绿茶多酚诱导肝癌细胞凋亡时Caspase-3蛋白活性与mRNA的变化

[目的]研究绿茶多酚(EGCG)诱导肝癌细胞Hep-G2凋亡过程中半胱天冬酶-3(Caspase-3)蛋白活性与mRNA的变化。[方法]100 mg/L的EGCG处理Hep-G2细胞48 h,DAPI染色观察细胞形态学,用MTT检测EGCG对Hep-G2细胞生长的影响,流式细胞技术Annexin V-FITC PI法检测不同浓度EGCG诱导细胞的凋亡率,分光光度法检测Caspase-3的活性,用半定量RT-PCR法检测Caspase-3的mRNA变化。[结果]100 mg/L的EGCG作用Hep-G2细胞48 h后,荧光显微镜观察到细胞出现核碎裂和凋亡小体;MTT法检测到EGCG对肝癌细胞Hep-G2的生长均有显著抑制作用,呈浓度依赖性;Annexin V-FITC PI法检测到不同浓度的EGCG作用与肝癌细胞Hep-G2后,凋亡率较对照组明显升高,并随诱导浓度的增加而增加;不同浓度的EGCG处理组和不同时间EGCG处理组的Caspase-3活性和mRNA表达量均比对照组明显升高。[结论]Caspase-3蛋白活性与mRNA上调是EGCG诱导肝癌细胞凋亡的的重要原因和机制。     

EGCG抗癌分子相关机理研究进展

表没食子儿茶素表没食子酸酯(EGCG)具有很好的抗癌活性,但其抗癌的分子机理较复杂,可通过多条途径抑制癌细胞生长或诱导癌细胞凋亡,其中较为关键的分子机理与EGCG的抗血管形成、阻滞癌细胞生长周期、抑制部分转录因子的表达以及调节细胞相关信号转导机制等有着密切的联系。综述了近年来国内外EDCG抗癌的分子机制研究进展。     

茶叶提取物EGCG 对B16小鼠黑素瘤细胞的影响

采用倒置显微镜观察茶叶中提取物EGCG对B16小鼠黑素瘤细胞形态的影响,亚甲基蓝染色法测定EGCG 对B16细胞增殖率的影响,L 多巴氧化法测定EGCG 对B16细胞酪氨酸酶活力的影响,氢氧化钠裂解法测定 EGCG对B16细胞黑色素生成量的影响.结果表明:EGCG作用24h,高浓度组(>60μmol)细胞胞膜融合现象明 显;作用72h,高浓度组大部分细胞死亡.EGCG对B16细胞增殖率、酪氨酸酶活性、黑色素生成量均有显著抑制, 呈明显的剂量效应关系,且EGCG抑制B16细胞增殖,IC50为33.99μmol.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对葡聚糖硫酸钠诱导小鼠炎症性肠病的保护作用

通过设立空白组、对照组、表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate, EGCG)处理组,探究EGCG对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium, DSS)诱导小鼠炎症性肠病的影响。结果发现,EGCG处理组的小鼠脾明显比对照组小,并且EGCG能够降低小鼠肠道固有层细胞和肠道组织上清液中白介素-6(interleukin-6, IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)的表达及分泌(P0.01),而对IL-10的表达与分泌无明显作用(P0.05)。EGCG对小鼠肠上皮细胞紧密连接蛋白claudin-1、occludin的表达无显著影响,小鼠肠道苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色结果也显示肠道黏膜和上皮屏障损伤无明显变化。综上所述,EGCG能够抑制炎症因子分泌,减少由肠道炎症引起的小鼠全身性炎症反应,对DSS诱导的小鼠炎症性肠病起到一定的保护作用。     

EGCG通过NF-κB信号通路抑制感染ALV-J病毒的DF-1细胞凋亡

【目的】评价表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是否具有抗J亚型禽白血病毒(ALV-J)效应,为AVL-J防治药物的研发提供理论依据。【方法】在感染ALV-J病毒的DF-1细胞中分别添加浓度为0,5,10,20和40μg/mL的EGCG溶液后培养的0,24,48,72和96 h,对其细胞活性、细胞中env基因表达量,禽白血病p27抗原水平,NF-κB活性以及NF-κB p50和p65蛋白表达进行了测定。【结果】EGCG对感染ALV-J病毒后DF-1的保护作用具有剂量效应,10μg/mL效果最好。在ALV-J侵染的DF-1细胞中添加10μg/mL的EGCG溶液96 h后,可显著抑制由于ALV-J病毒导致的NF-κB亚基p50和p65跨膜转移,降低由于ALV-J病毒造成的细胞凋亡。【结论】EGCG通过抑制NF-κB信号的激活来提高DF-1细胞对ALV-J病毒的抵御能力,且具有显著的剂量效应,10μg/mL为最佳添加浓度。     

EGCG对铜绿微囊藻的抑制效应及机制研究

[目的]本文旨在研究EGCG对铜绿微囊藻的抑制效应,初步揭示其抑藻机制,为高效环保型抑藻剂的开发利用奠定基础。[方法]表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是茶叶中组分最高的一种儿茶素,对铜绿微囊藻具有高效而持续的抑制作用。分别用8、12和16 mg·L-1的EGCG处理对数生长期的铜绿微囊藻培养液,测定藻细胞的生长状态和生理生化活性。[结果]EGCG处理后藻细胞生长受到不同程度的抑制;光合作用效率下降;细胞内活性氧水平升高,抗坏血酸能缓解氧化胁迫。电镜观测结果显示:EGCG处理导致藻细胞内类囊体结构遭到破坏,细胞皱缩变形;藻细胞培养液中的藻毒素含量在处理前后没有显著变化,细胞内藻毒素含量显著下降。[结论]EGCG对铜绿微囊藻的生长和繁殖造成很强的抑制作用,是一种很有潜力的抑藻剂。     

儿茶素EGCG对Caco-2细胞α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用研究

试验对Caco-2细胞膜上蔗糖酶和麦芽糖酶这两种α-葡萄糖苷酶活性进行不同培养时间检测,并以儿茶素单体EGCG作为抑制剂,探究其对Caco-2来源的蔗糖酶和麦芽糖酶的抑制效果。结果表明,Caco-2细胞培养18 d后膜表面具有较高活性的蔗糖酶和麦芽糖酶,可用于进行α-葡萄糖苷酶抑制剂筛选。儿茶素EGCG具有蔗糖酶和麦芽糖酶抑制活性,抑制IC50分别为31.08μg/m L和36.44μg/m L。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对脂多糖诱导小鼠肝脏氧化应激、炎症和凋亡的影响

为探究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠肝脏损伤的影响。将24只雄性BALB/c小鼠随机分为三组：Con组、LPS(腹腔注射10 mg·kg^-1LPS)组和LPS+EGCG(灌胃80 mg·kg^-1EGCG+腹腔注射10 mg·kg^-1LPS)组。结果表明,与LPS攻毒组相比,灌胃EGCG小鼠的血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平显著降低;小鼠肝脏组织中抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平显著升高,肝脏丙二醛(MDA)水平显著降低。同时,灌胃EGCG小鼠肝脏中促炎细胞因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-1β、白介素(IL)-18和白介素(IL)-22的mRNA表达水平显著降低;肝脏中促凋亡相关蛋白Bax蛋白水平显著降低,抑制凋亡蛋白Bcl2和p-AMPK蛋白水平显著升高,Bcl2/Bax比值也显著升高。可知,EGCG可能通过激活AMPK途径抑制肝细胞凋亡,降低炎症因子表达,改善LPS诱导的小鼠肝脏病理损伤,缓...     

茶叶提取物EGCG和GCG及ECG对B16细胞内黑色素生成的抑制作用

为研究茶叶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)、没食子儿茶素没食子酸酯(gallocatechingallate,GCG)和表儿茶素没食子酸酯(epicatechingallate,ECG)对体外培养B16小鼠黑色素瘤细胞黑色素生成及酪氨酸酶活性的影响,分别用不同浓度的EGCG、GCG、ECG和熊果苷(Arbutin,AR)处理细胞,观察效应物对细胞形态的影响,用溴化二苯四偶氮法(MTT法)测定茶叶提取物对细胞增殖率的影响,以左旋多巴(L–DOPA)为底物,测定细胞内酪氨酸酶的活性,采用氢氧化钠裂解法测定细胞内黑色素的含量。结果显示,EGCG、ECG、GCG能显著抑制B16细胞的黑色素生成和酪氨酸酶的活性,且呈剂量依赖关系;当浓度为60μg/mL时,细胞增殖率均低于50%,酪氨酸酶活性与对照组相比分别降低了26.67%、27.27%和32.71%,黑色素生成抑制率均在30%以上。结果表明,茶叶提取物能通过多种途径抑制黑色素生成,且GCG的作用效果最优,ECG的作用效果次之,三者的作用效果均优于熊果苷的作用效果。     

外源表没食子儿茶素没食子酸酯对甜瓜幼苗白粉病抗性的影响

白粉病是甜瓜生产中常见的真菌病害,严重影响果实的产量和品质。以甜瓜品种甜宝为试验材料,通过外源表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)处理,探讨EGCG对甜瓜白粉病抗性的影响。通过二氨基联苯胺(DAB)染色和丙二醛(MDA)的测定结果表明,外源喷施EGCG能够减少白粉病侵染所引起的活性氧积累,MDA含量显著下降,甜瓜叶片细胞膜脂过氧化程度降低。甜瓜叶片抗氧化酶活性分析表明,外源EGCG预处理,过氧化氢酶(CAT)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)4种主要抗氧化酶活性都显著升高。抗氧化酶活性也受到白粉病入侵的诱导,但外源EGCG预处理进一步促进了抗氧化酶的提高。利用实时定量PCR技术进一步分析了相关基因的表达情况,结果显示,抗氧化酶相关基因CmCAT、CmAPX、CmSOD、CmPOD也均受到外源EGCG的诱导表达。上述研究结果表明,外源喷施EGCG可以通过调控甜瓜叶片的抗氧化酶系统,降低白粉病侵染所引起的活性氧爆发,从而提高了甜瓜对白粉病的抗性。     

真菌诱导物对丹参转化细胞几种氧化酶活性的影响

用大丽轮枝菌(Verticillium dahliae Kleb.)激发子V44和酵母提取物y-e分别诱导悬浮培养的丹参(Salvia miltiorrhiza)转化细胞,发现丹参转化细胞过氧化物酶、过氧化氢酶和多酚氧化酶活性均随诱导时间和诱导剂浓度的增加而改变.结果表明:大丽轮枝菌激发子的作用强于酵母提取物,y-e V44联合诱导作用强于单一激发子刺激.     

重组人碱性成纤维细胞生长因子诱导Balb/c3T3细胞增殖的实验研究

目的研究不同浓度重组人碱性成纤维细胞因子对Balb/c 3T3细胞增殖活性的影响.方法重组质粒pGEX-bFGF转入到DH5α大肠杆菌体内,增菌培养表达bFGF,亲和层析纯化,制备8种不同药物浓度的bFGF,分别进行诱导Balb/c 3T3细胞增殖实验研究,MTT法检测各组细胞增殖活性.结果 bFGF诱导Balb/c 3T3细胞增殖存在浓度依赖性,最适浓度为4～16μg/L.结论 bFGF具有较好的诱导Balb/c 3T3细胞增殖的能力,为后续研究工作奠定实验基础.     

植物细胞悬浮培养的影响因素

综述了植物愈伤组织诱导以及悬浮细胞培养的影响因素。     

外源激素对烟草离体叶片组织分化的影响

研究了外源激素对烟草离体叶片组织细胞的增殖和器官分化的影响以及诱导叶片组织形成器官所需的作用时间。结果表明,外源激素对诱导烟草叶片组织的分化是必需的,而对启动之后的分化则是不利的。     

原花青素对SMMC-7721肿瘤细胞凋亡及其端粒酶活性的影响

采用M TT法、HE染色、DNA电泳、TUNEL法和TRAP法(端粒重复序列扩增法),研究原花青素对人肝癌细胞SMM C-7721株凋亡及端粒酶活性的影响,探讨了其抗癌机制。结果表明,原花青素可抑制SMM C-7721肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低细胞端粒酶活性。说明原花青素具有诱导肿瘤细胞凋亡和降低肿瘤细胞端粒酶活性2种抗肿瘤作用。     

钙与生物体损伤的研究进展

从钙的吸收、血钙的调节等方面对钙的生理作用进行全面阐述,以揭示钙与疾病及细胞凋亡之间的关系,通过对低钙和高钙引发的疾病和不良症状的描述,阐明了钙对生物体的影响,同时指出,钙的一些生理特性关系到很多疾病的诱因,并且还与细胞凋亡的调控有一定的关联。     

试验用和临床用紫杉醇诱导肝癌细胞凋亡的比较

[目的]为了探讨试验用和临床用紫杉醇对肝癌HepG2细胞凋亡诱导作用的差异。[方法]用不同浓度的试验用和临床用紫杉醇处理肝癌HepG2培养细胞后,通过显微观察和流式细胞术检测其细胞凋亡。[结果]临床用紫杉醇在终浓度为0.5、1.0和2.0 mg/ml时,24 h非常显著性诱导细胞凋亡,48 h诱导细胞凋亡更剧烈。试验用紫杉醇24 h在终浓度为2.5、5.0和10.0 mg/ml时,非常显著诱导细胞凋亡;当试验用紫杉醇浓度为2.5 mg/ml时,48 h诱导细胞凋亡更剧烈。当试验用紫杉醇浓度为5和10 mg/ml细胞凋亡率逐步变低,可能走向死亡。[结论]在诱导肝癌细胞凋亡中,试验用紫杉醇要比临床所用紫杉醇的浓度要高。     

Zeylenone对急性淋巴细胞白血病细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨Zeylenone体外抗急性淋巴细胞白血病(Acute Lymphoblastic Leukemia,ALL)效应及作用的可能机制。方法应用MTT法比较Zeylenone对肿瘤细胞、正常细胞增殖的影响;AO/EB染色观察其对ALL细胞(Reh、RS4;11)凋亡形态学的改变;流式细胞仪检测药物对细胞凋亡及细胞周期的影响。结果 Zeylenone对多种细胞呈现增殖抑制作用,且对ALL细胞株呈现更高的敏感性,而对外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)抑制作用较小,抑制Reh、RS4;11细胞增殖呈时间依赖性和剂量依赖性;Zeylenone能够诱导ALL细胞凋亡,阻滞细胞周期于G0/G1期。结论 Zeylenone体外具有抗ALL细胞增殖的作用,其作用与诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期相关。     

抗氧化剂对杏和中国李原生质体培养的影响

以杏和中国李种胚愈伤组织为试材,研究了抗氧化剂对原生质体培养效果的影响。结果表明,在酶解液和培养基中加入聚乙烯吡咯烷酮对提高原生质体产量、活力和分裂能力具有显著的效果。在培养基中加入不同浓度的甘氨酸和抗坏血酸也可提高中国李原生质体培养的分裂频率和植板率。