根癌农杆菌介导的马铃薯茎段遗传转化条件的研究

以马铃薯茎段作为受体转化材料.通过根癌农杆菌介导的遗传转化方法,对影响马铃薯遗传转化的多种因素(抗生素质量浓度、农杆菌质量浓度、共培养时间等)进行研究.结果表明,卡那霉素(kanamycin,Kan)梯度在抗性愈伤组织诱导、芽分化过程中以100 mg·L-1为宜,但在生根过程中以50 mg·L-1为宜,菌液质量浓度以OD600为0.5,共培养时间为3 d,抑菌剂的选择以羧苄霉素(carbenicillin,cb)更适合.对转基因植株进行PCR检测表明,目的基因已整合到马铃薯基因组中.     

玉米组织培养及农杆菌遗传转化体系的研究

用玉米A188幼胚在2,4-D浓度为2mg·L-1的N6培养基上诱导愈伤组织,出愈率为100％;将愈伤组织转入5mg·L-1 6-BA的N6分化培养基中,分化苗频率在80％以上。当潮霉素浓度为10mg·L-1,可抑制愈伤组织的生长。用农杆菌浸染A188幼胚愈伤组织,GUS瞬时表达检测发现,3.5％的愈伤组织显示蓝斑,说明根癌农杆菌Ti质粒上的T-DNA已经被导入玉米愈伤组织细胞中。     

铜离子对猕猴桃愈伤组织再分化培养的研究

以秦美猕猴桃茎段为外植体,诱导愈伤组织并进行猕猴桃再分化及生根试验。在分化培养基中分别添加不同浓度的铜离子进行筛选,以确定适于猕猴桃愈伤组织分化的最佳铜离子浓度。结果表明:再分化培养基中添加1.0 mg.L-1的铜离子时,可明显提高猕猴桃愈伤组织绿苗再分化率及生根率。但当铜离子浓度超过2.0 mg.L-1时,猕猴桃愈伤组织绿苗再分化率显著降低。     

3种抗生素对尾巨桉愈伤组织诱导及植株再生的影响

【目的】研究潮霉素、卡那霉素和头孢霉素对尾巨桉愈伤组织诱导、不定芽分化及生根的影响,确立抑制农杆菌生长的头孢霉素质量浓度。【方法】以尾巨桉无菌苗茎段为外植体,先后接种于添加不同质量浓度抗生素的愈伤组织诱导培养基、不定芽诱导培养基以及生根培养基上,统计愈伤组织诱导率、不定芽诱导率和不定芽生根率,观察头孢霉素对农杆菌生长的影响。【结果】(1)培养基中的潮霉素、卡那霉素、头孢霉素的质量浓度分别为15,25,200 mg/L时,尾巨桉外植体的愈伤组织诱导率分别为6.7%,12.1%和26.7%;(2)潮霉素、卡那霉素、头孢霉素的质量浓度分别为15,25,250 mg/L时,不定芽分化受到明显抑制,不定芽诱导率分别仅有2.6%,10.2%和7.6%;(3)潮霉素、卡那霉素、头孢霉素的质量浓度分别为15,25,250 mg/L时,不定芽生根困难,生根率分别为10.2%,16.2%和10.1%;当头孢霉素质量浓度≥200 mg/L时,农杆菌生长被完全抑制。【结论】尾巨桉对不同抗生素的敏感性存在差异,在尾巨桉遗传转化过程中,抗性愈伤组织与不定芽诱导的潮霉素适宜质量浓度为10 mg/L,卡那霉素为20 mg/L;生根诱导适宜的潮霉素和卡那霉素的质量浓度分别为15 和25 mg/L;抑制农杆菌生长的头孢霉素较适宜的质量浓度为200 mg/L。     

毛稔叶片离体培养及植株再生研究

以毛稔叶片作为外植体, MS为基本培养基,研究不同种类激素的浓度配比对毛稔叶片离体再生的影响。结果表明,黑暗条件与光照12 h·d-1有利于毛稔愈伤组织形成,毛稔叶片愈伤组织最佳诱导培养基为MS+0.5 mg·L-16-BA+2.0 mg·L-12,4-D+0.1 mg·L-1 NAA,光照12 h·d-1诱导40 d,愈伤诱导率为96%;叶片形成的愈伤组织分化率极低,分化率随6-BA浓度升高而升高,愈伤组织分化最适培养基为MS+0.1 mg·L-1 NAA+2.0 mg·L-16-BA,分化率为10%;最适生根培养基为1/2 MS+0.1 mg·L-1 NAA,生根率为88.89%。     

一串红高效离体再生体系研究

为建立一串红高效再生体系,研究了0.1% HgCl2不同灭菌时间对一串红种子和外植体污染率和启动率(发芽率)的影响,以及不同激素组合对一串红外植体茎段、带节茎段和叶片愈伤组织诱导率及其分化率的影响。结果表明：采用0.1% HgCl2处理9 min是一串红外植体较为理想的表面灭菌时间,而一串红种子处理8 min有较低的污染率和较高的发芽率;采用无菌苗的茎段和叶片能诱导出质量较好的愈伤组织,但其进一步分化产生不定芽的能力较差,而采用带节茎段诱导愈伤获得了较多的分化苗,且1.5 mg ·L-1 6-BA+1.0 mg·L-1 2,4-D+0.2 mg ·L-1 NAA配方适于一串红愈伤组织的诱导,2.0 mg ·L-16-BA+0.1 mg ·L-1 NAA组合是适宜一串红愈伤组织分化的激素配方。此外,含0.5 mg ·L-1 NAA的1/2MS固体培养基能使一串红分化苗生根率在90%以上,且移栽后一串红成活率可达80%以上。     

羊草种子愈伤组织的诱导及植株再生

以3种羊草种子为外植体分别接种在含有不同浓度2,4-D(1,2,4mg·L-1)的MS培养基上,讨论其组织培养的条件。结果表明,愈伤组织诱导及芽分化的培养基以MS+1mg·L-12,4-D的效果最好,愈伤组织的诱导率为12%,不定芽分化率为16%;生根培养中,以1/2MS培养基生根效果最好,生根率达到100%。在筛选出的培养基上培养的羊草种子具有愈伤组织诱导率较高、幼苗分化率好、幼苗健壮、生长势好等优点。     

金花茶离体培养体系的建立

[目的]通过愈伤组织发生途径建立金花茶(Camellia nitidissima)的离体培养体系,为金花茶的快速繁殖和种质资源保存提供理论和技术支持.[方法]在金花茶种子萌发阶段以沙子替代培养基进行无菌萌发,以其成熟植株的茎尖、茎段和叶片为外植体,在WPM培养基上添加不同种类和浓度激素进行愈伤组织诱导、愈伤组织分化及生根培养.[结果]金花茶成熟种子去壳、去皮、取出胚乳后在添加无菌液的湿润沙子中培养,平均萌发率为95.40%,平均萌发时间为19.10 d;WPM+2.00 mg/L 6-BA+0.50 mg/L 2,4-D是金花茶子叶、胚轴愈伤组织诱导的适宜培养基;WPM+2.00 mg/L 6-BA+0.10 mg/L NAA是愈伤组织分化的适宜培养基,分化系数为4.56;1/2WPM+0.50~1.00 mg/L IBA是金花茶生根的适宜培养基,生根率为45.40%~54.00%,生根时间为19.80~20.90 d.[结论]金花茶离体培养可通过胚轴诱导产生愈伤组织进而分化成完整植株.     

抗生素对悬铃木体外植株再生影响的研究

研究了卡那霉素(Kanamycine,简写为Ka)和头孢霉素(Cefotaxime,简写为Cef)对悬铃木外植体再生的影响.试验结果表明,Ka和Cef对悬铃木叶片愈伤组织诱导、芽分化和幼芽根形成都能产生抑制作用.在幼芽生根和叶片分化培养基中分别加入质量浓度为15mg·L-1和40mg·L-1Ka,叶片愈伤组织,幼芽和根的诱导率分别为0;在分化和生根培养基中分别加入质量浓度为500mg·L-1和800mg·L-1的Cef则可使愈伤组织、幼芽和根的诱导率为0.在叶片分化培养基中同时加入这2种抗生素,愈伤组织和幼芽诱导率为0的Ka+Cef的组合的质量浓度为30mg·L-1+400mg·L-1.试验结果对悬铃木基因工程操作有一定的参考价值.     

米荞种子萌发和组织培养研究

为了提高米荞种子的萌发率和建立其愈伤组织培养体系,研究了不同处理方式对米荞种子萌发率的影响以及选择不同激素配比对米荞植物的子叶、胚轴和胚根外植体进行愈伤组织诱导。结果表明,采用去种皮的米荞种子经浸种处理,其种子在24和48 h的萌发率均最高为100%;诱导米荞胚根、胚轴和子叶外植体的最佳培养基配方为MS+2,4-D 1 mg.L-1+6-BA 2 mg.L-1,其中胚轴外植体的愈伤组织诱导率最高为100.00%,子叶为78.90%,胚根为54.44%。     

冬小麦遗传再生体系及根癌农杆菌介导的转化研究

以临优145的幼胚为外植体诱导植株再生,并进行农杆菌转化研究.以冬小麦品种临优145的幼胚为外植体,消毒后用解剖刀挑取幼胚,盾片朝上接种于MS+2,4-D 2 mg/L+肌醇100 mg/L+MES 400 mg/L+CH 100 mg/L+40 g/L麦芽糖+8 g/L琼脂的培养基中诱导愈伤组织,每2周继代一次,将诱导出的淡黄色、颗粒状Ⅱ型胚性愈伤组织接种于分化培养基(MS+ZT 1 mg/L+IAA 1mg/L+MES 400 mg/L+CH 100 mg/L+麦芽糖40 g/L+gelrite 2.6 g/L,pH 5.8)上培养2-3周,然后转接到再生培养基(1/10 MS+NAA 0.5mg/L+KT0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+gelrite 2.6 g/L,pH 5.8)中进行再生成苗.接种1229块幼胚,得到987块愈伤组织,Hyg抗性愈伤组织123块,抗性再生植株34株.在建立了再生体系的基础上,用根癌农杆菌介导法将GUS基因导入幼胚愈伤组织,抗性植株的PCR检测呈阳性.X-gluc染色表明,少部分愈伤组织出现肉眼可见的蓝色晕斑,说明GUS基因已经在小麦幼胚愈伤组织中表达.     

农杆菌介导玉米幼胚愈伤组织遗传转化体系的优化

以玉米骨干自交系‘郑58’的幼胚为材料,用农杆菌介导法对诱导培养出的胚性愈伤组织进行三价植物表达载体的遗传转化,同时对影响转化效率的主要因素进行研究.结果表明,当浸染液和共培养培养基中乙酰丁香酮(AS)的浓度为150mg·L-1时,抗性愈伤组织获得率显著提高17.39%;在菌液浓度D600为0.3、浸染时间为20min、共培养时间为60h、共培养温度为22℃、共培养培养基pH为5.4以及头孢霉素浓度为400mg·L-1的试验体系下,有利于提高玉米抗性愈伤组织的获得率,其获得率最高可达17.26%.     

矮牵牛(Petunia hybrida Vilm)组织培养技术研究

实验以矮牵牛(Petunia hybrida Vilm)的花瓣为培养材料,在MS培养基中附加不同浓度的细胞分裂素(6-BA)和生长素(NAA),进行矮牵牛快速繁殖技术研究。结果表明,MS+6-BA(2.0 mg.L-1)+NAA(0.1mg.L-1)培养基愈伤组织发生的较早,数量多,培养基为最佳分化培养基,不定芽发生早,粗壮,数量多,玻璃化程度很小;诱导不定根时,1/2 MS+NAA(0.5 mg.L-1)培养基诱导生根的时间较早,不定根发生率达100%。     

抗生素对番茄愈伤组织诱导和分化的影响

利用番茄子叶和下胚轴为材料,研究不同种类和浓度的抗生素对番茄愈伤组织诱导和生长的影响,及对农杆菌的抑菌效果。结果表明,在以卡那霉素作为抗性选择标记时,选择压力子叶为50mg·L-1,下胚轴为40mg·L-1;抑菌试验中,头孢霉素和羧苄青霉素的抑菌效果无明显差异,均能很好的抑制农杆菌生长,但头孢霉素对愈伤组织的不利影响大于羧苄青霉素。因此在番茄的遗传转化试验中,用羧苄青霉素的抑菌效果较好,建议使用浓度为350mg·L-1。     

根癌农杆菌介导反义PG基因对桃的遗传转化

以白粉桃茎段为材料,通过根癌农杆菌介导用反义多聚半乳糖醛酸酶(PG)基因对桃进行了遗传转化.将预培养3d的受体材料经根癌农杆菌菌液(D600=0.4)浸染10min后共培养60h,转移至分化培养基MS+1.0mg·L-16-BA+0.5mg·L-1NAA+50mg·L-1卡那霉素+250mg·L-1头孢氨苄青霉素上诱导产生不定芽,将抗卡那霉素的不定芽先后在含有50mg·L-1卡那霉素的生长、增殖和生根培养基上继续选择,获得了完整植株,经PCR检测初步证明反义PG基因已导入桃中.     

番木瓜胚性愈伤组织的诱导及体胚发生

以番木瓜的幼胚、下胚轴、叶片和子叶作为外植体,研究不同的激素配比、附加物以及培养方式和条件对胚性愈伤组织和体胚的诱导效果.结果表明,幼胚是胚性愈伤组织和体胚发生的好材料.幼胚最佳诱导培养基为:改良MS+10 mg·L-12,4-D+5 mg·L-1NAA+2 mg·L-1KT+0.5 mg·L-1 BA;最适合的增殖培...     

日本结缕草成熟种子愈伤组织诱导及植株再生的影响因子分析

 【目的】优化日本结缕草的组织培养体系，提高其植株再生率，建立高频植株再生体系。【方法】以日本结缕草的成熟种子为外植体，分析激素、基本培养基、培养条件、脯氨酸、Cu2+等因子对愈伤组织诱导及植株再生的影响。【结果】（1）培养基中添加脯氨酸能提高愈伤组织诱导率，而BA降低愈伤组织的诱导率，低浓度的NAA(0.1～0.2 mg·L-1)能促进愈伤组织的形成，愈伤组织诱导的最佳培养基为ND＋2,4-D 3.0 mg·L-1＋NAA 0.2 mg·L-1+L-Pro 500 mg·L-1，愈伤组织诱导率达57.3%；（2）愈伤组织继代的最佳培养基为MSD+ 2,4-D 1.0 mg·L-1；（3）愈伤组织分化的最佳培养基为MSD＋NAA 0.3 mg·L-1+KT 0.5 mg·L-1+BA 0.05 mg·L-1 + L-Pro 500 mg·L-1，分化率达36.7%。【结论】优化了日本结缕草的组织培养体系，初步找到了影响其成熟种子愈伤组织诱导及植株再生的主要因子。     

不同外源激素对胀果甘草愈伤组织诱导及褐化的影响

以胀果甘草下胚轴、子叶为外植体,以MS为基本培养基,研究了不同激素浓度配比对胀果甘草愈伤组织诱导率和褐化率的影响.结果表明:不同浓度的6-BA、2,4-D以及6-BA、NAA组合下的子叶、下胚轴愈伤组织诱导率及褐化率均具有极显著差异;NAA对子叶愈伤组织的诱导效果好于2,4-D,较高浓度的6-BA、NAA及较低浓度的6-BA、2,4-D更易导致下胚轴、子叶愈伤组织的褐化;供试范围内胀果甘草下胚轴和子叶愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+1.5mg·L-1NAA+0.5mg·L-16-BA和MS+2.5mg·L-1NAA+0.5mg·L-16-BA.     

香竹愈伤组织诱导研究

以香竹种子为培养材料进行愈伤组织的诱导和增殖,分析了不同激素组合对愈伤组织诱导和增殖的影响,并比较了香竹的种子、无菌幼根、无菌幼茎和无菌幼叶4种不同外植体诱导愈伤组织生成的效果。结果表明:香竹种子诱导愈伤组织较合适的培养基为MS+3.0 mg.L-12,4-D+0.5 mg.L-16-BA;香竹增殖愈伤组织较适合的培养基为MS+1.0 mg.L-12,4-D+1.0 mg.L-16-BA+0.5 mg.L-1KT;无菌幼根的根冠部位比幼茎和幼叶更易产生愈伤组织,而种子作为外植体效果最佳。     

壳聚糖对铬胁迫下豌豆种子萌发的影响

以豌豆(Pisum sativum L.)为材料,研究了铬对水培豌豆的胁迫作用及壳聚糖(chitosan,CTS)对铬胁迫的缓解效应。结果表明:0～200 mg.L-1铬胁迫浓度范围内,随铬胁迫浓度的增加,豌豆种子的发芽率、发芽指数和活力指数等下降,下胚轴丙二醛含量和相对电导率增加;显著抑制豌豆种子萌发的铬胁迫浓度为100mg.L-1,极显著抑制豌豆种子萌发的铬胁迫浓度为200 mg.L-1。0.5%壳聚糖可缓解铬对豌豆种子萌发的毒性。