马桑根瘤内生菌纯培养物的分离、回接及其生物学特性

多次采用根瘤切片法直接从野生的马桑根瘤中分离内生菌纯培养物均未获成功;但用同样方法从温室里人工接种形成的马桑根瘤中却分离到大量纯培养物。其中273株经盆栽回接后发现有24株能侵染结瘤;少数菌株还通过半固体斜面和珍珠岩盆栽回接成功。对10株纯培养物表型特性的研究表明,它们均具有Frankia的形态和培养特征;生理类型除有A、B两型外,尚出现有一类A、B混合型,其中凡属B型菌株的均能侵染结瘤,A型则不能,两株A、B混合型中有1株能结瘤,另1株却不能;碳、氮源利用特性和其它Frankia基本相似;细胞壁组分既有Ⅲ型也有Ⅱ型;全细胞鉴别性糖大多为木糖和半乳糖,少数菌株只含有半乳糖或木糖,或含有半乳糖、木糖和阿拉伯糖。DNA中G+C mol%为65%～74%。     

人工培养灵芝菌丝体中免疫活性成分初探

人工培养灵芝菌丝体用６０℃水抽提，上清为混合样品（１），用乙醇沉淀法使之分成醇溶（Ⅱ）与醇不溶两个组份。醇不溶组份经分析主要为一含氮多糖（Ⅲ），用样品１、样品Ⅱ及样品Ⅲ做动物实验，结果表明，含氮多糖（样品Ⅲ）免疫活性最强。利用ＳｅＰｈａｄｅｘＧ—２００柱层析测其ＭＷ为１４０，０００；气相色谱法分析，其含木糖、半乳糖、半乳糖醛酸及葡萄糖，氨基酸分析，其含Ｍｅｔ，Ｌｙｓ等十三种氨基酸，其中含赖氨酸等七种必需氨基酸。硫酸一蒽酮法测定其糖含量为７０％。     

毕赤酵母发酵不同单糖产乙醇的研究

以毕赤酵母CBS 6054(Scheffersomyces stipitis)为试验菌株,用葡萄糖和半乳糖2种六碳糖,木糖和阿拉伯糖2种五碳糖分别作为惟一碳源进行发酵试验,测定毕赤酵母在不同培养基中的生长曲线、糖消耗情况、产物乙醇生成情况,由此研究该菌株发酵不同单糖的能力以及对应的产乙醇的潜力。结果表明该菌株对葡萄糖和木糖的发酵能力较强,且两者发酵情况相当;发酵半乳糖的能力居中;发酵阿拉伯糖的能力较弱。乙醇产量从高到低依次是葡萄糖、木糖、半乳糖、阿拉伯糖。     

枸杞中性多糖的糖链结构分析

从枸杞子中分离纯化得到枸杞中性多糖，经气相色谱法和色谱－质谱法分析，该多糖由木糖、阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖、赤藓糖及少量岩藻糖和山梨糖等８种糖基组成，前５种糖基的摩尔比为１０：１：１：６．７：４．多糖呈分枝结构，主链包括１，４连接的葡萄糖、１，６连接的半乳糖、１，４或１，５连接的木糖，在１，４连接的葡萄糖上６位分枝形成侧链，侧链末端是木糖和半乳糖。此外，尚有含量较高的一种未知连接结构和少量其它连接。     

高温放线菌属两菌株的化学分类和分子分类研究

从云南温泉和火山口分离出两株嗜热放线菌YIM60013和YIM60032。对其形态、生理生化特性、细胞壁化学组分以及16SrDNA序列进行了研究，并与高温放线菌的已知种进行了比较，初步认为这是高温放线菌属的两个新种，分别命名为白色高温放线菌（Thermoactinomyces albus sp.nov）和云南高温放线菌（Thermoactinomyces yunnanensis sp.nov）。两个新种在气生菌丝和基内菌丝上均产生单孢子，纯细胞壁和全细胞糖分析表明含meso-DAP和半乳糖、阿拉伯糖、木糖及少量的葡萄糖。菌丝体自溶或非自溶，气生菌丝白色或灰色，碳源利用类型有所不同。     

1株野生蝉虫草的鉴定及其胞内和胞外多糖抗肝癌活性比较

【目的】对1株野外采集的蝉虫草进行分离和鉴定，分析比较其发酵菌丝体胞内和胞外多糖的抗肝癌细胞HepG-2活性及多糖的组成。【方法】通过形态学特征和ITS序列分析，对供试菌株进行鉴定；采用MTT法、细胞划痕试验，比较供试菌株菌丝体胞内和胞外多糖对人肝癌细胞HepG-2的抑制活性以及对人正常肝细胞LO2的毒性，并通过高效液相色谱法和凝胶渗透色谱法，比较分析2种多糖的成分及分子质量分布。【结果】根据菌株形态学特征和ITS序列分析，供试菌株为蝉虫草Cordyceps cicadae；其胞内和胞外多糖均可极显著抑制HepG-2细胞活性（P<0.01），半数抑制浓度（IC₅₀）值分别为3.23和0.45 mg/mL，细胞迁移率分别为38.72%和24.79%，提示胞外多糖比胞内多糖具有更强的抗肝癌细胞HepG-2活性；且2种多糖对人LO2细胞均无明显毒性；进一步分析发现，胞外多糖中半乳糖醛酸的含量是胞内多糖的23.53倍，其分子质量的94.1%集中在19.1～85.0 ku，胞内多糖中核糖是其特征性单糖，高分子质量多糖（>250.0 ku）分布占比明显高于胞外多糖。【结论】野生蝉虫草菌株发酵所产胞外多糖的抗肝癌细胞HepG-2活性较胞内多糖强，二者在单糖组成和分子质量分布上存在明显差异。     

木糖结晶母液发酵特性的研究

[目的]探讨木糖结晶母液发酵特性,为开发利用木糖结晶母液提供依据。[方法]利用酿酒活性干酵母,研究发酵过程中葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、半乳糖含量的变化以及木糖结晶母液糖组分和含量的变化。[结果]在发酵2 d以后,葡萄糖与半乳糖全部被转化,而木糖与阿拉伯糖浓度几乎不变。半乳糖的转化速度慢于葡萄糖。木糖结晶母液经12 d的发酵,葡萄糖完全转化,木糖没有明显变化,而阿拉伯糖色谱峰有所变化。发酵前,木糖结晶母液中含4种糖,木糖占56.6%;发酵后,含2种糖,木糖占81.2%。[结论]发酵后,木糖结晶母液中糖组成由4种变成2种,木糖纯度得到了很大提高。     

不同还原糖与小麦水解蛋白Maillard反应的比较研究

[目的]探讨还原糖种类对Maillard反应的影响。[方法]以小麦水解蛋白为混合氮源,分别与葡萄糖、果糖和木糖于相同条件下反应制备反应型香料,以铵态氮损失率为指标考察3种还原糖的Maillard反应活性,并对反应产物的醚溶性成分进行分析,同时对加入3种反应物的参比卷烟进行感官评价。[结果]3种还原糖与小麦水解蛋白的Maillard反应活性依次为木糖〉葡萄糖〉果糖;葡萄糖反应产物中主要含呋喃类化合物及2-乙酰吡咯,果糖反应产物中主要含取代吡嗪类化合物和呋喃甲醇,木糖反应产物中主要含呋喃类化合物等。[结论]果糖和木糖与小麦水解蛋白的反应产物可较好的改善参比卷烟的感官品质。     

若干双子叶与单子叶植物细胞壁果胶结构单糖组成特征研究

为了系统研究被子植物初生壁果胶结构单糖的组成成分及其与被子植物两纲分类的关系,结合单糖单一环式的衍生化方法,采用GC/MS测定22种被子植物初生壁果胶中单糖组分及含量,并对测得的结果进行主成分、t检验和香农 威纳指数分析。结果表明:被子植物细胞壁果胶由木糖、鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖7种单糖组成,其中鼠李糖、阿拉伯糖和半乳糖含量较高;岩藻糖和甘露糖含量极少。主成分分析筛选出决定22种被子植物间糖含量差异的5种果胶单糖分别为:木糖、阿拉伯糖、半乳糖、鼠李糖和葡萄糖。主成分二维图和t检验结果显示:可通过果胶单糖含量实现被子植物中双子叶和单子叶两纲植物的区分,且木糖和半乳糖决定了两纲间的显著性差异（P＜0.01）。同时香农 威纳指数结果显示了被子植物两纲在单糖含量的多样性上也存在差异,且双子叶植物的单糖多样性显著高于单子叶植物（P＜0.01）。      

枸杞中性多糖的糖链结构分析

从枸杞中分离纯化得到枸杞中性多糖，经气相色谱法和色谱－质谱法分析，该多糖由木糖、阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖、赤藓糖及少量岩藻糖和山梨糖等８种糖基组成，前５种糖基的摩尔比为１０：１：１：６．７：４。多糖呈分支结构，主链包括１，４连接的葡萄糖、１，６连接的半乳糖、１，４或１，５连接的木糖，在１，４连接的葡萄糖上６位分枝形成侧链，侧链末端是木糖和半乳糖，此外，尚有含量较高的一种未知连接结构和少量其     

大鼠骨髓干细胞的分离、培养和诱导生成内皮祖细胞的研究

目的探讨大鼠骨髓干细胞的体外分离、培养和诱导生成内皮祖细胞的的可行性,并检测其表型和功能。方法取大鼠长骨骨髓细胞,第3代细胞传代后加用终质量浓度10μg/L的血管内皮生长因子（VEGF）的细胞因子,培养3 d后行内皮细胞特异性成分鉴定。结果（1）免疫组化染色鉴定：P3代CD133呈中度阳性表现,CD34呈弱阳性表现;经VEGF诱导后表达明显增强。（2）流式细胞仪细胞计数鉴定：P3代CD133、CD34阳性细胞率分别为97.3%、55.5%;经VEGF诱导后CD133、CD34阳性细胞率分别为91.4%、78.6%。（3）P3代VEGF诱导后乙酰化低密度脂蛋白（ac-LDL）、荆豆凝集素（UEA）双染鉴定：经VEGF诱导的P3代细胞ac-LDL和FITC-UEA-1双荧光染色阳性率（70.2±5.1）%,未经VEGF诱导后的P3代细胞ac-LDL和FITC-UEA-1双荧光染色阳性率（20.4±3.8）%。（4）RealTime-PCR检测第3代VEGF cell和三代cell的内皮细胞特异性成分表达：P3 VEGF cell血管内皮生长因子受体2（VEGF-R2）浓度是P3cell的2.22倍。结论用贴壁筛选法和VEGF细胞因子培养大鼠骨髓干细胞可以获得较高纯度的内皮祖细胞（EPCs）,该细胞具有内皮祖细胞的特性,可用于进一步向内皮细胞分化的研究与应用。     

山羊卵巢间质细胞分离方法的比较

【目的】比较体外条件下不同分离山羊卵巢间质细胞(ovarian interstitial cells)方法的效果。【方法】采用热消化法、冷消化法、单一酶消化法(热消化法,用Ⅰ型、Ⅳ型、Ⅺ型胶原酶和2.5g/L胰蛋白酶+0.2g/L EDTA)及2步酶消化法分离山羊卵巢间质细胞。【结果】热消化法得到的细胞数量较冷消化法多,且试验所用时间缩短,但细胞活率降低。单一酶热消化法中,以1g/LⅪ型胶原酶效果最佳,适合体外培养。2步酶消化法以先胰蛋白酶后Ⅺ型胶原酶组的效果最佳,卵巢组织消化时间及体外培养首次换液时间均较短,适合于体外培养。【结论】采用1g/LⅪ型胶原酶单一酶热消化法或先胰蛋白酶后Ⅺ型胶原酶2步酶消化法,分离山羊卵巢间质细胞的效果均较好,可作为试验用卵巢间质细胞的理想分离方法。     

氨对悬浮培养幼仓鼠肾细胞(BHK-21)生长代谢的影响

【目的】研究在幼仓鼠肾细胞(BHK-21)悬浮培养过程中,不同浓度氨对其生长代谢的影响。【方法】用添加0,1.8,2.5,5.5,8.0和15.0 mmol/L氨的培养基培养BHK-21细胞,每隔12 h取样1次,用细胞计数仪进行细胞计数,测定细胞活力,采用AO/EB双染色法和Annexin V-FITC/PI流式细胞仪2种方法检测细胞的凋亡情况,同时测定细胞培养过程中葡萄糖、氨和乳酸浓度的变化。【结果】在BHK-21细胞连续培养过程中,当氨的添加浓度低于1.8 mmol/L时,其对细胞的生长几乎不产生抑制作用,细胞活性、细胞总数与对照组差异不显著,未出现细胞聚集成团现象;当氨添加浓度达到15.0 mmol/L时,BHK-21细胞直接进入死亡期;当氨的添加浓度为2.5~8.0 mmol/L时,氨对细胞生长的抑制作用由弱变强,这种抑制作用在细胞培养至24 h开始出现。另外,随着氨添加浓度的增加,葡萄糖的消耗量减少,细胞代谢产生的乳酸和氨降低。【结论】氨对悬浮培养的BHK-21细胞的生长和代谢有显著影响。     

一种有效分离及在体外扩增成年小鼠精原干细胞的方法

尝试建立一种简便有效的成年小鼠精原干细胞分离培养及扩增的方法。从单只成年小鼠的睾丸中经过两步酶消化法分离精原干细胞,并在去除间质细胞、纯化后的支持细胞饲养层上培养与扩增,获得稳定增殖的精原干细胞系。此方法可显著提高建系成功率,保证细胞系的单一基因型,显著降低体外培养精原干细胞的成本。为成体基因来源的转基因动物的制作和疾病模型的建立提供技术支持。     

免疫小鼠脾脏中抗原提呈细胞的快速分离

应用胶原酶消化脾脏、 Ｂ Ｓ Ａ 梯度离心富集低浮密度细胞和 Ｆ Ａ Ｃ Ｓ分选细胞法,自小鼠脾脏中分离出高纯度树突细胞、吞噬细胞和 Ｂ淋巴细胞。分离的 ３ 种细胞样品中分别含 ９７％ 树突细胞、９６％ 吞噬细胞和 ９９％ Ｂ淋巴细胞。而纯化前,树突细胞和吞噬细胞在低浮密度细胞中仅分别占 ６５％ 和 ３５％ , Ｂ 淋巴细胞占脾细胞的 ４２％ 左右。该程序简便、快速、准确,在一个工作日内可制备大量细胞, 并适用于其他淋巴组织中抗原提呈细胞的纯化。     

山羊胚胎心肌细胞分化发育的超微结构研究

利用透射电镜观察了山羊胚胎心肌细胞分化发育过程中超微结构的变化。结果表明 :2 6日龄的山羊胚胎心肌细胞内肌节初步形成。随着胚胎发育 ,心肌细胞的肌节逐步完善 ,心肌细胞内的线粒体数量逐渐增多 ,排列规则 ,线粒体嵴逐渐变密 ,心肌细胞之间的连接也随着胚胎的生长发育逐渐形成和加强 ;2 6日龄山羊胚胎心肌内可见粗面内质网 ;34日龄的山羊胚胎心肌细胞胞浆内可见肌浆网、肌膜下池、横小管和二联管已形成 ;山羊胚胎心肌细胞内糖原颗粒丰富 ,随着胚胎日龄的增长 ,胞质内散布的糖原颗粒呈减少的趋势 ,而肌丝之间的糖原颗粒呈增加趋势 ;2 6日龄的山羊胚胎心房肌内出现少量特殊颗粒     

南方鲶SME－Ⅰ细胞系的建立及其生物学特性的研究

用半消化法和组织块法接种南方鲶晚期胚，经４０多代连续培养，建立了ＳＭＥ－Ⅰ鲶鱼细胞系。该细胞系为贴附性上皮样细胞。细胞内微丝束丰富，平行排列伸到伪足，但质膜下不很密集。细胞最适在含１５％～２０％小平血清的１６４０培养基中生长，适温２８～２９℃，ｐＨ６．５～７．２，群体倍增时间为５８．６ｈ，已增殖到１０￣８个的水平。细胞染色体数为正常二倍体２ｎ＝５８，但有不少异倍化细胞。该细胞系已可用于鱼类生物工程研究和进入细胞资源库保存。     

鱼类干细胞育种技术回顾与展望

鱼类是优质动物蛋白的重要来源,其中养殖鱼类占重要地位,而通过选择育种、杂交育种等传统方法和分子辅助育种、基因编辑等新技术培育优良品种是鱼类养殖业健康持续发展的关键.近年来,鱼类干细胞技术特别是细胞移植和诱导技术快速发展,为鱼类优良品种培育提供了新的技术途径.介绍了鱼类干细胞育种的现状及应用,总结了鱼类干细胞育种技术面临...     

亚硒酸钠对人早幼粒白血病细胞（HL－60）的影响

以人早幼粒白血病细胞（ＨＬ－６０）为实验对象，研究了亚硒酸钠对细胞的影响。结果发现５．８μｍｏｌ／Ｌ亚硒酸钠可以抑制ＨＬ－６０细胞生长，但１１．６μｍｏｌ／Ｌ以上浓度时对细胞的毒性加重。未发现亚硒酸钠能诱导ＨＬ－６０细胞进行形态和功能分化。     

仔猪肠黏膜上皮细胞体外培养及其对小檗碱适应性的研究

为了体外分离培养和鉴定仔猪肠粘膜上皮细胞,探讨小檗碱对体外培养的仔猪肠粘膜上皮细胞的安全剂量。本试验取刚出生未吃初乳的仔猪小肠的回肠段,用胰蛋白酶和胶原酶Ⅳ进行消化处理,获得原代仔猪肠粘膜上皮细胞,用免疫组化法对培养的仔猪肠粘膜细胞进行鉴定,用MTT检测法测定硫酸小檗碱对仔猪肠粘膜上皮细胞的安全浓度。结果表明:免疫组化法分离培养的细胞膜呈棕黄色,为粘膜上皮细胞。硫酸小檗碱对体外培养的仔猪肠粘膜上皮细胞的安全浓度为20μmol/L。