Clin ProTool结合质谱分析弓形虫急性感染小鼠血清多肽

为分析血清差异表达多肽,并寻找具有潜在诊断意义的弓形虫感染标志物,建立弓形虫急性感染小鼠模型,采集急性感染组与健康对照组小鼠的血清,采用包被C8基团的磁珠纯化试剂盒富集血清多肽,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF Mass Spectrometry)检测,采用flexanalysis 2.0软件、Clin Pro Tools软件分析检测图谱并建立检测模型。在m/z 800~12 000区段,比较急性感染组、健康对照组的小鼠血清,共有8个峰存在显著性差异,其中m/z 1 788.99、1 971.85、5 004.32、7 500.89、5 817.47区段的5个多肽峰的表达均显著上调,而m/z 1 849.00、8 115.66、4 056.31区段的3个峰则显著下调,应用Clin Pro Tools建模方程建立感染小鼠的检测模型。MALDI-TOF质谱结合Clin Pro Tools分析可建立弓形虫感染检测的新方法,为弓形虫的诊断提供新思路。     

血清法监测人工感染弓形虫病猪特异抗体的比较

应用ELISA、LAT、IHA血清试验对8头人工感染弓形虫猪的血清抗体滴度变化规律进行了监测,并对不同检测方法的结果进行了比较.结果发现,试验猪在皮下感染弓形虫RH株速殖子后,血清中的特异性抗体首次检出的时间方面,LAT(第4 d)早于ELISA(第14 d)和IHA(第20 d);检出持续时间方面,LAT(54 d)长于ELISA(44 d)和IHA(19 d);平均检出率方面,LAT(7/8)高于ELISA(6.7/8)和IHA(5/8).试验结果表明,ELISA和LAT适合于猪弓形虫病的诊断和血清学调查,LAT更适合于猪弓形虫病的早期检测.     

江苏省部分地区动物弓形虫病血清学调查

以间接血凝(IHA)试验方法对江苏省部分地区(徐州、连云港、盐城、宿迁、南通、泰州、扬州、南京、常州、宜兴、昆山)动物弓形虫病进行血清学调查。试验血清样品稀释度在1∶64时,致敏血球达到50%以上凝集的血清样品判为阳性。结果在所调查的1 100份血清样品(猪、牛、羊、猫、狗等动物)中弓形虫抗体呈阳性者为145份,占总调查血清数的13.2%,其中939份猪血清样品中阳性样品数120份,占总调查猪血清样品的12.8%,总体反映出江苏省内动物弓形虫病感染的概况。     

辽宁地区猪弓形虫感染现况调查及感染因素分析

弓形虫是一种专性细胞内寄生原虫,宿主类型众多,寄生于人、畜、野生动物及禽类等几乎所有的有核细胞中,引发人兽共患寄生虫病,在世界范围内流行,对人类和畜牧业都具有潜在威胁。猫科动物是弓形虫唯一的终末宿主;弓形虫的中间宿主极其广泛,包括各种哺乳类动物、禽类和人等,其中感染最为严重的动物是猪。猪弓形虫病在不同地区均有流行发生,感染率也较高,平均感染率达22.3%。而猪肉是人类主要的肉食消费品之一,人在摄入未煮熟的含有弓形虫包囊的猪肉或内脏时可获得弓形虫感染,危害人类健康。故本试验对辽宁省不同地区的猪弓形虫病进行流行病学调查,并分析其感染因素。目前,检测弓形虫的金标准是改良凝集实验(MAT),其特点是操作简单、检测快速、结果准确,避免了酶联免疫吸附试验(ELISA)、胶体金试验、间接血凝试验等造成的假阳性和假阴性。从辽宁省不同地区采集猪的血清样品,采用MAT方法对血清样品进行猪弓形虫血清抗体检测并对其感染因素进行分析,结果显示:各个地区弓形虫感染率有所不同,抚顺感染率最高(27.9%),本溪感染率最低(6.28%);不同发育阶段的猪均有感染,繁殖母猪感染率(25.14%)育肥猪感染率(12.23%)仔猪感染率(6.04%),且繁殖母猪经产次数越多其感染率越高,经产5胎的繁殖母猪的感染率约是经产1胎繁殖母猪的13倍;大白猪较长白猪更易感弓形虫。另外,弓形虫可以通过母猪的胎盘传播方式(即垂直传播)传染给仔猪,使其获得先天性感染;仔猪也可以通过水平传播方式获得感染,即通过接触环境中的卵囊感染弓形虫。研究结果可为预防和控制猪弓形虫的感染提供一定的数据参考。     

玉溪地区鸽子弓形虫感染情况调查

为了解玉溪地区鸽子弓形虫的感染情况,为鸽子弓形虫病的防控提供参考。本文运用IHA和巢式PCR两种检测方法,对采自玉溪地区的207份鸽子血液样品进行抗体和抗原的检测。结果显示,IHA检测的血清阳性率为6.28%,巢式PCR检测的阳性率为7.69%;从年龄分析,成年鸽(3.23%)和幼年鸽(6.28%)的血清阳性率之间无显著差异(P=0.4700.05)。结果表明,该地鸽子存在弓形虫感染,但IHA检测结果仅能为弓形虫病血清学检测提供参考依据,并不能完全确定被检鸽子是否携带弓形虫病原体。将两种检测方法结合使用能更准确地掌握鸽子弓形虫的感染情况。     

河北省猪弓形虫感染情况调查

应用间接血凝试验(IHA)对河北省猪弓形虫病进行了检测,研究猪弓形虫病在河北省分布情况和感染率.结果表明,共检测猪血清1 300份,其中阳性血清464份,阳性率达35.69%.     

衣原体单克隆抗体在猪血清诊断中的应用

采用杂交瘤技术研制的抗衣原体单克隆抗体以及酶联免疫吸附试验（ELISA）方法，对本地区所采得的231份猪血清进行检测，阳性检出率为30．78％。其中：母猪的阳性检出率为50％，仔猪的阳性检出率为21．43％，育肥猪的阳性检出率为33．86％。选择50份被检血清，用已建立的检测衣原体抗体ELISA方法与传统的间接血凝试验（IHA）进行比较，其敏感性高。ELISA阳性检出率为30％，IHA为26％，前者比后者高出4个百分点。     

安徽部分地区猪弓形虫病的血清学调查研究

为了解安徽地区猪感染弓形虫病的情况,从安徽省部分地区养殖场(户)采取猪血清1 227份,采用间接血凝试验(IHA)检测弓形虫抗体。结果显示:平均阳性率为24.29%,表明安徽地区猪弓形虫病普遍存在。其发生与流行与养殖月份和养殖规模相关。     

猪传染性胸膜肺炎的ApxIV-ELISA检测方法

[目的]建立一种敏感性好、简便快捷,适用于临床诊断、实验室检测和血清学调查的诊断技术,为规模化养猪场监控胸膜肺炎放线杆菌(APP)感染及净化猪传染性胸膜肺炎(PCP)提供技术支撑.[方法]以ApxIV重组蛋白为抗原,建立ApxIV-ELISA检测方法,经可行性、特异性、准确性、重复性检验后,对采自广西南宁周边地区随机抽取的未免疫APP疫苗育肥猪与经产母猪进行血清抗体检测.[结果]经试验证实,以ApxIV-ELISA检测APP具有可行性,且具有特异性良好、准确性较高、重复性较好的特点,其判断标准:S(样品孔OD630nm)≥0.397为阳性,S<0.397为阴性.以ApxIV-ELISA检测的90份血清样品中有40份为阳性,阳性率为44.4%;其中经产母猪阳性血清33份,占总阳性血清的82.5%.[结论]广西南宁周边地区的养猪场已普遍存在APP感染,特别是经产母猪较严重.采用ApxIV-ELISA检测方法能及时鉴别诊断猪群的APP感染情况,且敏感性好、简便快捷,适用于临床诊断、实验室检测和血清学调查.     

北京地区屠宰猪的弓形虫感染血清抗体水平的调查研究

笔者以间接血凝试验检测了北京地区屠宰猪58O头份的血清弓形虫感染抗体滴度。按照1:64(++)以上为阳性的判定标准,1987年6月份(春末)检测178头份,阳性率为37.71%;9月份(夏末)检测210头份,阳性率为39.09%;12月份(秋末)检测86头份,阳性率为18.60%;1988年3月(冬末)检测156头份,阳性率为17.84%,总共检测580头份,平均阳性率为29.82%。此外,还检测了某学院在集体食堂用膳的师生226人的血清标本,结果均属阴性。调查研究结果表明,屠宰猪弓形虫的感染率以夏末最高,冬末最低。抗体滴度最高可达1:4096,一般阳性滴度均在1:64～1:258之间。人类不直接接触生猪肉或食熟肉者,不易构成感染。     

鄂西南地区猪传染性胸膜肺炎血清学调查

采用猪传染性胸膜肺炎间接血凝试验(IHA)对湖北省恩施州34家具有一定规模猪场的731份血清样品进行血清学调查,结果阳性率高达28.18%。其中被检仔猪血清206份,阳性42份,阳性率20.39%;被检育肥猪血清237份,阳性67份,阳性率28.27%;被检种猪血清288份,阳性97份,阳性率33.68%。     

漯河市部分猪场弓形虫病血清学调查与分析

为初步了解河南省漯河市猪弓形虫病感染情况,于2018年3—11月采集漯河市部分地区14个猪场共742份猪血清样品,应用ELISA检测试剂盒对血清样品中弓形虫抗体进行检测与分析。结果显示,742猪血清样品中有267份检测为弓形虫抗体阳性,平均阳性率为35.98%;不同养殖模式猪场弓形虫抗体检出率存在较大差异,其中散养场最高(57.39%),种猪场稍高(38.14%),规模化猪场最低(18.56%);在被调查的4个县市中,舞阳县猪弓形虫抗体检出率最高,为48.82%,召陵区次之,为48.44%,而临颍县和源汇区最低,分别为18.65%和39.62%。调查结果说明漯河市猪弓形虫感染普遍存在,相关有效的防控措施急需制订与实施。     

猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白部分片段的原核表达及其抗体间接ELISA检测方法的建立

为了建立猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白(MRP)抗体间接ELISA检测方法,该研究首先克隆了MRP编码基因的部分片段,构建了重组表达质粒pET28a-mrp,并将该质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,获得了58 000的重组蛋白,经Ni柱纯化后,免疫印迹显示MRP重组蛋白能够被猪链球菌2型抗体特异性识别。以纯化的MRP重组蛋白作为包被抗原,建立了猪链球菌2型MRP抗体检测间接ELISA方法。该ELISA方法的包被抗原浓度为10μg/ml,待检血清1∶50稀释,检测临床48份未免疫猪链球菌2型疫苗健康猪的血清。当效价(S/P)≥0.22时,判定待检血清样品为阳性;当S/P<0.22时,判定待检血清样品为阴性。运用建立的方法能特异性识别猪链球菌2型抗体,人工感染猪的MRP抗体于攻毒后14～28 d出现峰值,同时提示临床健康猪群的免疫功能存在个体差异。     

兴化市规模化猪场猪传染性胸膜肺炎血清学调查

利用间接血凝试验对来自江苏省兴化市未用过胸膜肺炎疫苗的部分规模化猪场的999份血清样品进行胸膜肺炎抗体检测,以抗体效价≥1∶8为阳性判定标准.结果发现,上述被检样品的总阳性率为35.34％( 353/999),经产母猪、15 ～20日龄哺乳仔猪、40 ～50日龄断奶仔猪、80～100日龄育肥猪和160～180日龄育肥猪的阳性率分别为69.74％ (136/195)、51.98％ (105/202)、7.39％ (15/203)、34.87％( 68/195)和14.22％ (29/204),阳性猪抗体效价的几何平均数分别为1∶54.65、1∶14.59、1∶12.13、1∶23.81和1∶16.00.     

超高效液相色谱-质谱串联优化方法检测小麦脱氧麦根酸

[目的]采用超高效液相色谱-质谱串联优化方法检测小麦脱氧麦根酸(DMA)。[方法]以山东省5个小麦品种为研究对象,利用超高效液相色谱-质谱联用(UPLC/ESI-MS)检测小麦苗期根系洗脱液的DMA。[结果]一级质谱分子离子峰m/z 305.2,二级质谱以正离子m/z 286.8和m/z 133.9进行定量,DMA标准品与小麦根系洗脱液的质谱图完全一致,因此,该方法可适用于大批量检测普通小麦根系洗脱液DMA。5个小麦品种在正常培养下,DMA分泌速率较低,但在缺铁胁迫下,DMA分泌速率呈极显著升高,增加6 242.86~62 833.42倍。[结论]小麦脱氧麦根酸UPLC/ESI-MS检测方法的建立,为深入研究其遗传机理提供了方法基础。     

应用间接血凝诊断牛东毕吸虫病

本试验通过二次醛化绵羊红细胞,初步建立了使用间接血凝(IHA)诊断牛东毕吸虫病的方法,并对62份阳性血清、25份阴性血清分别进行了检测。结果表明:阳性符合率可达96.8％,阴性符合率为96％。本方法具有较强的特异性和较高的敏感性。     

血液中毒鼠强的气相色谱-质谱检验分析

目的探讨血液中毒鼠强的气相色谱-质谱检验效果。方法本次研究选择提取毒鼠强的常见有机溶剂共8种,并选择毒鼠强死亡现场采集血液样本,进了气相质谱联用仪(GC/MS)分析,比较不同溶剂的提取效率。此外,选择8份来源于健康人群(无毒鼠强接触史)的血液样品进行空白试验,测定回收率;采用离子监测模式检测毒鼠强中毒死亡者血液样品。结果 8份空白血液添加5 ug毒鼠强,显示平均回收率为95.2%,乙酸乙酯的回收率为92.7%,两者差异不显著,p0.05,故将乙酸乙酯作为首选有机溶剂;本次研究选择毒鼠强标准品进行GC/MS分析,获得GC/MS图谱,并解析GC/MS峰的碎片m/z42(基峰)、m/z132、m/z240等;采用离子监测模式(SIM)检测毒鼠强中毒患者的血液样品,以高端碎片m/z212、m/z240作为参考依据得到GC/MS-SIM分析图谱。结论在司法检验中:乙酸乙酯可作为提取毒鼠强的首选有机溶剂;采用离子监测模式检测毒鼠强中毒死亡者血液样品的检测准确度较高,可作为首选分析方法。     

蛋白AG检测多种动物弓形虫抗体AG-ELISA的效果评价

利用建立的可检测多种动物弓形虫抗体的AG-ELISA方法,检测了人工感染及自然感染4种动物血清中的弓形虫抗体.对人工感染猪血清的检测结果表明,AG-ELISA法可于感染后第10天全部检出阳性,早于MAT方法的第14天,其检出率、敏感性及准确度等指标亦优于MAT法.在对临床上304份动物血清检测中,AG-ELISA法对猪、羊血清的阳性检出率高于MAT法,而对犬、猫血清的栓出率则与MAT法相同.Kappa一致性试验表明,AG-ELISA法与MAT法符合良好.上述结果证实AG-ELISA法可用于多种动物弓形虫抗体的检测.     

犊牛卵泡液多肽信息分析

[目的]了解成年牛和犊牛卵泡液中多肽的信息表达差异,为完善犊牛卵泡液基础研究及犊牛卵母细胞体外培养体系奠定基础.[方法]采用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱技术（MALDI-TOF-MS）对超排成年牛和超排犊牛卵泡液中的肽段进行分析,根据多肽的信号峰信息,通过MASCOT数据库进行蛋白检索.[结果]从成功构建的成年牛与犊牛卵泡液质谱多肽信号峰模型图谱可知,超排犊牛卵泡液多肽表达图谱中有60～80个信号峰,而超排成年牛的有30～40个信号峰;其中成年牛卵泡液有两个特有信号峰,质荷比为1218.58和1509.77 m/z,犊牛有1个特有信号峰,质荷比为953.54 m/z.利用MASCOT数据库对获得的卵泡液多肽信息进行蛋白检索,发现成年牛卵泡液中有18种蛋白,犊牛卵泡液中有11种蛋白.[结论]犊牛卵泡液中蛋白多肽信息峰数量多于成年牛,但卵泡液中总蛋白数量少于成年牛,这种差异可能是导致犊牛卵母细胞发育能力低于成年牛的重要原因之一.     

应用间接血凝试验检测牛肺疫抗体

自制1.5％绵羊红细胞诊断液并用于检测牛肺疫抗体,结果如下:(一)三批标准阳性血清(批号为8601、8301、8001)凝集价均在160倍以上,标准阴性血清(批号为8601)凝集度仅为10倍。15份被检血清IHA的阳性检出率(8/15)高于补体结合反应(CF,6/15)且凝集价均在40倍以上。(二)用牛肝片吸虫病、布氏杆菌病和附红细胞体病阳性血清作类症鉴别诊断,凝集度仅为10倍。(三)把牛肺疫CF8502抗原作倍比稀释,加2个凝集单位牛肺疫阳性血清8601和8301进行间接血凝抑制试验,分别被32倍和16倍稀释的抗原所抑制,本项试验结果表明IHA用于检测牛肺疫,具有检出率高、特异性强、设备要求简单、容易操作等特点,适于在现地推广应用。