应用ELISA检测猪繁殖与呼吸综合征和伪狂犬病抗体

应用ELISA诊断试剂盒对郑州某猪场的59血清进行了PRRS和PR的血清抗体检测,检出阳血清分别为47份和18份,阳性率分别为79．66％和30．51％．表明此猪场猪群中存在PRRS和PR的病毒。     

PRRSV血清抗体间接ELISA检测方法的建立

用亲和层析纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组核衣壳蛋白GST-N作为诊断抗原,建立检测PRRS血清抗体的间接ELISA方法。抗原最佳包被量为每孔400 ng,待检血清最佳稀释度为1∶100,待检血清样品的D_(490 nm)≥0．43D_(po■) 0．57D_(neg)判为阳性,反之判为阴性。对采自14个猪场的364份猪血清样品进行检测,PRRS阳性率为51．4%,略高于HerdChek ELISA的阳性检出率49．7%。与HerdChek ELISA相比,间接ELISA的敏感性为94．5%,特异性为91．3%,总符合率为92．9%,Youden指数为0．86。同时还证明该方法具有良好的批间和批内重复性,并且不与猪瘟、猪伪狂犬病等阳性血清发生反应。该方法的成功建立将为我国PRRS的防制工作作出贡献。     

山东省规模化猪场繁殖与呼吸综合征抗体检测与分析

本研究利用IDEXX公司猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）抗体检测试剂盒对山东省不同地区共16个规模化免疫的猪场的601份猪血清,结果弱毒疫苗免疫猪场猪群抗体阳性率达到90．65％,灭活苗免疫猪场猪群抗体阳性率仅达到75．49％。研究结果表明山东省规模化猪场普遍存PRRS感染,对于预防PRRS而言,弱毒疫苗的体液免疫效果要优于灭活疫苗。     

猪细小病毒NS1蛋白的截短表达与间接ELISA诊断方法的建立

【目的】建立一种快速检测猪细小病毒（Porcine parvovirus,PPV）野毒抗体的方法。【方法】参照已发表的PPV基因组（AY502114.1）序列设计合成特异性引物,利用PCR扩增PPV-NS-1基因主要抗原区域,将目的片段定向克隆至表达载体pET30a(+),转化BL21（DE3）表达菌,用IPTG诱导表达重组蛋白。以该蛋白作为诊断抗原,经过对间接ELISA条件的优化,建立检测PPV抗体的NS1-ELISA诊断方法,对该方法的特异性、敏感性、重复性进行检测。用建立的PPV NS1-ELISA诊断方法和血凝抑制试验（HI）同时对临床送检的306份血清样品进行检测,比较二者的符合率。【结果】成功扩增了870 bp的NS1基因部分片段,构建了pET30a-NS1原核表达载体,获得了以包涵体形式表达的重组蛋白。该重组蛋白具有良好的抗原性和特异性。以纯化蛋白作为诊断抗原,建立了检测猪细小病毒抗体的NS1-ELISA诊断方法。该方法与猪圆环病毒2型（PCV-2）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪乙脑病毒（JEV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪瘟病毒（CSFV）等7种常见猪病病毒的阳性血清均不发生反应;该方法检测敏感性为1∶12 800;批内重复性试验和批间重复性试验中样品的变异系数分别小于5%和10%。PPV NS1-ELISA检测方法与HI的符合率为96.2%。【结论】制备了NS1重组蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性,以其作为包被抗原建立的PPV NS1-ELISA诊断方法具有良好的重复性、敏感性和特异性,为PPV的快速诊断和流行病学调查等提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。     

猪繁殖与呼吸综合症(PRRS))的防治

目前该病毒尚无有效治疗药物，关键是预防。在实际中，防治的措施取决于：猪群是否感染PRRS病毒；生产单元的类型：纯种／后备猪或商品猪；管理方式：猪群规模和耐风险性；设备条件。有多种生物安全措施特别适用于防治PRRS。对非疫区猪群一定要尽可能地防止患PRRS。①做好引种时的检疫工作。引进的猪要严格隔离和观察６０d，并检测PRRS抗体。为了说明检测结果，必须了解其在原猪场的免疫接种情况。②详细了解引入猪场中猪的PRRS情况，一定不要从表现急性PRRS症状的猪场中购进种猪，以确保购进的猪在到达及隔离结束时都为阴性。③…     

应用PPA—ELISA检测系统控制猪瘟的持续感染

上海郊区某两猪场自１９９４年初起不断有少量仔猪死亡，经诊断为猪瘟持续感染（亚临床隐性感）。对发病舍的母猪和仔猪应用ＰＰＡ－ＥＬＩＳＡ检测系统重点检测其血清猪瘟抗体水平，表明８．３％的母猪和相当数量的仔猪抗体郊价处于低水平状态。普查表明，在１１５８头母猪中ＯＤ值小于０．５的有５７头，占４．９２％。用４头份的猪瘟疫苗对抗体水平低的母猪进行强化免疫，一个月后检测其抗体效价；再用６头份的猪瘟疫苗对抗体效价     

利用σ 3和σ 2重组蛋白检测禽呼肠孤病毒抗体ELISA的建立

将纯化好的两个ARV结构蛋白σ3和σ2作为包被用抗原,分别进行间接ELISA,并确定它们的最佳抗原包被浓度分别为9．5、12．0μg／mL;一抗血清的稀释度为1：200;HRP酶标羊抗鸡IgG稀释度为1：5000,初步建立了能检测ARV抗体的σ3-ELISA、σ2-ELISA以及σ3、σ2两个蛋白同时包被的σ3-σ2-ELISA检测方法。分别用上述3种方法对制备的ARVSPF鸡阳性血清进行检测,结果阳性检出率分别为90．91％、69．70％和100％。表明σ3-σ2-ELISA方法在ARV抗体检测方面具有较高的敏感性。     

PRRS病毒核衣壳蛋白基因的原核表达

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核酸序列设计1对引物，用RT—PCR扩增出美洲型PRRSV的核衣完蛋白(N)基因，克隆到pGEM—Teasy载体中，再亚克隆到表达载体pGEX—6p—1谷既甘肽—S—转移酶(GST)基因的下游。重组质粒转化大肠杆菌BL21，用IPTG于37℃条件下诱导，经SDS—PAGE和Western blotting分析，GST—N融合蛋白的分子质量约为39．5ku，另3种不同大小的GST—N降解产物，分子质量分别为33．0、30．5和27．5ku，其中39．5和30．5ku的降解产物分别占菌体蛋白的30．9％和15．3％。结果表明：PRRSV核衣壳蛋白基因在大肠杆菌中以GST融合蛋白的形式得到高效表达，且表达产物能与PRRSV抗体阳性的猪血清发生特异性反应，可作为PRRS诊断抗原。     

部分规模化猪场主要疫病抗体监测与分析

为了解郴州地区规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、猪瘟(CSF)、猪伪狂犬和O型口蹄疫(FMD)免疫状况及感染风险,本试验采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测了郴州地区12个规模化猪场540份血清5种抗体水平。检测结果显示:PRRS、 CSF、 PR-gB、 PR-gE和FMD抗体阳性率分别为84.63%、 77.04%、 80.19%、 7.22%和70.00%。结果表明,郴州市规模猪场PRRS、 CSF和FMD免疫效果总体较好,但FMD免疫抗体水平场间差异较大,部分猪场存在PR野毒感染的风险。     

猪繁殖与呼吸综合征流行病学调查与RT-PCR鉴定

对贵州省11个猪场出现的疑似猪繁殖与呼吸综合征病例进行流行病学调查和病原RT-PCR鉴定，结果表明，发病仔猪主要表现高热，死亡率为40.35％（642／1591）；3个种猪场的待产母猪群发生繁殖障碍，流产率为8．11％（38／469）；成年猪群发病率为24．47％（162／662），死亡率为4．35％（30／662）；感染猪群PRRS血清抗体平均阳性率为28.12％（45／160）。对病死猪病料进行PRRS病原核酸鉴定，其平均检出率为84．44％（38／45），变异毒株试剂盒检测显示，11个临床发病猪场病例是由变异毒株引起的高致病性猪繁殖与呼吸综合征。