响(P＜0.05).综合以上结果,从鱼体免疫角度推测松浦镜鲤幼鱼在16℃和23℃时饲料脂肪添加量分别不宜超过8％和11％.     

动物脂肪代谢与调控

动物脂肪代谢受到多种因素的调控 ,碳水化合物、蛋白质、多不饱和脂肪酸和共轭亚油酸等营养因素 ,生长激素、胰岛素、胰岛素样生长因子、β-肾上腺素能受体兴奋剂、腺苷及其核苷酸和肿瘤坏死因子 - α等激素都对脂肪代谢产生影响。动物脂肪细胞膜免疫也对脂肪代谢产生调控作用     

苦杏仁资源加工与综合利用研究进展

苦杏仁是一种优良的药食两用资源,具有丰富的营养和较高的经济利用价值。苦杏仁及其加工品的市场需求量日益增大,而我国杏仁产量的80%左右仍以原料形式售卖,未充分发挥苦杏仁加工增值率大的优势。主要原因在于苦杏仁加工行业集中度低,规模化的产品加工企业较少、技术落后,对苦杏仁资源的综合加工利用程度低,导致产品附加值低、功能性成分的损失大和环境污染严重。因此,如何有效地利用现代食品加工技术对苦杏仁进行综合加工利用,减少资源浪费、提高其附加值是苦杏仁加工行业面临的瓶颈。本文在梳理大量文献的基础上,首先介绍了苦杏仁去皮、脱苦及干制加工研究现状及存在问题;随后又对苦杏仁油、精油、蛋白和苦杏仁苷等有效成分的提取分离研究现状进行了系统综述,并着重比较了各方法的优缺点和苦杏仁相关产品的开发利用情况,提出了合理建议,为高效综合利用苦杏仁资源,提高其加工附加值和促进苦杏仁产业良性发展提供借鉴。最后,对制约苦杏仁加工行业发展的主要原因进行了分析并提出了解决思路和展望：一是建议后期应采用现代食品绿色去皮技术替代传统沸水烫漂去皮法,加强去皮废水中的活性成分的回收利用和皮的高值化开发利用研究;二是采用超声波等新技术实现苦杏仁的快速高效脱苦,减少苦杏仁中营养成分的损失和脱苦废水排放;三是创新技术努力实现主要成分同时综合提取利用,即在提取苦杏仁油的同时抑制苦杏仁苷酶的活性并防止蛋白过度变性和苦杏仁苷的降解,使苦杏仁中各主要成分互不影响,从而得到最大化综合利用,并将此技术早日推广应用到实际生产中。总之,对于苦杏仁的开发利用应注重其加工副产物的回收及高值化利用和产品的创新研究,同时提高杏仁产业的融合度,进而提升其加工产品的市场价值和经济效益,最终促进杏仁行业良性发展。     

中国辽宁省和美国俄亥俄州育成大豆品种形态、产量和品质性状的比较研究

【目的】比较中国辽宁省和美国俄亥俄州不同年代育成大豆[Glycine max（L.）Merr.]品种的形态、产量和品质性状,及其对施肥水平的响应,明确大豆主要农艺性状随产量改良的演变趋势。【方法】以祖先亲本相同（均来自Williams和Amsoy）分别在中国辽宁省和美国俄亥俄州（相同纬度）育种程序下育成的代表性品种为试材,于2011、2013和2014年在大田条件下,采用完全随机设计,以磷酸二铵为种肥,设3个施肥水平（0、150 kg·km^-2、300 kg·km^-2）,测定大豆成熟期的农艺性状、籽粒产量和品质。【结果】随着大豆产量的改良,俄亥俄品种和辽宁品种的株高降低、节间长度缩短、倒伏指数下降、收获指数增加;俄亥俄品种的分枝数和结荚高度增加,而辽宁品种则下降。单株粒数的改良是俄亥俄品种产量增加的主要原因;而辽宁品种增产的主要原因是百粒重的增加。在品种选育进程中,俄亥俄品种的籽粒蛋白质含量下降,脂肪含量升高;辽宁品种的蛋白质含量增加,脂肪含量无显著变化。与相同年代育成的辽宁品种相比,俄亥俄品种株高矮,节间长度短,抗倒伏能力强;单株荚数、单株粒数、收获指数以及产量明显增加;蛋白质含量极显著降低,而脂肪含量极显著升高。随着施肥水平的增加,俄亥俄品种的株高、节间长度和倒伏指数保持相对稳定,而辽宁品种的增幅较大。俄亥俄品种的籽粒产量随施肥水平的增加而增加,辽宁品种则在中肥条件下表现最佳。相关分析和通径分析表明,籽粒产量与株高、节间长度和倒伏指数呈极显著负相关;与单株粒数和收获指数呈极显著正相关,且株高、单株粒数和收获指数对产量的直接作用较大。【结论】在大豆品种产量改良过程中,俄亥俄品种和辽宁品种的株高和节间长度均呈下降趋势,植株的抗倒伏能力得到增强,收获指数提高,但俄亥俄品种的改良程度大于辽宁品种。俄亥俄品种产量的改善多得益于单株粒数的增加,而辽宁品种则得益于百粒重的提高。俄亥俄品种的耐肥性得到增强,其株高和倒伏指数在不同施肥水平下保持稳定,而辽宁品种则随施肥水平的增加而增加。     

雏鸡对新城疫疫苗的免疫应答及其免疫保护机理

本实验共用240只1日龄健康雏鸡,分别于14,14和28日龄点眼滴鼻接种 Lasota 疫苗,在免疫后不同时期,采取实验鸡血液、泪液、肠液、气管液和胆汁、脾脏、法氏囊、胸腺、盲肠扁桃体、丕氏斑、十二指肠及哈德尔腺、支气管,检测了相应的 IgG,IgA,IgM 和 HI 滴度。T,B 细胞数量和功能,淋巴细胞数量以及浆细胞和酸性α-萘酚酯酶阳性 T 细胞(ANAE~+T)数量的动态变化。实验结果,雏鸡免疫后,脾脏、法氏囊和胸腺中 ANAR~+T 细胞与浆细胞显著增加,消化道和呼吸道相关局部免疫组织中的浆细胞、ANAE~+T 细胞数量也明显上升;与此相应,血液 T 细胞和脾脏 B 细胞免疫功能显著增强;血液 T,B 细胞、淋巴细胞数量显著升高;血清、泪液、气管液、胆汁和肠液中的 IgG,IgA,IgM 含量和 HI 滴度均程度不同地增加。免疫鸡脾脏、盲肠扁桃体和丕氏斑的淋巴小结数量增多,直径增大。这些表明免疫鸡不仅全身和局部的体液免疫反应,而且其细胞免疫应答也显著增强。雏鸡新城疫二免后,其免疫器官和局部免疫组织的浆细胞和 ANAE~+T 细胞进一步增多,血液 T 细胞和脾脏 B 细胞免疫功能也增强;血液 T 细胞。B 细胞与淋巴细胞数及 IgG,IgA,IgM含量和 HI 滴度程度不等地增加;泪液、气管液、肠液和胆汁的前述指标均升高,说明雏鸡 ND二免产生了显著的体液免疫和细胞免疫增强作用。新城疫强毒攻击后,对照鸡免疫器官组织和相应体液中的免疫指标均明显降低。呈现全身和局部免疫机能衰竭,全部死亡。与此相反,二免鸡免疫应答水平进一步提高,明显优于一免鸡,获得可靠的免疫保护,这与其显著增强的全身和局部细胞免疫和体液免疫反应密切相关。     

新业态和新功能视角下农林文旅康产业融合发展模式与机制研究——以山西省泽州县为例

为进一步促进县域农业经济转型升级、农业结构优化、农民收益提升。本研究基于农林文旅康产业间的组合,围绕农林文旅康产业分化、融合和整合形成的组织形态,构筑组织形态的新业态和新功能。农林文旅康产业融合是农业、林业、文化产业、旅游产业和康养产业之间相互渗透、交叉和融合,5个产业之间相互融合推动新业态和新功能的发展。本研究以山西省泽州县为研究对象,围绕其资源和地形特点的发展基础,在新业态和新功能视角下,构建出“平川+现代农业主导”型、“丘陵+文化旅游主导”型和“山区+森林康养主导”型的发展模式以及新型农业经营主体培育机制、利益联结强化机制、政策保障机制和培育延伸拓展机制的发展机制。本研究对推动农林文旅康产业融合的新业态和新功能发展具有实际指导作用。     

配方肥配施锌肥和硫肥对小麦的提质增效作用

为探明配方肥配施锌肥和硫肥对小麦产量和品质的影响，在安徽省小麦主产区宿州的西二铺村和湖町村分别设置了农民习惯施肥（CK）处理、配方肥处理、配方肥分别配施锌肥和硫肥处理以及同时配施锌肥和硫肥处理的田间试验。结果表明，与农民习惯施肥相比，配方肥显著增加了小麦产量，配方肥配施锌肥和硫肥进一步增加了小麦产量，进而提高小麦经济效益；同样，配方肥配施锌肥和硫肥提高了小麦氮、磷、钾肥偏生产力，平均增幅达到35.0%、107.0%、99.1%。配方肥配施锌肥和硫肥增加了籽粒锌和硫的积累量，对籽粒锌含量有一定促进作用，对籽粒硫含量影响不明显。不同处理小麦籽粒蛋白质含量及其组分、淀粉含量及其组分差异均不显著，但增施锌肥和硫肥提高了小麦籽粒的谷醇比，降低了直支比，有利于小麦品质的提高。因此，在土壤锌和硫含量较低的地区，配方肥配施锌肥和硫肥能促进小麦籽粒产量和品质的提高。     

基于IDE的台湾休闲农业发展分析

创新创业是发展的动力之源,对于推动经济结构调整、促进区域发展具有重要意义。创新支持创业系统(Innovation Driven Entrepreneurship, IDE)重视创新与创业的协同推进,强调基于创新的创业以及创业对创新的互动作用,通过资源、环境、政策的协同设计与开发,实现更持久的发展活力。我国台湾休闲农业在长期发展中,形成政府、市场、学界、业界等多主体互促,共推休闲农业发展的实践。基于IDE发展理念,从创新创业系统的识别与构建、利益相关者的构成与参与、发展政策措施的形成与推进等角度,解析台湾休闲农业创新驱动创业的实践模式及路径。台湾休闲农业IDE发展模式以创新能力的培育、创业能力的拓展为核心,用基础设施、政策制度、社会环境为支撑,发挥政府、企业、学界、业界、资本等利益相关者的作用,合力推进休闲农业发展。IDE框架能够充分实现休闲农业利益相关者互动与协作,释放区域发展潜力,形成新的发展路径,促进产业创新发展,提高居民福祉。     

间作大蒜对小麦根际土壤微生物数量及土壤酶活性的影响

以商麦156为供试小麦品种,分别于2016年9月17日、10月1日和10月15日定植大蒜进行小麦间作大蒜试验,研究间作大蒜对小麦根际土壤微生物数量及土壤酶活性的影响,探寻小麦间作大蒜的最佳时期,探究同一处理时期内不同生育期间作大蒜下的小麦根际土壤微生物和酶活性的变化规律。结果表明：在任一处理时期间作大蒜的小麦根际细菌数量均极显著（P<0.01）高于对照,且与大蒜定植时长正相关,至140 d时最大,W1G1（小麦播种前14 d定植大蒜）、W2G2（小麦与大蒜同一时间播种和定植）、W3G3（小麦播种后14 d定植大蒜）较对照CK（仅播种小麦）分别增加83.64%、64.21%和44.94%。随生育期的后延,对照和处理真菌数量均呈逐渐上升趋势,但在同一处理时期内各处理真菌数量均低于小麦单作,且大蒜定植时长与真菌数量负相关。硝化细菌与氨化细菌变化规律类似,随处理时间的延长均表现先升高后降低的单峰变化趋势,对照与处理间差异达到极显著水平（P<0.01）,处理间达到显著水平（P<0.05）,且均在120 d时达到最大值,随后开始降低。在大蒜间作期内,对照和处理的小麦根际土壤磷酸酶和脲酶活性变化规律相同,均随生育期的延长而升高,至160 d时W1G1、W2G2、W3G3磷酸酶和脲酶活性较对照分别提高27.59%、23.45%、20.69%和30.56%、27.78%、16.67%。在140 d内,过氧化氢酶活性均随生育期的后延而升高,至140 d时达到最大值,之后过氧化氢酶活力开始降低,在80、100、120、140 d和160 d时,W1G1较对照分别提高18.19%、29.21%、40.51%、48.78%和62.71%。可见,间作大蒜定植时期越早,小麦根际细菌、硝化细菌和氨化细菌数量越多,真菌数量越低,磷酸酶、脲酶和过氧化氢酶活力越高。     

中美大豆Ⅲ熟期组代表品种根系形态和活力的比较研究

【目的】研究中美大豆（Glycine max（L.）Merr.）Ⅲ熟期组不同年代育成代表性品种根系的形态和活力,及其对施肥水平的响应,试图揭示大豆品种根系性状随产量改良的演变趋势。【方法】以祖先亲本相同（均来自Williams和Amsoy）,分别在中国辽宁省和美国俄亥俄州（相同纬度）育种程序下育成的代表性品种为试材,于2012和2013年盆栽条件下,采用随机区组试验设计,在大豆幼苗期（V2）将磷酸二铵水溶后均匀施入盆中,施肥量设3个水平,分别为0、150 mg·kg^-1干土、300 mg·kg^-1干土。在大豆苗期（V4）、开花期（R2）、鼓粒中期（R6）和鼓粒末期（R7）取样,于植株子叶节处剪断,套上内置脱脂棉的离心管,利用吸液差重法测定根系伤流量;用Epson Expression 10000XL仪扫描洗净的根系,使用WinRhizo2012软件分析扫描图像,测定根系总长度、根系总表面积和根毛数量;采用氯化三苯基四氮唑法（TTC法）测定根系活力;将扫描完毕的根系在105℃下杀青30 min,80℃下烘干至恒重,测定根系干重;在成熟期测定单株籽粒产量。【结果】随着大豆品种产量的遗传改良,俄亥俄品种和辽宁品种的根系总长度、根系总表面积、根毛数量、根干重、根系伤流量和根系活力的改良趋势一致,均随产量的改良呈递增趋势,特别是在鼓粒中期和鼓粒末期,根系形态和活力等指标随育成年代增加而增幅较大。相同年代品种相比,俄亥俄品种根系总长度、根系总表面积、根毛数量、根系伤流量和根系活力的改良程度大于辽宁品种。随着施肥水平增加,俄亥俄当代品种和辽宁当代品种在中肥（150 mg·kg^-1干土）和高肥（300 mg·kg^-1干土）水平下根系性状值均表现较高,而俄亥俄中期品种和辽宁中期品种在中肥水平下表现最佳。在相同施肥水平下,当代品种根系形态和活力等指标大于共同亲本和中期品种。相关和通径分析表明,苗期、开花期、鼓粒中期、鼓粒末期根系总长度、根系总表面积、根毛数量、根干重、根系伤流量、根系活力均与单株籽粒产量呈极显著正相关,其中根系活力与单株籽粒产量相关性最为密切。【结论】在大豆品种产量改良过程中,俄亥俄品种和辽宁品种根系形态和活力等指标的改良趋势相同,其根系总长度、根系总表面积、根毛数量、根系伤流量和根系活力均随产量改良呈递增趋势,但俄亥俄品种的改良程度大于辽宁品种。俄亥俄品种和辽宁品种根系的耐肥性均得到增强,两地区当代品种的根系性状值在中肥和高肥条件下均表现较高,而中期品种在中肥水平下表现最好。     

新中国成立以来我国粮食生产变动规律研究及趋势展望

分析了我国粮食生产的变动规律,并对未来发展趋势提出展望。结果表明：新中国成立以来,我国粮食产量在波动中不断增长,单产发挥了重要作用。品种结构根据市场需求的变化而不断优化,主产区不断北移,黑龙江成为名副其实的北大仓。粮食功能从仅仅满足温饱的食品过度到工业原材料,再到国际市场的重要贸易手段。对粮食的宏观管理政策则从短缺时期的紧缺管控到逐步市场化的紧平衡管控,再到丰年有余面向国际市场的战略应对。同时,我国粮食生产仍然面临资源紧缺,种粮积极性低,消费增加而质量标准提高以及国际保护主义兴起等众多问题与挑战。未来,我国粮食生产的战略安全地位将进一步上升,资源利用效率逐步提高,主粮的生产将平稳发展,小杂粮品种将得以多样化发展,而技术仍将是未来粮食生产的决定性因素。今后,要提高我国粮食安全保障水平,需进一步提高农民和地方政府种粮积极性,提高农民素质,支持企业投资粮食产业,进一步加强粮食科技研究与开发应用,促进粮食生产的绿色发展。     

烤烟漂浮育苗和移栽改进方法研究进展

根据烤烟漂浮育苗和移栽改进方法的主要特征对其进行分类,比较分析了当前烤烟沙培育苗、浅水育苗、湿润育苗、水旱两段式壮苗培育和封闭式育苗技术的优缺点,以及小苗膜下移栽、高茎壮苗移栽和井窖式移栽技术的优缺点.介绍了各项技术的应用进展,提出烤烟漂浮育苗应在提高壮苗率的基础上,以资源节约型和环境友好型为方向,向精细化、快速化、轻简化发展.