异育银鲫对嗜水气单胞菌灭活菌苗的免疫应答

采用神尔马林灭活的嗜水气单胞菌（Aeromondas hydrophila)菌苗免疫接种异育银鲫，通过测定受免鱼血清中凝集抗体效价，溶菌酶活性，血液中吞噬细胞的吞噬活性，杀菌活性并通过鱼体攻毒试验，探讨了异育银鲫对福尔马林灭活的嗜水气单胞菌菌苗的免疫应答状况，结果表明，接种28d后，受免鱼血清中凝集抗体效价和溶菌酶活性均值分别为1：18.89和156.36U/dml，相应的对照组则为1：0.83和138.68dU/ml；受免鱼血中白细胞吞噬百分比和吞噬指数分别为63.38%和6.02，而对照组的分别库存47.95%和5.08；免疫组和对照组白细胞的杀菌指数分别为1.59和1.15，受免鱼的免疫保护力达到73.7%。     

同腹异育银鲫对鱼类3种致病弧菌粗脂多糖的免疫应答

用从鳗弧菌（Vibrio anguillarun)，哈维氏弧菌（Vibrio harveyi)和副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus)等3种弧菌中提取的菌体粗脂多糖（LPS）作为免疫原，分别经胸鳍基部接种同腹异育银鲫（Carassius auratus gibelio)后，通过测定受免鱼的凝集抗体效价，明和血液中吞噬细胞的吞噬活性和杀菌活性，检测3种弧菌的粗LPS对异有银鲫免疫应答的试验结果。结果表明，3种弧菌的粗LPS对异育银鲫均具有较强的免疫原性，受免鱼的血清中出现对3种弧菌的福尔马林灭活菌体（FKC）的交叉凝集抗体；与对照鱼相比，受免鱼头肾和血液中吞噬细胞的吞噬活性和杀菌活性明显上升，证明在3种弧菌的粗LPS上存在共同保护性抗原，而且这些共同保护性抗原对异育银鲫具有较强的免疫原性。     

草鱼对点状气单胞菌菌苗的免疫反应

将点状气单胞菌用福尔马林、苯酚以及加热来灭活后，给草鱼注射接种，通过测定免疫鱼血清凝集抗体效价、血液中吞噬细胞的吞噬活性和强毒攻击的免疫保护力，证实了３种方法灭活的菌苗对草鱼均具有较强的免疫原性，并以苯酚灭活菌苗的免疫保护力最强。     

柱状嗜纤维菌的血清型与其菌苗抗原性的关系

采用不同血清型的柱状嗜纤维菌Ｇ－４，ＣＴＳ－５，和Ｍ－１５７等３个菌株，分别制备成福尔马林灭活菌苗（ＦＫＣ）和热灭活菌苗（ＨＫＣ），注射接种草鱼４周后，通过测定血清中凝集、交叉凝集抗体效价以及活菌攻毒试验，证明了３个菌株制备的菌苗的抗原性不存在差别。     

鸡大肠杆菌(O78)超声波灭活菌苗研究

菌毛提取液,荚膜多糖－破伤风类毒素（ＣＰＳ－ＴＴ）载体抗原液及热、甲醛和超声波灭活菌液中加入蜂胶佐剂,制成菌苗免疫石岐杂鸡,７７及１１２ｄ攻毒保护试验结果表明,超声波灭活菌体的免疫原性最好,热灭活菌体最差,菌毛,ＣＰＳ－ＴＴ及甲醛灭活菌体的免疫原性相当。尤其采用超声波处理的菌液作抗原为明显。     

猪水肿病灭活菌苗的免疫效果观察

以猪水肿病的常见致病性大肠杆菌血甭型混合地方菌株制成铝胶灭活菌苗，免疫小白鼠和仔猪，经实验室和区域实验，证实该菌苗对猪安全有效，对猪水肿病的保护率达９８％，显示出良好的实际应用效果。     

大黄鱼弧菌病综合防治对策的初步研究

在5月下旬用哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)灭活菌苗对大黄鱼(Pseudosciaena crocea)幼鱼进行浸泡免疫，7月至8月高温季节投喂添加防病药物或者uharveyi灭活菌苗的配合饲料，进行了综合防病试验。试验结果表明，uharveyi灭活菌苗浸泡免疫接种可以有效地预防uharveyi对受免大黄鱼的感染，但是，受免鱼对副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)的感染则没有显著的保护；高温季节投喂添加药物的配合饲料能够有效地降低大黄鱼的死亡率，而将药物添加在鱼糜中后的投喂方式则不能获得明显防病效果；对受免鱼口服灭活菌苗后在56d内仍然可以观察到加强免疫效果。     

草鱼对点状气单胞菌和柱状屈桡杆菌二联菌苗的免疫反应

将酚灭活的点状气单胞菌和柱状屈桡杆菌菌苗按不同比例制备成二联菌苗，注射接种草鱼后，通过检测受免草鱼血清中的凝集抗体效价和攻毒试验，初步证明了由这两种菌制备的酚灭活菌苗，可刺激草鱼产生良好的免疫反应，免疫保护力达到５６．０％～７３．０％。     

哈维氏弧菌的血清型与菌苗抗原性的关系

采用不同血清型哈维氏弧菌Vibrio hanwyi624、809和106等3个菌株，制备成福尔马林灭活菌苗，注射接种大黄鱼4周后，通过血清中凝集、交叉凝集抗体效价测定以及活菌攻毒试验，证明了3个菌株制备的菌苗抗原性存在差异。     

鸭疫里氏杆菌油乳剂灭活苗的研制

<正>鸭疫里氏杆菌病(又称鸭传染性浆膜炎、鸭疫巴氏杆菌病)是雏鸭一种常见的急性败血性传染病。预防控制该病的方法是药物防治和菌苗接种,我们以本地分离株制备种子液,再将种子液接种鸭胚增殖培养,收获菌液经甲醛灭活后制备成油乳剂灭活菌苗,进行免疫攻毒试验,保护率为75.0%。在部分鸭场使用该菌苗,结果证明安全有效。     

哈维弧菌及其主要致病因子的研究进展

哈维弧菌作为水产养殖中重要的致病菌,近十多年得到了广泛研究。就哈维弧菌的危害对象和发病症状进行了概述,归纳了该病致病因子的研究进展,并总结了目前哈维弧菌的检测技术和防治方法,以期为哈维弧菌致病机理的进一步深入研究提供参考和借鉴。     

仿刺参不同组织液的抗菌活性

采用平板菌落计数法测定仿刺参Apostichopus japonicus体腔液、体腔液上清液、体腔细胞悬液和体壁内皮组织匀浆液对哈氏弧菌Vibrio harveyi的抑制作用,并对健康仿刺参与感染后仿刺参的体壁内皮组织匀浆液的抑菌作用进行了比较;采用乙醇沉淀、离心等方法从仿刺参体壁内皮组织中粗提得到一种水溶性成分,测定了该成分对哈氏弧菌、白色葡萄球菌Staphylococcus albus和迟钝爱德华氏菌Edwardsiella tarda的抑菌活性,并初步研究了该成分的基本性质。结果表明：仿刺参体壁内皮组织匀浆液对哈氏弧菌的抑制效果显著,体腔液、体腔液上清液、体腔细胞悬液对哈氏弧菌的抑制效果不显著;感染状态下,仿刺参体壁内皮组织匀浆液的抑菌作用与健康状态相比有所降低。提取的水溶性成分对哈氏弧菌、白色葡萄球菌和迟钝爱德华氏菌均有明显的抑制作用;该成分的茚三酮反应呈阳性,其中蛋白质的质量分数为17.48%;该成分经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离得到5个蛋白条带,相对分子质量大约为55 300、46 100、34 700、19 500和14 500,初步认为其含有肽类抗菌活性物质。     

乌鳢体表粘液的抑菌作用

分析了乌鳢体表粘液对爱德华氏菌、溶藻弧菌、哈维氏弧菌3种海洋致病菌的抑菌效果及影响因素。结果表明,同浓度的提取物对不同致病菌的抑菌活性不同,对爱德华氏菌抑制活性最大,其次是溶藻弧菌,最差的是哈维氏弧菌。此外,温度、紫外线和pH对提取物抑制活性都有不同程度的影响。     

利用PCR技术快速检测水产品中副溶血性弧菌

[目的]对副溶血性弧菌的检测进行研究。[方法]采用聚合酶链式反应（PCR）,以标准菌株（单增李斯特菌、哈氏弧菌）作为阴性对照对3株副溶血性弧菌进行特异性扩增,扩增引物采用副溶血性弧菌如基因中的tlh-3和tlh-4,同时利用PCR对人工污染的白对虾中的副溶血性弧菌进行检出限测定。[结果]结果表明,通过PER扩增,副溶血性弧菌在约449bp处扩增出特异性条带,单增李斯特菌、哈氏弧菌均未出现任何条带,扩增片段表现出极好的特异性。菌液稀释到3．3×10^2cfu／ml时,将其污染到白对虾中作PCR仍可扩增出目的片断。[结论]该研究表明PER检测方法快捷、特异性好、敏感性高,可以作为副溶血性弧菌辅助检测方法。     

基于dnaJ基因的弧菌PCR检测方法

[目的]建立一种能扩增dnaJ基因全长的PCR检测方法,为弧菌的快速筛查及种类鉴定提供技术支持.[方法]以弧菌dnaJ基因为靶基因,在其首尾的保守区域设计一对简并引物,经优化退火温度和引物浓度,建立能扩增弧菌接近全长dnaJ基因的PCR检测方法,并通过特异性试验、灵敏度试验和临床应用评价等验证其适用性.[结果]优化后的PCR反应体系50.0 μL:2×F8 FastLong PCR MasterMix 25.0 μL,上、下游引物(20 μmol/L)各2.0 μL,DNA模板5.0 μL,灭菌水补足至50.0 μL.扩增程序:94℃预变性3 min;94℃ 10 s,55℃ 15 s,72℃ 15 s,进行35个循环;最后72℃延伸5 min.该PCR检测方法对副溶血弧菌、哈氏弧菌、创伤弧菌、河流弧菌、溶藻弧菌、拟态弧菌、霍乱弧菌和栖黑海弧菌等8种弧菌属细菌具有很强的特异性,对弧菌的最低检出限为102CFU/mL.应用建立的PCR检测方法对51株分离自海水样品的弧菌和32株分离自对虾样品的弧菌进行检测,结果显示全部为阳性,其中,海水样品中包括有副溶血弧菌、溶藻弧菌、创伤弧菌、河流弧菌、哈氏弧菌和栖黑海弧菌,对虾样品中包括副溶血弧菌、溶藻弧菌、创伤弧菌、河流弧菌和哈氏弧菌;经测序及同源性比对分析发现,种间菌株的dnaJ基因序列相似度为79.5%~92.8%,种内菌株间的dnaJ基因序列相似度为98.2%~99.9%.[结论]基于dnaJ基因建立的弧菌PCR检测方法能扩增出弧菌接近全长dnaJ基因,具有快速便捷、灵敏准确、适应性好等优点,结合测序技术,可为弧菌快速筛查及种类鉴定提供更全面和更准确的技术手段.     

点带石斑鱼溃烂病病原菌的分离与鉴定

溃烂病是我国北方海水工厂化养殖点带石斑鱼的主要病害之一。作者连续3a对天津地区的养殖点带石斑鱼溃烂病进行了流行病学调查,并从患病鱼病灶分离到7株致病菌,采用生理生化和分子生物学相结合的方法对7株致病菌进行了鉴定,结果表明,1株为杀鲑气单胞菌,5株为哈维氏弧菌,1株为河流弧菌。在连续3a的调查中,每年都分离到哈维氏弧菌,表明哈维氏弧菌是天津地区海水工厂化养殖点带石斑鱼溃烂病的主要条件致病菌,而杀鲑气单胞菌和河流弧菌是次要条件致病菌。研究结果将为控制石斑鱼溃烂病在海水工厂化养殖中的爆发和流行奠定基础。     

合欢花挥发油化学成分及提取液抑菌作用研究

采用水蒸气蒸馏法提取合欢(Albizzia julibrissin Durazz.)花挥发油,并用气相色谱-质谱(GC-MS)法进行分析,利用滤纸片法进行抑菌试验.结果表明,合欢花挥发油中共鉴定出16种成分,包括二十一烷(24.762％)、植酮(22.968％)、二十八烷(16.118％)、二十四烷(8.438％)和棕榈酸甲酯(6.689％).合欢花提取液对鳗弧菌、哈维氏弧菌、灿烂孤菌、高卢弧菌、巨大芽孢杆菌均有抑制作用,其作用随浓度升高而增强.     

应用草鱼吻端成纤维细胞分析海水致病性弧胞外产物的毒性

采用盐析法提取3株海水鱼类致病性弧菌的胞外产物(ECPs),并应用草鱼吻端成纤维(PSF)细胞分别对ECPs进行细胞毒性分析。结果表明,3种ECPs对PSF细胞都有毒性作用,可引起不同类型的细胞病变,且不同ECPs导致细胞可见病变的浓度不同:副溶血弧菌AnGS020501在0.125μg/mL时可致细胞病变,哈维氏弧菌EcGY020401的致细胞病变浓度为2.0μg/mL,哈维氏弧菌SpGY020601为4.0μg/mL。溶血性和动物毒性研究表明,3种ECPs细胞毒性与溶血性、动物毒性有一定的相关性。PSF细胞可应用于弧菌ECPs的体外毒性评价中。     

哈维氏弧菌硫氧还蛋白还原酶在大肠杆菌中的表达及对大菱鲆的免疫保护作用

从致病性哈维氏弧菌Vibrio harveyi SF1基因组中扩增获得含硫氧还蛋白还原酶（trxR）基因的1 133bp目的片段,连接至载体pMD19-T Simple。测序结果表明,目的片段含有960 bp trxR基因阅读框,编码为319个氨基酸残基的蛋白质。Blast分析结果显示,硫氧还蛋白还原酶蛋白氨基酸序列与哈维氏弧菌、溶藻胶弧菌、副溶血弧菌、灿烂弧菌、弗氏弧菌的硫氧还蛋白还原酶蛋白序列的相似性分别为99%、98%、96%、94%、92%。构建表达质粒pET-28a（＋）/TrxR后转化至大肠杆菌E.coli BL21（DE3）中,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析显示,重组蛋白的相对分子质量为34 000。用Ni琼脂糖亲和层析柱分离得到纯化的重组蛋白,将该蛋白以50μg/尾的剂量肌肉注射免疫大菱鲆Scophthalmus maximus,用ELISA法检测免疫1～4周内鱼血清中特异性抗体的效价。结果表明,特异性抗体效价持续升高,第2周则达到1∶128。免疫4周后用哈维氏弧菌SF1对大菱鲆进行人工感染,对照组鱼的死亡率为100%,免疫组鱼的死亡率为25%,相对免疫保护力为75%。试验表明,哈维氏弧菌TrxR蛋白具有较好的免疫原性,可作为潜在的亚单位疫苗用于哈维氏弧菌病的免疫预防。