荣昌猪基因组DNA甲基化水平分析

【目的】探讨荣昌猪基因组DNA甲基化水平随生长发育阶段和组织类型不同而变异的规律。【方法】采用HPLC法分别检测了荣昌猪阉公猪心脏、肝脏、半膜肌3种组织在10,20,35,50,80和100 kg体质量阶段基因组DNA的甲基化水平,分别以体质量和组织类型为影响因素进行单因素方差分析。【结果】与10 kg体质量阶段的基因组DNA甲基化水平相比,3种组织基因组DNA甲基化水平均随个体体质量的增加而呈下降趋势,但不同组织下降的幅度不同:心脏基因组DNA甲基化水平在35 kg时开始明显下降(P0.01),到100 kg时下降了44.00%;肝脏基因组DNA甲基化水平在80 kg时开始明显下降(P0.05),到100 kg时下降了26.06%;半膜肌基因组DNA甲基化水平在20 kg时开始明显下降(P0.01),到100 kg时下降了60.78%。半膜肌的基因组DNA甲基化水平在10 kg体质量阶段显著高于心脏(P0.05),极显著高于肝脏(P0.01),在20 kg体质量阶段极显著低于心脏和肝脏(P0.01);肝脏的基因组DNA甲基化水平在35 kg体质量阶段显著高于半膜肌(P0.05),在50和80 kg体质量阶段极显著高于心脏和半膜肌(P0.01),在100 kg体质量阶段显著高于心脏(P0.05),极显著高于半膜肌(P0.01)。【结论】体质量阶段是猪基因组DNA甲基化水平的重要影响因素之一。DNA甲基化水平在肝脏与半膜肌间具有组织特异性,而在心脏与肝脏间、心脏与半膜肌间是否具有组织特异性与体质量阶段明显相关。     

不同光照周期下黄鳝不同组织DNA甲基化的MSAP分析

为研究光照周期对黄鳝不同组织的基因组DNA甲基化的影响,设置3个不同的光照时间(8、10和12h)处理,对黄鳝心、肝、脾、肾、肠、肌肉和脑等组织基因组DNA甲基化用甲基化敏感扩增多态性(methylation sensitive amplified polymorphism,MSAP)技术进行分析。结果显示,不同组织基因组DNA对光照时间有不同的反应。其中,肌肉基因组DNA甲基化对光照周期的变化较为敏感,不同光照周期下肌肉基因组DNA总甲基化差异显著,光照周期为12h半甲基化和其他处理相比差异也很显著;肾脏和脑的基因组DNA甲基化对光照周期变化最不敏感,各处理组之间全甲基化、半甲基化和总甲基化差异都不显著;肝脏、肠、脾和心脏表现比较复杂,其中肝脏不同处理下基因组DNA半甲基化和总甲基化差异都不显著,光照周期为8h时,全甲基化差异显著;肠不同处理下基因组DNA全甲基化、半甲基化差异不显著,在光照周期为10h的处理组的总甲基化和其他处理组差异显著;脾脏在光照周期为10h和8h时全甲基化和总甲基化各处理组差异显著,在光照周期为12h时半甲基化和其他处理组差异显著;心脏在光照周期为10h时半甲基化和其他处理组差异显著。     

母鸡限饲对子代脂肪沉积、相关酶活性及其基因表达的影响

 【目的】本试验旨在研究母鸡采食量限饲对子代脂肪沉积、脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,FAS)活性及其基因表达的影响,探讨母体营养效应及子代后天的补偿作用。【方法】选择东北农业大学繁育的高、低脂系肉种母鸡各384羽,分别分为两个处理组。产蛋期,处理一饲喂正常日粮,处理二日采食量是处理一的75%。产蛋高峰期收集种蛋进行孵化。子代自由采食常规水平日粮。【结果】母鸡采食量限饲显著提高子代28日龄腿肌脂肪含量(P＜0.05),56日龄时差异不显著(P＞0.05);子代肝脏脂肪含量品系间存在差异,高脂系显著高于低脂系(P＜0.05);品系与采食水平的互作对子代肝脏脂肪含量和28日龄胸肌脂肪含量影响显著(P＜0.05);子代腹脂率品系间差异极显著(P＜0.01)。56日龄时,子代肝脏FAS酶活性品系间差异显著(P＜0.05),品系与饲喂水平的互作对肝脏FAS酶活性影响显著(P＜0.05)。子代肝脏FAS mRNA表达丰度1日龄时品系间差异显著(P＜0.05);28日龄时,品系与饲喂水平的互作对肝脏FAS mRNA的表达影响显著(P＜0.05);母鸡采食量限饲显著提高了28日龄子代肝脏FAS mRNA的表达丰度(P＜0.05);56日龄时差异不显著(P＞0.05)。【结论】母鸡采食量限饲影响子代脂肪的沉积,且品系间表现出不同的趋势;56日龄时,肉仔鸡肝脏FAS酶活性品系间差异显著(P＜0.05),且品系与饲喂水平的交互作用影响显著(P＜0.05);肉仔鸡肝脏FAS mRNA的表达丰度受母体效应的影响,并且在其后生长过程中表现出补偿作用。     

莆田黑猪血液生理生化指标测定

为掌握莆田黑猪血液生理生化的常值,笔者对40头莆田黑猪(♂18、♀22)的血液样本进行测定分析,并与部分国内地方猪种和3个国外猪种进行比较.结果表明,莆田黑猪的大多数血液生理指标在性别、不同日龄上差异不显著(P＞0.05);大部分生化指标在性别上差异也不显著(P＞0.05);但在不同日龄上,UA、TP、GOS、TG、Na、Ca的差异显著(P﹤0.05);BUN、CHOL、ALT、AST、GGT的差异极显著(P﹤0.01).比较还得知,其大多数理化指标均在国内地方猪种正常范围内,并与国内外猪种互有高低.经统计分析,建立莆田黑猪血液生理生化参考值,为其疾病防治、营养需求和保种选育等临床与科研工作提供借鉴.     

哈萨克羊MSTN基因的DNA甲基化分析

【目的】研究肌肉和脂肪组织中MSTN基因(生长抑素)的DNA甲基化水平,为改良哈萨克羊品种的选育提供遗传科学依据。【方法】基于亚硫酸氢盐的方法,测序哈萨克绵羊MSTN基因在CpG二核苷酸中的DNA甲基化水平。【结论】6月龄哈萨克羊肌肉MSTN基因DNA甲基化低,脂肪组织DNA甲基化程度最高,股二头肌,股三头肌,半膜肌,半腱肌,背最长肌和脂肪组织的MSTN基因的DNA甲基化概率分别为34.7％,22.6％,23.3％,28％,42.6％和76.7％。【结论】哈萨克羊各组织MSTN基因DNA的甲基化概率没有显著差异。脂肪组织MSTN基因DNA甲基化的最高,肌肉组织MSTN基因的DNA甲基化的概率较低。脂肪的甲基化概率是背最长肌,股二头肌,股三头肌,半腱肌,半膜肌的甲基化概率分别为:1.8倍,2.2倍,3.39倍,2.74倍,3.29倍。其次甲基化从高到低的依次为:脂肪组织>背最长肌>股二头肌>半腱肌>半膜肌>股三头肌。     

母鸡叶酸缺乏对子代MTHFD2和TYMS基因甲基化和表达水平的影响

为探究母鸡叶酸缺乏对子代与叶酸代谢相关的MTHFD2和TYMS基因甲基化模式和基因表达水平的影响,利用亚硫酸盐测序和定量PCR方法进行测定。结果表明:1)亲代叶酸缺乏对子代MTHFD2基因启动子区甲基化没有影响,该基因启动子区16个CpG位点不存在甲基化;2)子代TYMS基因ATG下游8个CpG位点甲基化主要发生在第2、3、4和5位点,但这4个CpG位点的甲基化比率在对照组和叶酸缺乏组之间均未达到差异显著水平(P0.05);并且TYMS总体甲基化水平在对照组和叶酸缺乏组之间差异也不显著(P0.05);3)母鸡叶酸缺乏可引起子代肝脏组织MTHFD2和TYMS基因表达水平均显著增加(P0.05)。综上所述,亲代叶酸缺乏对子代MTHFD2和TYMS基因表达水平发生作用,但未对基因甲基化比率造成影响,表明DNA甲基化模式由多个因素决定,可能存在叶酸以外的其他调控机制。     

柯乐猪血液基因组甲基化修饰与细胞因子水平的相关性

为探明柯乐猪血液免疫细胞的基因表达是否受甲基化调控,应用甲基化敏感扩增多态性技术(MSAP)和酶联免疫吸附测试技术(ELISA)对柯乐猪与大白猪血液基因组DNA的甲基化水平、血清中的细胞因子浓度进行检测,分析柯乐猪与大白猪在甲基化水平、细胞因子浓度方面的差异及其相关关系。结果表明:柯乐猪基因组总甲基化水平为32.38%,与大白猪接近(P0.05);IL-2、IL-4、IL-6和IL-10浓度分别为(302.37±125.72)pg/mL、(88.71±32.05)pg/mL、(219.01±30.42)pg/mL和(116.95±30.24)pg/mL,其中IL-6和IL-10分别极显著、显著低于大白猪;IFN-α、IFN-γ分别为(211.09±76.08)pg/mL和(57.18±14.21)pg/mL,分别极显著、显著高于大白猪。柯乐猪基因组的全甲基化水平与IFN-γ浓度间呈弱负相关关系(ρ=-0.256)。说明,血液免疫细胞的基因表达可能受甲基化的调控,且与柯乐猪的抗病力强有关。     

猪NCOA3启动子甲基化对其在肌内和皮下脂肪组织差异表达的影响

[目的]以新淮猪肌内脂肪和皮下脂肪为试验材料,探讨核受体辅激活蛋白3(NCOA3)启动子甲基化对其在肌内与皮下脂肪组织中差异表达的影响。[方法]采用RT-PCR的方法检测NCOA3在肌内脂肪与皮下脂肪组织的表达水平。构建NCOA3启动子缺失报告载体,并采用双荧光报告基因系统分析启动子区域活性。预测NCOA3启动子区Cp G岛,利用亚硫酸氢盐法(BSP)检测2种脂肪组织NCOA3启动子区Cp G岛甲基化水平,并通过甲基转移酶处理,以检测甲基化对NCOA3基因启动子活性的影响。[结果]NCOA3 mRNA在肌内脂肪组织中表达水平极显著低于皮下脂肪组织(P0.01),其中-150~-3 bp区域启动子活性最高,Cp G岛位于-930~-699 bp,且其整体甲基化水平在肌内脂肪与皮下脂肪组织中差异不显著(P0.05),分别为90.0%,83.5%,但-904位点CG甲基化水平差异显著(P0.05)。经甲基转移酶处理p LUC-1057(包含Cp G岛)载体荧光活性显著下降(P0.05)。[结论]NCOA3基因在肌内脂肪与皮下脂肪组织存在着表达差异,-904位点CG甲基化水平对肌内与皮下脂肪组织表达差异存在影响。     

梭鱼脂肪酸合成酶基因部分片段的克隆和表达分析

分离、克隆梭鱼脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,简称FAS)基因的部分c DNA片段(Gen Bank登录号为KJ848474),共920 bp,编码303个氨基酸,序列分析表明梭鱼FAS基因与其他物种的同源性为74%~95%,其中与军曹鱼、斑马拟丽鱼相似性达95%。FAS基因mRNA在梭鱼鱼皮、肌肉、肝脏、心脏、脾脏、肾脏、胃、肠、腹腔脂肪、脑和鳃组织中表达丰度差异显著(P0.05),脑中含量最高,其次是肝脏和腹腔脂肪组织,肌肉中表达量最低,其余7种组织中的表达量均显著低于脑和肝脏(P0.05)。此外,还研究了饲料脂肪水平对梭鱼FAS活性和mRNA表达的影响,平均质量为(9.5±0.3)g的梭鱼幼鱼投喂6种不同脂肪含量的等氮等能饲料(脂肪水平分别为2.04%、4.83%、7.47%、9.79%、12.01%、14.59%),饲养60 d,试验结束后测定各组梭鱼肝脏中FAS的生物活性及肝脏、腹腔脂肪、肌肉中FAS mRNA的表达丰度。结果表明,随着饲料脂肪水平的升高,肝脏中FAS活性呈降低趋势,14.59%组的活性显著低于2.04%、4.85%组(P0.05);肝脏中FAS的mRNA表达量显著下降(P0.05);肌肉和腹腔脂肪中FAS的mRNA表达量呈下降趋势,但各组之间差异不显著(P0.05)。     

O～8月龄藏獒生长发育规律的探讨

本试验研究了雌雄藏獒从出生到8月龄体重及各体尺的发育规律.结果表明:雌雄藏獒在4月龄前体重、体高差异不显著;雄性藏獒体重从4月龄开始显著大于雌性犬(P＜0.05);体高在4月龄以后雄性犬显著大于雌性犬(P＜0.05);胸围和管围在3月龄以后雌雄之间差异显著(P＜0.05);耳长只在3、4、5月龄时雄性犬显著高于雌性犬(P＜0.05);雌雄藏獒的体长、管围指数和尾长在0～8月龄之间无明显差异(P＞0.05);管围指数随月龄增加而下降.雌雄犬的体重平均日增长量高峰分别在5月龄和4月龄,体高平均日增长量高峰分别在2月龄和3月龄,体长平均日增长量高峰都在4月龄,胸围平均日增长量高峰分别在4月龄和3月龄,管围平均日增长量高峰分别在2月龄和3月龄,耳长平均日增长量高峰都在2月龄,尾长平均日增长量高峰分别在4月龄和3月龄.本研究建立了雌雄犬日龄与体重及各体尺的一元二次方程,根据日龄可预测雌雄犬的生长发育规律.     

鸭MyoG基因启动子的生物信息学分析及其甲基化频率对基因表达的影响

采用RT–PCR技术扩增和克隆鸭Myo G基因启动子,并对其启动子序列进行生物信息学分析,采用Sequenom Mass Array技术检测Cp G岛在鸭肌肉组织中的甲基化水平,用q RT–PCR检测Myo G基因的表达量。结果表明,扩增得到鸭Myo G基因启动子序列2 730 bp,对启动子序列预测后,发现存在2个Cp G岛,其中Cp G岛(–2 536~–1 997 bp)存在5个转录因子结合位点和多个真核生物结构元件。甲基化检测结果表明:在鸭的个体和组织水平上,启动子甲基化率均未聚类在一起;Cp G位点甲基化频率存在个体差异,22%Cp G位点的甲基化频率与Myo G的m RNA表达量呈负相关(P0.05),78%Cp G位点的甲基化频率呈正相关(P0.05),其中,腿肌甲基化位点Cp G_1、Cp G_26.27.28.29的甲基化频率与Myo G基因表达水平均呈显著相关(P0.05)。Myo G基因在鸭与在哺乳动物中的转录调控机制存在差异。试验中发现多个影响鸭Myo G基因转录的潜在甲基化位点,其中Cp G_1与Cp G_26.27.28.29能通过DNA甲基化修饰影响Myo G基因在鸭腿肌中的转录。本研究结果可为鸭Myo G基因转录调控提供参考依据。     

水稻干旱胁迫诱导DNA甲基化时空变化特征分析

 【目的】研究水稻抗旱导入系DK106和旱敏感轮回亲本IR64苗期和分蘖期干旱胁迫前后DNA甲基化的变化情况,并比较分析叶片和根部DNA甲基化变化特征,探讨DNA甲基化在水稻干旱胁迫反应中的作用。【方法】用甲基化敏感扩增多态性技术（methylation sensitive amplified polymorphism,MSAP）和高效液相层析（high performance liquid chromatography,HPLC）方法分析DNA甲基化变化情况;从聚丙烯酰胺凝胶回收甲基化多态性片段并克隆测序及序列比对。【结果】MSAP分析结果显示,水稻基因组中约有20%的CCGG位点发生了胞嘧啶甲基化;水分胁迫导致DNA甲基化平均水平明显增加,其中根部增加幅度尤为明显;DNA甲基化水平及状态变化在品种间存在差异,同时具有时期及组织特异性。对干旱胁迫特异诱导DNA甲基化片段序列分析结果表明,基因编码区和非编码区发生DNA甲基化的频率基本相同。【结论】干旱胁迫反应过程中DNA甲基化表现出一定时空特异性和品种特异性,且与品种抗旱性差异相关。     

NaCl胁迫对黄瓜种子萌发的影响及DNA甲基化的MSAP分析

【目的】研究黄瓜种子萌发过程中DNA甲基化动态变化情况以及外源施加NaCl对种子萌发及种子DNA甲基化水平的影响,探索DNA甲基化在黄瓜种子萌发过程及NaCl胁迫反应中的作用。【方法】运用甲基化敏感扩增多态性（methylation se nsitive amplified polymorphism,MSAP）技术,分析0、150、200 mmol•L-1 NaCl处理下,黄瓜种子萌发过程（0、1、2、4、6、8 d）的DNA甲基化水平及动态变化情况。【结果】MSAP结果显示,黄瓜种子CCGG位点的甲基化水平约15.25%,以双链甲基化方式为主。种子中DNA甲基化水平在萌发1—2 d略有升高,而在整个萌发过程中呈下降趋势;NaCl处理加剧了甲基化的变化幅度,并使萌发末期的甲基化水平更低。萌发过程中甲基化升高和降低同时发生,分别在不同萌发时期占主导,不同变化类型中CG/CHG（H=A,T,C）位点胞嘧啶甲基化同时变化的类型占主导。甲基化变化同时发生在编码序列和非编码序列中。【结论】黄瓜种子萌发过程的DNA甲基化表现出复杂性,甲基化和去甲基化进程同时进行,并具有时空特异性。NaCl处理降低了种子基因组甲基化水平的稳定性,对种子萌发有抑制作用。     

妊娠后期胎儿宫内生长受限对出生后羔羊内脏器官的影响

【目的】研究妊娠后期胎儿宫内生长受限对出生后羔羊内脏器官的影响。【方法】选择健康的蒙古绵    羊45只（经同期发情且同期受孕）,妊娠（90±1） d分为自由采食组（CG）、0.33 MJ ME•kgw-0.75•d-1（RG1）以及0.175 MJ ME•kgw-0.75•d-1（RG2）3个营养水平处理组,进行不同营养水平的限饲饲养。各组分别于羔羊初生及28周龄时选择4只屠宰,取出内脏。【结果】妊娠后期不同营养水平限饲母羊,严重限制了RG1（P＜0.05）、RG2（P＜0.01）组羔羊的平均初生体重：①初生时,RG1组羔羊仅肺脏重和肺脏组织总DNA含量显著低于CG组（P＜0.05）,脾脏重及脾脏组织总DNA含量极显著低于CG组（P＜0.01）;而 RG2组羔羊肺脏和脾脏均显著低于CG组（P＜0.01）,心脏、肝脏、肾脏、总胃及小肠重均显著低于CG组（P＜0.05）;其中,心脏和肾脏总DNA含量、肺脏总DNA含量和蛋白与DNA含量比、肝脏组织蛋白和DNA含量比均显著低于CG组（P＜0.05）。②28周龄时,RG1组胎儿期生长受限的肺脏、脾脏重及其总DNA含量与对照组差异不显著（P＞0.05）;除心脏外,RG2组胎儿期生长受限的肝脏、肺脏及脾脏重出生后经过28周的生长与CG组差异不显著（P＞0.05）;RG2组胎儿期降低的肾脏、脾脏细胞总DNA含量,肝脏细胞蛋白和DNA比,在试验结束羔羊28周龄时与CG组差异不显著（P＞0.05）,并且肺脏细胞蛋白和DNA比显著高于CG组（P＜0.05）,而心脏和肺脏组织总DNA含量仍显著低于CG组（P＜0.05）。【结论】妊娠后期胎儿宫内生长受限通过对其胎儿内脏器官细胞增殖与增肥不同程度的影响而改变了出生后羔羊内脏器官的生长发育轨迹。     

河曲藏獒生长发育的研究

对河曲藏獒初生、断奶、3月龄、6月龄、12月龄、18月龄、24月龄体质量和体尺进行了测定和分析。结果表明:河曲藏獒公犬体质量从3月龄开始极显著地大于母犬(P<0.01),体高从12月龄开始极显著地大于母犬(P<0.01),胸围只在6月龄极显著大于母犬(P<0.01)。在其它生长阶段中,公母犬间无明显差异(P>0.05)。河曲藏獒有较高的平均日增重,公、母犬最大日增重分别为220.66 g,193.66 g,12月龄体质量分别为48.80 kg,44.65 kg。在断奶到6月龄期间加强对藏獒幼犬培育十分重要。     

不同糖及糖水平对松浦镜鲤GH/IGF-Ⅰ基因表达和鱼体组成的影响

本研究旨在探讨不同糖及糖水平对松浦镜鲤GH(Growth hormone)/IGF-I(Insulin-like growth factor-I)基因表达和鱼体组成的影响。选用初始体重(8.30±0.15) g的松浦镜鲤420尾,随机分为4组,每组3个重复,每个重复35尾鱼。分别饲喂添加25%和50%的淀粉(LS/HS)和葡萄糖(LG/HG)饲料,试验周期为60d。试验结果表明：HS组和LS组的GH基因表达量显著低于LG组(P<0.05)。HS组的IGF-I基因表达量显著低于LS组和LG组(P<0.05)。各试验组的鱼体粗蛋白含量差异不显著 (p>0.05)。HS 组的水分值显著低于其他试验组(P<0.05),粗脂肪含量显著高于其他各组(P<0.05)。氨基酸组成结果显示,HS 组的Leu含量和Cys含量显著低于LG组 (P<0.05),Ala含量显著低于LS组和LG组 (P<0.05),其他各组间差异不显著(p>0.05);其他氨基酸含量各组间差异不显著(p>0.05)。必需氨基酸总量、半必需氨基酸总量、非必需氨基酸总量和总氨基酸含量各组间差异不显著(p>0.05)。综上,饲料中添加高水平的淀粉抑制了GH基因和IGF-I基因的表达,同时增加了全鱼粗脂肪含量、降低了一些氨基酸的含量。     

Analysis of DNA methylation of CD79B in MDV-infected chicken spleen

Marek's disease (MD), an immunosuppressive disease induced by Marek's disease virus (MDV), provides an ideal model for studying diseases caused by a carcinogenic virus. CD79B is a B-cell antigen receptor complex-associated protein β-chain precursor which is involved in the activation, proliferation, differentiation of B-cell and the transmission of downstream signals. This study analyzed CD79B gene mRNA expression and methylation by two schemes #20 (5´ flanking to intron 1) and #27 (intron 2 to intron 3), between MDV-infected tumorous spleens (TS) and non-infected spleens (NS). Results showed that average methylation levels of CpGs in #20 and #27 were higher in TS than in NS (P<0.05), while, CD79B mRNA expression was lower in TS than in NS (P<0.01). Six of 40 CpG sites showed significantly (P<0.05) different methylation levels between TS and NS. Correlation analysis showed that the average methylation level rather than a single site methylation level in #20 affected (P<0.05) mRNA expression. Collectively, it was found that the change of CD79B gene expression after MDV infection might be partly explained by modification of DNA methylation.     

二氢吡啶预防蛋鸡脂肪肝的效果研究

选300日龄仙居种肉鸡540羽,随机分成3组(每组设4个重复,每个重复45羽),分别饲喂添加0(对照组)、150和300 mg/kg二氢吡啶的玉米-豆粕型饲粮,以研究二氢吡啶对蛋鸡脂肪肝的影响.结果表明:添加150 mg/kg和300 mg/kg二氢吡啶使蛋鸡平均产蛋率分别提高了9.39%(P<0.01)和12.97%(P<0.01);料蛋比分别降低了9.54%(P<0.05)和7.25%(P<0.05);腹脂率分别下降35.4%(P>0.05)和46.9%(P<0.05);肝脂率分别降低32.4%(P<0.05)和10.5%(P>0.05);腹脂激素敏感脂酶活性升高39.46%(P<0.05)和48.48%(P<0.05); 乳酸脱氢酶活性下降了 32.94% (P<0.01) 和25.16%(P<0.05); 门冬氨酸基转移酶下降了21.78% (P<0.05) 和 7.43%(P>0.05).结果提示:二氢吡啶具有良好的降低肝脂率和提高产蛋率的作用.     

柠条替代部分粗料对泌乳中期奶牛产奶量及乳品质的影响

为了探索不同柠条水平对奶牛产奶量及乳品质的影响,试验选用6头年龄、胎次相同,体质量、泌乳天数相近的中国荷斯坦奶牛,随机分为3组,1组对照组,2组试验组,每组2头牛.整个试验期分为3阶段,进行3×3重复拉丁方饲养试验.2组试验组分别用柠条替代15%和30%的粗料,3组配方为等能等氮,研究柠条的最适添加量.结果表明:3组之...