胆固醇7α-羟化酶基因研究进展

胆固醇7-羟化酶（cholesterol 7-hydroxylase,CYP7A1）是胆汁酸经典合成途径中的限速酶,对维持机体胆固醇代谢平衡起关键作用。目前已知CYP7A1基因的表达受包括该基因自身的多态性在内的多种因子调控。CYP7A1代谢途径作为脂类代谢通路的重要一部分,其活性发生改变后可能会引起与脂类代谢紊乱有关的胆结石、胆囊癌和心血管疾病等。就有关CYP7A1基因的最新研究进展进行了较系统的综述。图1参53     

17-甲氧基-7-羟基-苯并呋喃查尔酮的分离及晶体结构

[目的]研究17-甲氧基-7-羟基-苯并呋喃查尔酮的分离方法及晶体结构。[方法]利用液液萃取、硅胶柱色谱、重结晶等方法进行目标物的分离,并通过IR、NMR、ESI-MS、X-射线单晶衍射等手段鉴定晶体结构。[结果]晶体结构分析结果表明,该化合物为单斜晶系,空间群P2（1）/c,晶胞主要参数：a=10.881 3（16）nm,b=9.795 4（14）nm,c=13.347 3（19）nm,V=1 382.2（3）nm3,Z=4,Dc=1.414mg/m3,F（000）=616,μ=0.100/mm。[结论]从玉郎伞[Millettia Pulchra Kurz var.Laxior（Dunn）Z.Wei]的60%（体积分数）乙醇水提取物中首次分离并鉴定了17-甲氧基-7-羟基-苯并呋喃查尔酮。     

胆固醇氧化酶快速鉴定方法研究

[目的]建立胆固醇氧化酶的快速鉴定方法。[方法]采用初筛和复筛试验,从21种不同来源的样品中筛选出9株高酶活胆固醇氧化酶菌株,采用定性平板检测法、过氧化氢法、羟醛反应法、薄层层析法等定性检测胆固醇氧化酶的活性。[结果]从21种样品中共筛选出48株胆固醇氧化酶菌株,用定性平板检测法从中筛选出9株高酶活菌株（2-6、15-3、3-3、16-5、3-4、4-3、4-6、JM109和10192）,其中4．6酶活最高;过氧化氢法共鉴定出6株高酶活菌株,与定性平板法检测结果一致;薄层层析法可定性检测出胆固醇氧化的唯一产物胆甾4-烯-3-酮。[结论]定性平板检测法和薄层层析法可快速、有效的鉴定出高酶活胆固醇氧化酶菌株。     

巴西橡胶树热研7-33-97·PR107·RRIM600生理特性比较

[目的]为热研7-33-97推广提供科学依据。[方法]以3个橡胶树无性系热研7-33-97,PR107,RRIM600为试材,研究了不同品系的干胶含量,排胶初速度,堵塞指数,蔗糖,硫醇,无机磷,镁离子含量,黄色体破裂指数等生理指标。[结果]RRIM600、热研7-33-97和PR107的干胶总产量分别为538.725、26.89和409.37 g。3个品种干含依次为PR107>RRIM600>热研7-33-97。热研7-33-97蔗糖含量介于RRIM600和PR107之间。RRIM600硫醇含量较低,热研7-33-97与PR107硫醇含量较高。热研7-33-97与RRIM600无机磷含量较高。热研7-33-97镁离子含量最高。破裂指数以热研7-33-97最高,RRIM600最低。品系PR107的堵塞指数在各个阶段均明显高于热研7-33-97与RRIM600。[结论]热研7-33-97是一个较耐刺激且高产的品系。     

橡胶树热研7-20-59、PR107、RRIM600品种生理特性比较

[目的]研究橡胶树高产品种热研7-20-59的生理特性,为该品种生产应用时设计适宜的割胶制度提供理论依据,保证其高产稳产。[方法]以热研7-20-59、PR107、RRIM600等3个橡胶品种为试验材料,采用胶乳生理诊断方法,比较不同品种的干胶产量及各项生理指标。[结果]3个品种的年株干胶产量、胶乳干胶含量、总固形物含量、蔗糖含量、硫醇含量从大到小顺序均为PR107、热研7-20-59、RRIM600,无机磷含量、镁离子含量从大到小顺序为热研7-20-59、PR107、RRIM600。[结论]热研7-20-59胶乳再生能力强,蔗糖利用率高,乳管代谢活性强,是一个综合性状优良的高产品种,可适当采用乙烯利刺激。     

溶栓候选药物双吲哚海洋生物碱FGFC1的转化特性

研究新型海洋纤溶化合物FGFC1体外药物代谢动力学特征及其转化产物。从Wistar大鼠获得肝微粒体,lowry法检测肝微粒体蛋白浓度,HPLC方法检测FGFC1及其转化产物的增减,LC-MS/MS方法分析和鉴定FGFC1的转化产物,4-苯基-1,2,3-噻二唑、去乙酰环丙氯地孕酮、苯妥英钠和酮康唑为CYP450酶系亚型的选择性抑制剂。结果显示,FGFC1的体外代谢半衰期T_(1/2)=(96.25±2.3) min,固有清除率CL_(int)=(0.072 0±0.001 4)mL/(min·mg)。FGFC1的唯一转化产物是((2S,3S)-2-((E)-7,8-dihydroxy-4-methylnon-3-en-1-yl)-3,5,8-trihydroxy-2-methyl-3,4,8,9-tetrahydropyrano[2,3-e]isoindol-7 (2H)-one)(PIO),其分子质谱和片段峰(m/z)分别为463.20[M+C_2H_3N+H]~+和m/z 110.90[C_7H_8O+H~+H]~+、215.70[C_(13)H_(26)O_2+H]~+、337.00[C_(18)H_(27)NO_5]~+、337.00[C_(25)H_(31)NO_2]~+。苯妥英钠显著抑制肝微粒体酶系CYP3A4亚型,FGFC1的转化产物PIO被减少49.11%。研究表明,肝微粒体CYP3A4亚型酶系通过N-脱烷基反应、N-氧化反应和水解反应转化FGFC1为PIO。     

表达KsdD重组大肠杆菌的构建及转化工艺优化

3-甾酮-△1-脱氢酶(KsdD)是催化甾体化合物C1,2位脱氢反应的关键酶,在甾体药物的生产中起着重要作用。本研究首先通过对红球菌、分枝杆菌及简单节杆菌来源的KsdD蛋白进行氨基酸序列分析,并进一步通过酶活比较及底物催化能力的验证,最终筛选获得具有较高C1,2位脱氢活力的脱氢酶KsdDR2。研究了过表达KsdDR2蛋白重组大肠杆菌的转化条件对底物雄甾-4-烯-3,17-二酮(AD)转化的影响,结果表明,在30℃转化条件下,当AD:羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)的摩尔比为1:1.5时,可使底物AD的转化率达99%以上。本研究为利用工程菌株高效生产C1,2位脱氢甾体化合物的研究奠定了理论基础。     

7-氯-2,5-二氢茚并[1,2-e][1,3,4]噁二嗪-4a-(3H) -羧酸甲酯的合成研究

[目的]探讨合成7-氯-2,5-二氢茚并[1,2-e][1,3,4]噁二嗪-4a-(3H)-羧酸甲酯的新方法。[方法]以5-氯-1-氧-2,3-二氢茚-2-羧酸甲酯为起始原料,先后经过不对称氧化、肟化、环合、取代反应得到目标化合物。[结果]目标产物及中间体的结构已通过质谱、1H NMR进行表征。[结论]该合成方法具有原材料易得、收率高、成本低等优点。     

4-乙氧基-7-羟基香豆素及其衍生物的合成

以间二酚和氰基乙酸为主要原料,经Pechmann反应、水解、乙醚化、Williamson反应合成了9种7-烷氧基-4-乙氧基香豆素类新化合物.Williamson反应的优化条件为:N,N-二甲基甲酰胺(DMF) 为溶剂,n(4-乙氧基-7-羟基香豆素) :n(卤代烃) :n(碳酸钾) :n(TBAB,四正丁基溴化铵) =1:1.5:2.5:0.1,60～80℃反应11～25 h,产率为72%～95%.中间产物及目标产物结构经红外光谱(IR) 、质谱(MS) 、核磁共振氢谱(1H NMR) 表征得以证实.     

7-羟基黄酮和7,8-二羟基黄酮的改良合成与结构修饰

利用改良的Baker-Venkatarama重排法，以乙酰芳基酚为原料，经过二步反应合成了7-羟基黄酮(3a)和7，8-二羟基黄酮(3b)．通过对7-羟基黄酮和7，8-二羟基黄酮A环酚羟基的结构修饰，分别合成了三个7位取代和二个含苯并二氧杂环的新黄酮衍生物(4-6，7a，7b)．所合成化合物的结构已由MS，^1HNMR，IR等波谱方法所证实、     

T1083替换融合质粒载体pGBKT7-TS转入酵母的自激活试验（摘要）（英文）

[目的]研究T1083替换融合质粒载体pGBKT7-Ts转入酵母的自激活实验,探讨其表达产物是否可作为诱饵进行酵母双杂交筛选。[方法]将T1083替换突变BD融合质粒载体pGBKT7-TS转入酵母后,进行自激活和蛋白表达毒性检测试验。pGBKT7-TS对报告基因自主激活的检测。将pGBKT7-TS质粒转染S.cerevisiae strainAH109和S.cerevisiaeY187菌株,同时分别转入pGBKT7作为对照,在SD-Trp平板上挑取转化菌落,悬于适量无菌水中,再分别接种于SD-Trp ＋X-α-gal、SD-Trp-His ＋X-α-gal、SD-Trp-Ade ＋X-α-gal和SD-Trp-Ade-His ＋X-α-gal平板。30℃培养2 ～3 d,观察各平板菌落颜色。确定含有pGBKT7-TS质粒的AH109和Y187酵母细胞内HIS、ADE、Mel1、LacZ报告基因的表达情况。pGBKT7-TS对酵母AH109和Y187的毒性检测、挑取大于2 mm的pGBKT7-TS转化的AH109克隆和pGBKT7-TS转化的Y187克隆各1个,分别接种于50 ml SD/-Trp＋Kan（20μg/ml）培养基中,30℃、250 r/min培养16 h,检测OD600,若OD600〈0.8,则DNA-BD可能有毒性;若OD600≥0.8,说明DNA-BD无毒性。[结果]转化pGBKT7-TS的酵母菌AH109在SD-Trp ＋X-α-gal平板和SD-Trp-His ＋X-α-gal平板上均可长出菌落,但在SD-Trp-Ade ＋X-α-gal平板和SD-Trp-Ade-His＋X-α-gal平板上均无菌落生长,表明转入pGBKT7-TS后His报告基因有泄漏表达,但不能激活ADE和MELI报告基因。毒性检测试验中,重复2次,其OD600均大于0.8,说明DNA-BD融合蛋白对酵母AH109和Y187的生长无毒性,可以作为诱饵进行酵母双杂交筛选。[结论]为进一步研究NtKRP尾部T1083替换对NtKRP与靶物质结合的影响奠定了试验基础。     

重氮化法合成全抗原的研究

[目的]制备氯霉素全抗原,探索氯霉素合成的方法,为动物免疫试验作准备。[方法]采用重氮化法合成氯霉素卵清蛋白全抗原,通过紫外法和红外光谱法测定合成的偶联效果。[结果]重氮化法可用于制备较高偶联率的氯霉素全抗原,用于免疫动物制备抗体。[结论]该研究为合成高效价的抗体奠定了基础。     

BtR05对朱砂叶螨的致病性及其制剂的毒力测定

[目的]为研究开发苏云金芽孢杆菌杀螨剂提供借鉴。[方法]使用BtR05菌株对朱砂叶螨进行致病性研究,确定其杀螨活性后,制备了BtR05悬浮剂,并使用该悬浮剂对朱砂叶螨的幼螨、若螨和成螨进行了室内毒力测定。[结果]稀释500倍以下的浓度对朱砂叶螨的毒杀效果较好,在药后96h幼螨的校正死亡率均达到80％以上,若螨的校正死亡率均达到75％以上,成螨的校正死亡率均达到60％以上,表明BtR05悬浮剂对朱砂叶螨的幼螨、若螨和成螨均具有毒杀作用。BtR05悬浮剂与对照药剂金维达相比,悬浮荆稀释300倍以上对幼螨和若螨的毒杀作用在药后96h差异显著,说明BtR05悬浮剂的持效性高于对照药剂。[结论]苏云金芽孢杆菌BtR05悬浮剂对朱砂叶螨的幼螨、若螨和成螨均具有毒杀作用,并且其持效性明显高于对照药剂金维达。     

霉变玉米分离真菌YMF-7产物中毒素成分的识别

[目的]研究霉变玉米分离的真菌YMF-7代谢产物中的毒性成分。[方法]利用海虾毒性指标,采用Sephadex LH-20、硅胶和HPLC等柱色谱技术对YMF-7毒性菌株发酵物进行毒性追踪分离。[结果]共分离得到2个化合物,结构鉴定为化合物1为Gliotoxin(6),化合物2为Gliocladin(7)。经海虾毒性测定,结果表明,化合物1对海虾的LC50值为0.34μg/ml,化合物2对海虾的LC50值为2.10μg/ml。[结论]该2种化合物为YMF-7发酵物中的主要毒性成分。     

小麦新品种平安7号丰产性、稳定性及适应性分析

[目的]分析小麦新品种平安7号丰产性、稳定性及适应性。[方法]根据2006—2007年度、2007—2008年度河南省小麦区试试验汇总资料和2008—2009年度河南省小麦生产试验汇总资料,利用变异系数、高稳系数、回归系数、适应度、品种稳定性与适应性(Cosolin)对平安7号的丰产性、稳产性及适应性进行了对比分析。[结果]平安7号表现出丰产性突出、稳产性好和适应性广的特点,具有广阔的推广空间。[结论]该研究为平安7号在生产上应用提供理论依据。     

鸡大肠杆菌重组1型菌毛疫苗的免疫原性

[目的]制备鸡大肠杆菌重组1型菌毛疫苗,并探索其免疫原性。[方法]从含1型菌毛的基因重组菌株CZYRl0与野生型鸡大肠杆菌分离株YR（018）中提取1型菌毛,制备菌毛油乳剂疫苗。通过对鸡群的攻毒试验,探讨该疫苗的免疫原性。[结果]重组1型菌毛蛋白具有免疫保护作用。重组1型菌毛疫苗的保护力比分离的鸡大肠杆菌1型菌毛疫苗保护率低,但差异不显著（P〉0．05）。[结论]该研究可为鸡大肠杆菌病的免疫防治提供依据。     

恩诺沙星人工抗原及多克隆抗体的制备

[目的]制备恩诺沙星人工抗原及多克隆抗体。[方法]采用活性酯法合成恩诺沙星的人工抗原,并通过紫外光谱扫描和SDS-PAGE电泳对其进行鉴定。利用免疫原(ENR-BSA)免疫新西兰大白兔,制备抗恩诺沙星的高亲和力和高特异性的多克隆抗体。[结果]恩诺沙星成功地偶联到载体蛋白上。通过动物免疫,获得了高效价的抗血清,最高效价达到1∶100 000,说明人工抗原成功地诱导机体产生免疫应答。[结论]恩诺沙星的人工抗原合成路线简单易行,可为进一步建立恩诺沙星的免疫检测方法奠定了基础。     

5种中草药中7种微量元素因子分析

[目的]探讨微量元素与中草药药效的关系。[方法]在已知党参、肉桂、细辛、龙胆草、山茱萸中7种微量元素含量的基础上,采用多元统计方法对其进行因子分析研究。[结果]前3个主因子反映了原变量所包含的92.88%以上的信息。与第1主因子相关程度较大的变量是Cu、Zn,载荷系数大于0.96。与第2主因子相关程度较大的变量是Ca、Mn,载荷系数大于0.93。与第3主因子相关程度较大的变量是K,载荷系数大于0.93。5种中草药主因子的得分分析结果与试验结果和临床功效一致。[结论]该研究为中草药的研究和开发提供了理论指导。     

枸杞蛋黄乳的研制

[目的]研制一种枸杞蛋黄乳饮料。[方法]以蛋黄、枸杞和脱脂奶粉为主要原料,通过乳酸菌发酵对枸杞蛋黄乳饮料进行了制备,并利用正交试验对其制备工艺与配方进行了优化。[结果]枸杞蛋黄乳的最佳工艺参数为：发酵温度42℃,蛋黄液与枸杞汁（1∶1,V∶V）的混合液15 m l,脱脂奶粉6.00%,白砂糖7.00%,卡拉胶0.03%。在该发酵工艺条件下,产品质量较好。[结论]为人类的健康饮食提供了参考。     

正交设计法优选降香挥发油的提取条件

[目的]优化降香挥发油的提取条件。[方法]采用水蒸气蒸馏法,以挥发油得率为指标,采用正交试验法考察溶剂用量、提取时间、药材粒度对挥发油收率的影响。[结果]优化的降香挥发油提取工艺为：用药材细粉加8倍量的水,提取7 h。[结论]该试验得出的提取条件下,降香挥发油提取率高、稳定性好,适合工业生产。