土壤拮抗放线菌的分离、筛选及鉴定

从辽宁及新疆土壤中分离到293株放线菌,筛选出对瓜类枯萎病菌有拮抗作用的放线菌菌株69株,其中高拮抗活性菌株13株。通过对13株拮抗放线菌的培养特征、形态特征、细胞壁组分分析表明,属于链霉菌属的8株,属于链轮丝菌属的4株,属于放线多孢菌属的1株。链霉菌属与链轮丝菌属的细胞壁类型均为Ⅰ型,放线多孢菌属的细胞壁类型为Ⅳ型。     

海南野生阿宽蕉根际土壤产纤维素酶放线菌的筛选

为从海南野生阿宽蕉居群根际土壤中筛选出具有较高酶活的产纤维素酶的放线菌,并对其进行分子鉴定,从而探索阿宽蕉居群根际土壤产纤维素酶的潜力。从海南不同的野生阿宽蕉居群采集7份根际土壤,采用GA培养基和HV培养基进行选择性分离放线菌,采用刚果红染色法对分离得到菌株进行产纤维素酶活性筛选,并对具有活性的菌株进行16S rRNA鉴定,以确定其分类地位。结果表明:从7份野生阿宽蕉根际土壤中共分离得到210株放线菌。其中, 55株菌具有纤维素酶活性, 12株菌表现出强活性。16S rRNA基因序列分析结果表明,它们属于放线菌纲下5个亚目6个科8个属,分别为链霉菌属、小单孢菌属、野野村氏菌属、疣孢菌属、戈登氏菌属、假诺卡氏菌属、拟诺卡氏菌属和球孢囊菌属,其中链霉菌属、小单菌属和野野村氏菌属为优势菌属。菌株X2303、 X2502和X2733与已知菌的序列相似率最高,分别为98.52%、 98.79%和99.11%,可能分别为链霉菌属、戈登氏菌属和疣孢菌属潜在的新分类单元。具有最高纤维素酶活性的菌株X2407为链霉菌,其与Streptomyces iranensis的16S rRNA基因序列相似率最高,为99.64%,具有较高的开发价值和应用前景。所以,海南野生阿宽蕉根际土壤中存在产纤维素酶的放线菌资源,主要以链霉菌为主。阿宽蕉根际土壤中存在一些新的放线菌分类单元。     

新疆13种荒漠植物根内生放线菌多样性及其抗菌活性筛选

以荒漠植物骆驼刺、铃铛刺、碱蓬、盐穗木、柽柳等13种植物的根为材料,利用SCA培养基分离其内生放线菌,通过菌株16S rRNA基因测序,分析荒漠植物内生放线菌物种多样性。以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌、细极链格孢菌、大丽轮枝菌和尖孢镰刀菌为靶标,通过琼脂扩散法和平板对峙法开展抗菌活性筛选。从13种荒漠植物分离出533株内生放线菌,鉴定的361株,分布于6个目,7个科,9个属,77个种,另有3个潜在新种,其中链霉菌属为优势类群,冢村氏菌属与伦茨菌属首次从植物中分离得到。研究表明13种荒漠植物内生放线菌多样性有明显差异,骆驼刺内生放线菌最丰富,分离到6个属27个种,链霉菌属有20个种;老鹳草分离到的菌株数量最多,有3个属;铃铛刺分离到2个属,其中的链霉菌属有28个种;猪毛菜、盐穗木等植物只分离到链霉菌属。抗菌活性筛选显示80株放线菌有抗菌活性,其中链霉菌74株,拟无枝酸菌3株,拟诺卡氏菌、糖霉菌和链孢囊菌各1株。本研究为寻找新型抗菌活性化合物,为生物医药和生物肥料提供菌株来源。     

西藏亚高山草原土放线菌研究

采用常规方法了分布于西藏海拔４０００－４６８０ｍ之间６个亚高山草原土的放线菌数量与组成,并从分离纯化所得３５５株放线菌中选出９８株代表菌株进行详细研究。结果表明：（１）供试放线菌分为９个属和２个未定属,链霉菌属和小单孢菌分别占土壤放线菌总数的５２．７％和２７．３％,钦氏菌属,孢囊放线菌属及孢链囊菌属共占１４．１％;链霉菌属共分为１２个类群,白孢类群,粉红孢类群及黄色类群分别占土壤链霉菌总数的４９．     

特殊生境中植物枯、黄萎病拮抗放线菌的筛选及鉴定

【目的】从特殊生境中分离筛选对植物枯、黄萎病具有较高生防活性的土壤放线菌,为深入开展枯、黄萎病的生物防治提供高效菌株。【方法】用平板稀释法,从采自广西、江苏、陕西等地特殊生境的5份土壤样品中分离放线菌;以西瓜枯萎菌、茄子黄萎菌、棉花枯萎菌作为靶标菌,通过平板对峙法进行初筛和复筛;采用菌丝生长速率法、水琼脂平板法,测定入选菌株发酵液的活性,并对其中拮抗活性高的菌株进行形态特征、培养特征及生理生化特性的分析鉴定,初步确定其分类地位。【结果】从5份采自特殊生境的土壤样品中共分离出53株放线菌,并从中筛选出JSC14、GXW1、GXC1、JSW5、JSW7等5株对所有靶标菌都有明显拮抗效果的菌株,其中JSC14菌株发酵液抑菌作用最强。对5株菌发酵液抑菌活性的测定结果表明,JSC14和GXW1菌株发酵液对供试病原菌菌丝生长和孢子萌发均有强烈的抑制作用,菌丝生长抑制率为62.98%～95.38%,孢子萌发抑制率为69.52%～100.0%。经初步鉴定,菌株JSC14为链霉菌属白孢类群白色亚群白色链霉菌(Streptomyces albus),菌株GXW1为拟诺卡氏菌属链孢拟诺卡氏菌(Nocardiopsis streptosporus)。【结论】获得2株对植物枯、黄萎菌有较高生防活性的土壤放线菌,为进一步探讨利用特殊生境中的放线菌控制土传病害提供了研究材料。     

老枞根际放线菌鉴定及其对可可毛色二孢抑制效果研究

【目的】从老枞根际土壤分离可培养放线菌，获取潜在新物种，并筛选可可毛色二孢菌拮抗菌株。【方法】采用土壤稀释涂布法和三区划线法进行分离和纯化，获得放线菌菌株；通过比对16S rRNA基因序列和构建系统发育树，对菌株进行初步分类和鉴定；采用平板对峙法进行抑菌活性筛选。【结果】（1）共获得81株不同放线菌菌株，分别隶属于链霉菌Streptomyces(54.32%)、节杆菌Arthrobacter(27.16%)、微杆菌Microbacterium(11.11%)、北里孢菌Kitasatospor(4.94%)和短小杆菌Curtobacterium(2.47%)5个属；（2）与已知模式菌株相比，相似度小于98.65%的潜在新种共有20株；（3）经可可毛色二孢平板对峙试验筛选后，获得7株高抑菌活性链霉菌，其中链霉菌ON316885的抑菌率最高，达到63.92%。【结论】武夷山老枞根际土壤中蕴含着丰富的放线菌资源，具有深度挖掘研究的价值，其中一些链霉菌具有较高的生防应用价值。     

抗茄链格孢菌放线菌的筛选及鉴定

以茄链格孢菌为靶标菌,采用平板对峙法和生长速率法对分离自药用植物的221株放线菌进行筛选,通过生理生化特征、培养特征、形态特征和基于16S rRNA基因序列的相似性分析对活性菌株的种属进行了鉴定。结果表明,抑菌率75%以上放线菌有3株,其中菌株3150被鉴定为环圈链霉菌(Streptomyces anulatus)的一个菌株,菌株3679被鉴定为氢化链霉菌(Streptomyces hydrogenans)的一个菌株,菌株4536被鉴定为链霉菌属(Streptomyces sp.)菌株。薄层色谱分析结果显示菌株3679代谢产物丰富且分离度好,进一步分离可望得到具有较好生防作用的化合物。     

特殊生境中土壤放线菌的筛选与鉴定

采用土壤稀释法分离采自江苏及广西农化厂周边的6份土样,获得50株放线菌。以大丽花轮枝孢、尖镰孢萎蔫专化型和尖镰孢西瓜专化型为靶标菌,通过皿内试验及盆栽试验筛选出5株具有较强拮抗活性的放线菌。菌丝生长和孢子萌发抑制试验表明,菌株JSGF4、JSGF10和GXCK1对靶标菌有较强拮抗作用;盆栽试验表明,5株放线菌对茄子黄萎病有良好防治效果,其中菌株JSGF10对茄子黄萎病的防效高达90.0%;对防效较高的4株放线菌进行形态特征、培养特征及生理生化特性分析,鉴定菌株JSGF4为龟裂链霉菌(Streptomyces rimosus),菌株JSGF10和GXCK1为白色链霉菌(Streptomyces albus),GXDM6为灰色链霉菌(Streptomyces griseus)。     

虎杖内生放线菌的分离鉴定及抗菌活性

采集秦巴山区野生虎杖(Polygonurn cuspidatum),选取以海藻糖、葡萄糖、淀粉等为主要营养和能源的4种培养基,经分离纯化得到47株内生放线菌.经形态学鉴定并结合16S rDNA序列分析,将6株具有较强抑菌活性的菌株初步鉴定为链霉菌属(Streptomyces)2株,小单孢菌属(Micromonospora)2株,链孢囊菌属(Streptosporangium)2株;采用滤纸片法初步研究了内生放线菌发酵液的抑菌活性.结果表明,17株菌株具有不同程度的抗菌活性,占所有分离菌株的36.2%,其中6株具有较明显的抑菌活性,菌株PEA023对所有靶标菌均有较强的抑制作用,菌株PEA023和PEA032对铜绿假单胞菌具有拮抗活性.     

抗香蕉枯萎病放线菌的筛选及菌株DA07408的鉴定

从土壤样品中共分离放线菌398株,用纸片法对其进行抗古巴尖孢镰刀菌4号生理小种活性筛选,结果发现共有8株具有活性,其中分离于海南儋州植物园土壤的菌株DA07408活性最强.经形态与生理生化特征、16SrDNA序列测定及其系统发育分析,将菌株DA07408初步鉴定为橄榄产色链霉菌Streptomyees olivochromogenes.     

微毛樱离体快繁初步研究

以微毛樱茎段为外植体,探讨了不同生长调节物质对其不定芽诱导、增殖和生根的影响.结果表明,MS+1.0 mg·L-1 6-BA +0.05 mg·L-1 NAA为不定芽诱导的最适培养基,诱导率达87.5％;单芽在MS+ 0.5 mg·L -1 6-BA+0.05mg·L-1 NAA培养基中增殖系数为2.5,丛芽在MS +...     

冬小麦遗传再生体系及根癌农杆菌介导的转化研究

以临优145的幼胚为外植体诱导植株再生,并进行农杆菌转化研究.以冬小麦品种临优145的幼胚为外植体,消毒后用解剖刀挑取幼胚,盾片朝上接种于MS+2,4-D 2 mg/L+肌醇100 mg/L+MES 400 mg/L+CH 100 mg/L+40 g/L麦芽糖+8 g/L琼脂的培养基中诱导愈伤组织,每2周继代一次,将诱导出的淡黄色、颗粒状Ⅱ型胚性愈伤组织接种于分化培养基(MS+ZT 1 mg/L+IAA 1mg/L+MES 400 mg/L+CH 100 mg/L+麦芽糖40 g/L+gelrite 2.6 g/L,pH 5.8)上培养2-3周,然后转接到再生培养基(1/10 MS+NAA 0.5mg/L+KT0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+gelrite 2.6 g/L,pH 5.8)中进行再生成苗.接种1229块幼胚,得到987块愈伤组织,Hyg抗性愈伤组织123块,抗性再生植株34株.在建立了再生体系的基础上,用根癌农杆菌介导法将GUS基因导入幼胚愈伤组织,抗性植株的PCR检测呈阳性.X-gluc染色表明,少部分愈伤组织出现肉眼可见的蓝色晕斑,说明GUS基因已经在小麦幼胚愈伤组织中表达.     

香竹愈伤组织诱导研究

以香竹种子为培养材料进行愈伤组织的诱导和增殖,分析了不同激素组合对愈伤组织诱导和增殖的影响,并比较了香竹的种子、无菌幼根、无菌幼茎和无菌幼叶4种不同外植体诱导愈伤组织生成的效果。结果表明:香竹种子诱导愈伤组织较合适的培养基为MS+3.0 mg.L-12,4-D+0.5 mg.L-16-BA;香竹增殖愈伤组织较适合的培养基为MS+1.0 mg.L-12,4-D+1.0 mg.L-16-BA+0.5 mg.L-1KT;无菌幼根的根冠部位比幼茎和幼叶更易产生愈伤组织,而种子作为外植体效果最佳。     

低剂量恩诺沙星对SPF小鼠肠道菌群的影响研究

 采用SPF小鼠动物模型研究了低剂量恩诺沙星对肠道菌群细菌数量、细菌耐药性和定植抗力的影响。连续饮水给药（1、10 和100 mg·L-1）48 d后，恩诺沙星对SPF小鼠肠道菌群的主要影响为：10和100 mg·L-1恩诺沙星可抑制部分需氧和兼性厌氧菌的生长（P＜0.05或P＜0.01）；100 mg·L-1恩诺沙星可抑制肠球菌和部分拟杆菌的生长（P＜0.05或P＜0.01）；1、10 和100 mg·L-1恩诺沙星使需氧和兼性厌氧菌对环丙沙星的耐药率增加（P＜0.05或P＜0.01）；100 mg·L-1恩诺沙星使拟杆菌对环丙沙星的耐药率增加；1、10 和100 mg·L-1恩诺沙星可降低部分SPF小鼠肠道菌群的定植抗力，使菌群对外源细菌的屏障作用下降。低剂量恩诺沙星对肠道菌群数量和定植抗力影响不大；恩诺沙星对肠道菌群的主要影响是使需氧和兼性厌氧菌的耐药率增加；中国现行规定的恩诺沙星和环丙沙星的日允许摄入量（ADI）可能也会对人体肠道菌群产生影响，主要为选择出耐药需氧和兼性厌氧菌。     

高精油互叶白千层组培快繁技术

以高精油含量的互叶白千层优良单株(H21、H35、H38)为试验材料,通过茎段离体培养,开展不同单株的组培快繁技术研究。结果表明,3个单株在诱导培养基MS+1.0mg·L-16-BA+0.05mg·L-1NAA上均取得较高的诱导率,但单株间诱导率存在极显著差异;H21、H35、H38在最佳增殖培养基(B1+1.5mg·L-16-BA+0.01mg·L-1NAA)上增殖培养40d,其增殖倍率分别为4.1、5.3、5.6,有效芽苗率高达90%以上;H21、H35、H38在培养基1/2B1+0.5mg·L-1ABT+0.5mg·L-1NAA诱导生根,生根率分别为65%、96%、93%,最佳生根培养基为1/2MS+0.5mg·L-1ABT+0.5mg·L-1NAA;以纯黄心土为移栽基质,炼苗30d,3个无性系平均移栽成活率高达84.8%。     

费菜无性系建立的研究

对费菜的嫩茎进行了无性系建立和快速繁殖的研究。结果表明:MS+BA0.5 mg·L-1+2,4-D1.2 mg·L-1是诱导嫩茎形成愈伤组织的理想培养基;1/2 MS+NH4H2PO450 mg·L-1+AgNO31.0 mg·L-1+BA1.0 mg·L-1+NAA0.1mg·L-1是愈伤组织分化培养的理想培养基;1/2 MS+NH4H2PO450 mg.L-1+AgNO31.0 mg.L-1+BA1.0 mg·L-1+NAA0.1mg·L-1+GA31.0 mg·L-1是费菜不定芽继代分化培养的理想培养基;以1/2 MS+NAA0.1 mg·L-1+IAA0.3 mg·L-1为生根培养基,变温、自然光是费菜试管苗生根培养的理想条件;试管苗扦插成活率为94.5%,移植成活的试管苗株型大而整齐、根系发达,当年可正常开花结实。     

籼稻品种93-11遗传转化中抗生素适宜剂量的筛选

为优化农杆菌介导转化体系,研究了两种常用抑菌剂头孢霉素(cef)和羧苄青霉素(cb)的抑菌效果和对籼稻品种93-11成熟胚培养的影响,并进一步研究选择剂潮霉素(hyg)对愈伤诱导、分化和种子萌发生根的影响,确定其作为选择剂的有效浓度.对cb和cef共设置12种质量浓度处理,各处理都能完全抑制农杆菌的生长,同时对愈伤的诱导和生长没有不良影响,但是有些处理使愈伤的分化率下降.150、250 mg.L-1cb的单独作用,400、500 mg.L-1cef的单独作用,以及cb为100mg.L-1时,300、400、500 mg.L-1cef的3种互作处理都不影响愈伤的分化率;但cef高达600 mg.L-1时明显降低愈伤的分化率,达极显著水平,使分化率降到7%;cb为50 mg.L-1时,350、450、550 mg.L-1cef的3种互作处理都极显著地降低愈伤的分化率,表明高浓度的cef以及添加小量cb的处理与cef之间的互作对分化率的影响十分显著.两种抑菌剂单独使用(400-500 mg.L-1cef,150-250 mg.L-1cb)即有效抑制转化和培养过程中农杆菌的繁殖,同时不影响愈伤的生长和分化.对hyg的研究表明,愈伤诱导和分化对hyg最为敏感,5 mg.L-1的剂量足以使出愈率为0,使愈伤的分化率为0;hyg对愈伤的致死剂量为40 mg.L-1;hyg对种子萌发生根的致死剂量为25 mg.L-1.因此,在愈伤分化阶段不宜加入选择剂;在抗性愈伤组织筛选阶段加入hyg的适宜质量浓度要大于40 mg.L-1;利用愈伤诱导和种子萌发生根对hyg的敏感性,可用于转基因种子的筛选,筛选质量浓度分别要大于5和25 mg.L-1.     

海芋种子的离体培养与快速繁殖

以成熟种子为材料,对海芋离体培养和快速繁殖进行了研究.结果表明:海芋的成熟湿润种子是获得无菌苗的最佳外植体;MS+6.0 mg.L-16-BA+1.5 mg.L-1KT+0.1 mg.L-1IBA为最佳增殖培养基,增殖系数达到6.0以上;1/2MS+1.0g.L-1活性炭+2.0 mg.L-1PP333为适宜的壮苗生根培养基,壮苗率和生根率分别达到82.50%和100%;移栽基质以草炭+蛭石(3∶1)为好,移栽成活率达93.33%.     

矮牵牛花药植株再生体系的建立

为了提高矮牵牛花药愈伤组织诱导率,推动矮牵牛花药培养的应用研究。对白色、紫色、粉红色、大红色四种基因型矮牵牛花药进行培养,研究了不同浓度激素配比及不同浓度蔗糖、麦芽糖和白砂糖对花药诱导的影响。结果表明,四种基因型采用6-BA和IBA组合诱导效果较好。获得较高诱导率的激素配比依次为:白色MS+6-BA1.0 mg.L-1+IBA 1.5 mg.L-1,紫色MS+6-BA 1.0 mg.L-1+IBA 1.0 mg.L-1,粉红色MS+6-BA 1.5 mg.L-1+IBA 1.5 mg.L-1,大红色MS+6-BA 1.5 mg.L-1+IBA 1.0 mg.L-1。麦芽糖诱导效果好于蔗糖,白砂糖诱导效果明显差于前两者。     

不同基因型孔雀草高效植株再生体系的建立

 将孔雀草品种T. patula'Little Hero Golden'的叶片、子叶和下胚轴接种于4种含有不同浓度IAA、NAA和BA的MS培养基上，比较不同外植体的再生植株的能力。结果表明，叶片再生植株能力较子叶和下胚轴强。随后，进一步将其叶片接种于9种添加不同浓度NAA和BA的MS培养基上，分化结果显示，在MS+NAA 1.5 mg·L-1+BA 1.0 mg·L-1的培养基上植株再生率最高，达75%。5份材料的叶片分别接种在该培养基上，再生率均达70%以上，其中T. patula21614的再生率达85%。所有再生植株均能成苗并表现出正常的形态特征。从而建立了适合于５种基因型孔雀草的离体高效再生体系。