月季茎尖玻璃化法超低温保存技术研究

研究月季茎尖玻璃化法超低温保存技术,以期为月季茎尖超低温保存提供理论和实践依据.试验选用金奖章、粉玛雅、韩红、博共4个月季品种进行简单玻璃化法和玻璃化超低温保存试验.结果表明:简单玻璃化法保存时.不同品种的茎尖存活率差异显著,金奖章的茎尖存活率最高(55.3%);通过研究预培养、装载处理和植物玻璃化溶液PVS2脱水时间对粉玛雅茎尖存活率的影响,初步构建了月季茎尖玻璃化法超低温保存体系,即将长1.0cm的茎尖在含0.3mol·L-1蔗糖的培养基上预培养5～6d后,取1.5mm茎尖,室温下A液(MS+2mol·L-1甘油+0.4mol·L-1蔗糖)装载40min或B液[60%PVS2+40%(MS+0.15mol·L-1蔗糖)]装载30min,用PVS2(300g·L-1甘油+150g·L-1乙二醇+150g·L-1二甲基亚砜+0.4mol·L-1蔗糖+MS)于0℃下处理40min,然后液氮保存24h,在40℃水浴中化冻90s,用1.2mol·L-1蔗糖培养液洗涤,最后转入MS+6-BA1.0mol·L-1+IBA0.1mol·L-1上再培养,存活率高于53.3%.     

紫色马铃薯茎尖培养基筛选试验

为了建立紫色马铃薯的快繁体系,对通过调整茎尖培养基中6-BA的浓度以获得再生株进行了研究.结果表明:MS+NAA 0.05 mg·L1+6-BA 0.10 mg·L-1+80 g·L-1蔗糖是紫色马铃薯茎尖生长的理想培养基,且不产生愈伤组织,可直接成苗.     

白首乌的组织培养条件的优化

以白首乌茎段、叶片、茎尖和带腋芽茎段为外植体,进行离体培养植株再生研究,结果表明：适合初代诱导的培养基为：MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1,诱导率可达100%;最佳外植体是带腋芽茎段;芽苗增殖的最佳培养基为：MS+KT 1.5 mg·L-1+NAA 0.05 mg·L-1,增殖系数为5.6;生根培养基为：1/2 MS+NAA 0.5 mg·L-1,生根率为93.3%。     

蒙古栎茎段的离体培养

以水培萌发的健壮茎段为外植体,研究了离体条件下培养基及激素对蒙古栎器官发生和植株再生的影响。结果表明,在培养基中添加0.2 g·L-1PVP能有效地抑制茎段褐化,在茎段初代培养中,以1/2MS基本培养基添加0.2 mg·L-16-BA培养效果最好,启动时间早,芽平均高3.00 cm,最高的可达5.20 cm。茎段增殖培养,以1/2MS+6-BA0.15 mg·L-1+KT0.15 mg·L-1效果最好,平均茎芽长接近3.00 cm,平均增殖系数为3.33;高质量浓度的6-BA对茎芽生长不利,基部高度愈伤化,出现玻璃化现象。茎段最佳生根培养基为MS+NAA0.02 mg·L-1+IBA0.05 mg·L-1,生根率达到62.5%。     

高山红景天(Rhodiola sachalinensis A.Bor)茎尖包埋-玻璃化法超低温保存与植株再生

使用包埋-玻璃化法对两种来源的高山红景天茎尖进行超低温保存研究,探讨蔗糖预处理、包埋过程中渗透处理和不同温度下玻璃化液PVS2处理的时间对超低温保存后茎尖存活率的影响.结果表明,茎尖依次在0.3、0.5、0.7、1.0 mol.L-1的蔗糖溶液中各预培养1 d后,转入1.0 mol.L-1的蔗糖溶液中继续培养4 d,然后使用附加2 mol.L-1甘油和1 mol.L-1蔗糖的包埋液渗透处理60 min,包埋珠在0℃处理180～210 min后投入液氮,48 h后用40℃水浴快速化冻3 min,用合有1 mol.L-1蔗糖的改良MS培养液洗涤20 min,转入MS+6-BA 1 mg.L-1+NAA 0.1 mg.L-1固体培养基中在22℃条件下进行暗培养,2 d后转移入光照培养,最高成活率接近100%,再生植株生长和分化正常.     

欧李茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生

对欧李(Cerasus humilis)茎尖进行了玻璃化法超低温保存及植株再生研究,结果表明,预培养对欧李茎尖超低温保存有一定的影响,茎尖在含有0.5 mg.L-1BA和2 M甘油的B 5培养基上室温(25℃)下预培养3 d成活率最高;最佳预处理时间为60%PVS2处理10~20 min,玻璃化液(PVS2)处理时间为0℃下60 min.在优化的保存条件下,植株再生率达83.9%,再生植株生长和分化正常.这是欧李超低温保存成功的首例报道.     

文心兰茎尖诱导丛生芽高频率植株再生

以文心兰茎尖为外植体,通过基本培养基(MS、1/2MS、1/2 N6)、植物激素(6BA、NAA)、培养条件(有机添加物、糖、培养物状态)等关键因子对文心兰丛生芽诱导、增殖、生根各培养阶段影响的试验,探讨了文心兰以丛生芽途径再生植株的关键技术.结果表明:茎尖诱导丛生芽较适培养基配方为1/2 MS+6BA 2.0 mg·L-1 +NAA 0.1 mg·L-1,诱导率为84.6%;丛生芽在MS+6BA 2.0 mg·L-1 +NAA 0.1 mg·L-1 +蔗糖30 g·L-1培养基中增殖效果较好,增殖系数为5.5;株高2.0～3.0 cm的试管苗是丛生芽增殖的最佳培养材料;生根培养基适宜配方为1/2MS+IBA0.5 mg·L-1 +苹果汁100 g·L-1 +活性碳0.5 g·L-1 +蔗糖20 g·L-1,生根率为100%.     

矮牵牛梅林愈伤组织诱导与植株再生

为建立矮牵牛梅林的高频再生体系,以叶器官为材料,研究不同生长调节剂配比、叶片不同部位和不同形态愈伤对不定芽再生的影响。结果表明:6-BA和NAA及其配比极显著影响矮牵牛梅林不定芽再生率,其中NAA 0.3mg·L-1极显著促进了矮牵牛梅林不定芽的再生,6-BA和NAA浓度超过1.0mg·L-1和0.5mg·L-1时,刺激玻璃化的发生。叶片不同部位极显著影响不定芽的再生,芽分化率由高到低依次是叶柄带主叶脉不带主叶脉,愈伤组织形态决定芽分化能力和质量,叶柄直接分化丛芽是梅林再生的优良外植体,分化率达98.3%。芽诱导最佳培养基为MS+6-BA 1.0mg·L-1+NAA 0.3mg·L-1,其产生不定芽无玻璃化且分化率高,为68.3%。叶片愈伤组织诱导最佳培养基为MS+6-BA 1.0mg·L-1+NAA 0.3mg·L-1,其不定芽分化率为68.3%且未产生玻璃化苗;最佳生根培养基为1/2 MS培养基,生根率达100.0%;继代增殖培养最佳培养基为MS+6-BA 0.5mg·L-1+NAA 0.1mg·L-1,丛生芽多且大小均匀。     

利用玻璃化超低温技术脱除草莓斑驳病毒(SMoV)的初步研究

以携带草莓斑驳病毒(Strawberry mottle virus)的‘红颜’草莓为材料,通过对玻璃化超低温脱毒技术中各程序的优化,建立适合‘红颜’草莓的茎尖玻璃化超低温脱毒体系。结果表明:1~2mm的茎尖在0.5mol/L蔗糖的预培养基预培养3~7d,室温装载处理60min,0℃玻璃化处理180min,液氮冷冻60min,40℃解冻2min,高糖溶液卸载20min后接种到MS+2.0mg/L 6-BA再生培养基上,成活率可达70%以上。再生培养60d后,随机选取20株再生植株,利用RT-PCR技术检测草莓斑驳病毒的脱毒效果,脱毒率为100%。利用该体系可以克服传统茎尖脱毒受茎尖大小的限制(0.1~0.3mm),并有效脱除草莓斑驳病毒。     

短葶山麦冬茎尖培养快速繁殖技术研究

以短葶山麦冬茎尖为外植体,通过对其采取不同消毒时间、茎尖诱导分化、壮苗与生根及移栽条件等快速繁殖条件进行研究.结果表明:0.1％ HgCl2消毒时间为12 min;短葶山麦冬茎尖分化培养基MS+ BA 2.0mg·L-1+ NAA0.2 mg·L-1,茎尖分化率高,最高分化率达到90％.丛生芽增殖培养基选择MS+ BA...     

尤溪金柑离体再生体系优化及试管苗保存

以尤溪金柑试管苗为材料,采用双因素试验设计,筛选出适合尤溪金柑试管苗增殖和生根的培养基;采用L3（3^4）正交表设计,研究each、甘露醇和多效唑对尤溪金柑试管苗保存的影响．结果表明：芽增殖的最优培养基为：MS＋1．2mg·L-1 6-BA＋0．05mg·L-1NAA,增殖系数最高,达10．60;生根最优培养基为：MS＋0．3mg·L-1NAA十0．2mg·L-1 IBA。生根率最高达到了83．33％．保存12个月时处理C4（MS＋0．44g·L-1 CaCl2＋0g·L-1甘露醇＋1．0mg·L-1多效唑）中尤溪金柑试管苗的存活率均为最高,达97．8％．     

茄子高频再生体系的建立与优化

为建立并优化茄子高频再生体系,研究以茄子品种哈农杂茄2号和哈农杂茄3号为材料,利用不同的外植体和植物生长调节剂组合,探讨影响茄子再生频率的主要因素。结果表明:茄子最佳再生子叶最适分化培养基为MS 0+6-BA 1mg·L-1+KT 2mg·L-1;下胚轴最适分化培养基为MS 0+KT 2mg·L-1,再生苗最佳生根培养基为1/2MS+IAA 0.1mg·L-1,且下胚轴的分化效率高于子叶。     

四倍体葡萄诱导技术的研究

 以秋水仙素为诱变剂，利用茎段浸泡和秋水仙素培养基两种方法对二倍体京秀和红地球2个品种的葡萄(Vitis. vinifera)组培苗进行诱导，并采用流式分析仪对诱变植株的细胞DNA含量进行鉴定。结果表明，茎段浸泡秋水仙素法诱导四倍体葡萄的效果优于秋水仙素培养基法。在低浓度秋水仙素（2000 mg•L-1或低于2000 mg•L-1）溶液中浸泡时间短于48 h的所有处理，仅在继代2~5次后获得了纯合四倍体植株；在秋水仙素浓度2000 mg•L-1对茎段浸泡3 ~4 d或3000 mg•L-1 和4000 mg•L-1对茎段浸泡2~4 d，在茎段扦插的当代就获得了纯合四倍体植株，诱变四倍体植株的适宜条件为在秋水仙素3000 mg• L-1 茎段浸泡3~4 d，纯合四倍体植株获得的比率为16.7~23.3%。     

马铃薯茎尖组织培养方法优化研究

提高马铃薯茎尖组织培养的成苗率和脱毒率。以克新1号为材料,研究了不同茎尖大小、不同浓度和配比的激素对马铃薯茎尖诱导的效果。结果表明:茎尖越小,脱毒率越高,但成活率和成苗率越低,以叶原基数为2的茎尖脱毒效果最好。通过对6种培养基的对比,筛选出MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+GA 0.1 mg/L为茎尖诱导分化成苗的最优培养基。     

菊花茎段组织快繁体系的建立

通过对菊花茎段采用不同的消毒处理,然后进行诱导、增殖和生根试验,建立了菊花离体快繁体系：消毒灭菌处理以70％酒精浸泡10s后,在0.1％升汞溶液中浸泡3min为最佳;带腋芽茎段诱导的最适宜培养基是MS＋6-BA2.0 mg·L-1＋ NAA0.1mg·L-1;腋芽增殖的最适宜培养基为MS＋6-BA2.0 ～3.0 mg·L-1＋NAA0.1mg·L-1;利用不带腋芽的茎段诱导愈伤组织的最适宜培养基是MS＋6-BA0.5mg·L-1＋ NAA0.5mg·L-1;愈伤组织再分化成丛生芽的最适宜培养基是MS＋6-BA2.0 mg·L-1＋ NAA0.1mg·L-1;诱导生根的适宜培养基为1/2MS＋ NAA0.5 mg·L-1;生根率为100％;试管苗移栽到疏松透气的蛭石＋珍珠岩＋园土（1：1：1）混合基质中,成活率可达98％.     

玻璃化法超低温保存匍匐翦股颖胚性愈伤组织及其植株再生

采用玻璃化法对匍匐翦股颖愈伤组织进行超低温保存条件及植株再生进行初步研究.结果表明:将继代2次的愈伤组织接种到预培养基上,4℃低温预培养5 d.预培养后的愈伤组织在常温下用装载液过渡10 min,再于0℃下用玻璃化溶液PVS2处理50 min后,加入新鲜的PVS2迅速投入液氮中保存1 h以上,取出后在30℃水浴中解冻,用MS+1.0 mol.L-1蔗糖溶液洗涤3次,每次10 min,细胞存活率可达85.6%,接种在恢复培养基上培养,胚性愈伤组织能正常进行体细胞胚胎发生、成熟和植株再生.     

八仙花组织培养繁殖技术

以八仙花的茎段、茎尖、叶片为外植体,在MS培养基中加入不同质量分数的6-苄基腺嘌呤（6-BA）和吲哚丁酸（IBA）进行增殖培养.结果表明：适宜八仙花外植体表面灭菌的方法是利用0.1%氯化汞（HgC l2）灭菌7 m in;不同类型的八仙花外植体在初代培养时的增殖效果不同,茎尖在培养过程中首先伸长生长,然后陆续长出侧芽,表明八仙花的茎尖是比较适合用来进行增殖培养的外植体;继代培养以MS＋6-BA 1.0 mg.L-1＋IBA0.12 mg.L-1为较适宜的增殖培养基;侧芽在1/2 MS＋IBA 0.2 mg.L-1培养基中生根率和单苗根数量均较高,说明1/2 MS＋IBA 0.2 mg.L-1为较好的不定根诱导培养基.     

马铃薯茎尖超低温保存研究

以马铃薯栽培品种甘农薯1号的试管苗为材料,进行了茎尖超低温保存技术的研究,结果表明,预培养3～4 d,用玻璃化溶液PVS2室温下处理20～30 min,直接投入液氮中冷冻保存,然后接种在MS添加2.50 mg/L KT、1.25 mg/L IAA和1.25 mg/L 6-BA的培养基上,经过恢复培养,茎尖成活率可达42.8%.     

枸杞组织培养快速繁殖技术

以枸杞、新疆枸杞、宁夏枸杞的种子为外植体进行组织培养快速繁殖技术研究,结果表明：枸杞最适宜的初代培养基为MS＋6BA1.5 mg.L-1＋IBA0.2 mg.L-1,宁夏枸杞和新疆枸杞最适宜的初代培养基为MS＋6BA2.5 mg.L-1＋IBA0.2 mg.L-1;3种枸杞最佳的继代培养基均为MS＋6BA0.5 mg.L-1＋IBA1.0 mg.L-1,分化诱导率分别为60%、40%、44%,增殖倍数分别为4.5倍、3倍、3倍;在MS＋6BA0.5 mg.L-1＋IBA0.1 mg.L-1培养基上3种枸杞的幼苗生长均表现为粗壮;生根培养基以1/2 MS＋IBA0.1 mg.L-1效果最佳.以腐殖土、蛭石、河沙等量混合配制的移栽基质效果最佳,移栽成活率为96%.     

菊花品种神马的茎段离体快繁研究

为加快优质菊花种苗的繁殖,以菊花品种神马的茎段为试材,建立了无菌操作体系,并进行继代增殖、生根培养和驯化移栽。结果表明:升汞消毒茎段5min效果最佳,存活率可达70.0%,污染率为13.30%;最佳初代培养基为MS+BA 1.0mg·L-1+NAA 0.1mg·L-1,萌发率高且生长良好;最佳增殖培养基为MS+BA1.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1,增殖系数达到6.2;最佳生根培养基为1/2MS+NAA0.1mg·L-1,生根率可达97.8%。