草鱼肠道内分泌细胞中肽激素的免疫组织化学定位

通过过氧化物酶抗过氧化物酶(PAP)免疫组织化学染色方法,用10种哺乳动物激素培育出的抗血清对三尾草鱼肠道中免疫活性内分泌细胞进行了鉴别。与其中6种抗血清起反应的分别是:胃泌素、胰高血糖素样免疫反应物、抑胃肽、亮氨酸脑啡肽,P物质和牛胰多肽免疫活性内分泌细胞。其它4种抗血清在三尾草鱼肠道中没有发现免疫活性反应。草鱼肠道中各种免疫活性内分泌细胞的形态,大多数为开放型,少数为封闭型或兼有两种类型的特点。对6种免疫活性内分泌细胞的分布特点及其在肠道各段的密度进行了比较和讨论。     

G细胞和EC细胞在重口裂腹鱼消化道中的分布和形态

应用链霉亲和素-生物素过氧化物酶(Streptavidinbiotincomplex,SABC)免疫组织化学技术,用胃泌素、5-羟色胺抗哺乳动物血清对重口裂腹鱼消化道内分泌细胞进行了研究。结果表明:胃泌素阳性反应细胞仅分布于前肠和中肠,以前肠前段分布最密集(32.51个细胞/mm2);5-羟色胺阳性反应细胞前、中、后肠均有分布,其密度前肠前段最高(24.25个细胞/mm2),后肠后段次之(23.56个细胞/mm2),中肠最低(15.51个细胞/mm2)。本文详细描述了各种内分泌细胞的形态特征并对其生理功能进行了初步讨论。     

泥鳅消化道6种内分泌细胞的免疫组织化学定位

[目的]对泥鳅胃肠道内分泌细胞进行免疫组织化学定位研究。[方法]应用6种胃肠激素抗血清对泥鳅（Misgurnus anguillicaudatus Cantor）消化道内分泌细胞进行了免疫组织化学定位。[结果]5-HT-IR细胞分布在泥鳅消化道的食管、前肠和中肠。以前肠前段密度最高,食管和前肠后段其次,中肠最少,分布差异显著;SS—IR和PP—IR细胞相同,主要分布于食管和前肠,食管段最多,前肠后段较少,前肠前段最少,中肠和后肠中未见分布;Gas—IR、Glu—IR和SP—IR3种免疫活性细胞在消化道各段均未分布。[结论]泥鳅消化道内这6种内分泌细胞分布和其他鱼类比较,既显示了鱼类消化道内分泌细胞分布的共性,又显示了一定的种间差异。     

黑鲷消化道内分泌细胞免疫组织化学的定位

应用免疫组织化学方法研究了黑鲷消化道几种内分泌细胞的分布.结果表明:5-羟色胺(5-HT)免疫阳性细胞分布于食管、胃贲门部、胃体部和胃幽门部,分布特点是,从食管至胃幽门部逐渐增多,胃幽门部分布最为密集,而肠道各段均未发现;生长抑素(Som)免疫阳性细胞在胃贲门部和胃体部分布数量较多,胃幽门部较少,食管最少,而肠道各段均未检出;胃泌素(Gas)免疫阳性细胞分布于胃幽门部和前肠、中肠,后肠偶见,食管、胃贲门部和胃体部未检出;胰高血糖素(G lu)免疫阳性细胞仅少量分布于前肠和中肠,食管、胃的各部和后肠均未检出;胰多肽(PP)免疫阳性细胞在消化道各段均未发现.根据形态学特征,黑鲷消化道内分泌细胞与其他鱼类一样,分为2种类型,即开放型和闭合型.     

Glu细胞与5-HT细胞在两种裂腹鱼肠道的免疫组织化学研究

目的:研究齐口裂腹鱼和重口裂腹鱼肠道Glu和5-HT细胞的形态、位置与分布情况。方法:使用Glu和5-HT抗哺乳动物血清,应用免疫组织化学技术SABC法对齐口裂腹鱼和重口裂腹鱼肠道内分泌细胞进行了研究。结果:Glu细胞在齐口裂腹鱼肠道中以中肠分布最密集,前肠和后肠分布密度较低;重口裂腹鱼肠道中,前肠和中肠分布密度较高,后肠极低。5-HT细胞在齐口裂腹鱼肠道中的分布密度前肠最高,中肠次之,后肠最低;重口裂腹鱼则在前肠和后肠分布密度较高,中肠较低。Glu和5-HT细胞主要呈梭形和锥形。结论:Glu和5-HT细胞的分布和形态特点与两种裂腹鱼食性和肠道结构密切相关。     

大黄鱼消化道内分泌细胞免疫组织化学的定位

应用过氧化物酶标记的链霉亲和索免疫组织化学技术（简称S-P法），用抗5-羟色胺（5-HT）、生长抑索（SST）、胃泌索（Gas）、胰高血糖素（Glu）等4种抗哺乳动物血清对大黄鱼（Pseudosciaena crocea）消化道内分泌细胞进行免疫组织化学定位研究，结果表明：5-HT免疫阳性细胞在消化道各段均有分布，胃各部分布较多，食管和肠管分布较少；SST在胃贲门部和胃体部数量较多，胃幽门部较少，食管、前肠和中肠仅有少量分布，后肠的分布数量多。Gas分布于胃幽门部和前肠、中肠、后肠，从胃幽门部到后肠呈递减分布趋势；食管、胃贲门部和胃体部均未检出。Glu免疫阳性细胞在消化道各段均未发现。根据形态学特征，大黄鱼消化道内分泌细胞与其他鱼类一样，分为两种类型，即开放型和闭合型细胞。     

褐牙鲆消化道内分泌细胞免疫组织化学的定位

应用过氧化物酶标记的链霉亲和素免疫组织化学技术,用抗5-羟色胺(5-HT)、生长抑素(SST)、胃泌素(Gas)、胰高血糖素(G lu)等4种抗哺乳动物血清对褐牙鲆消化道内分泌细胞进行免疫组织化学定位的研究.结果表明:5-HT免疫阳性细胞在消化道各段均有分布,胃各部分布较多,食管和肠管分布较少;SST在胃贲门部和胃体部数量较多,胃幽门部较少,食管和肠管各段均未检出;Gas分布于胃幽门部和前肠、中肠、后肠,从胃幽门部到后肠呈递减分布趋势,食管、胃贲门部和胃体部均未检出;G lu免疫阳性细胞分布于前肠和中肠,其余各段均未检出.     

应用免疫冷冻超薄切片技术观察罗非鱼肠道M样细胞

为鉴定罗非鱼肠道M样细胞及各肠道分布情况,利用FITC标记的荆豆凝集素(UEA-1)对罗非鱼前、中、后肠冰冻切片进行直接免疫荧光显微观察。结果发现,在罗非鱼前、中、后肠均观察到M样细胞;中肠和后肠M样细胞数量比前肠明显多。免疫组M样细胞数量显著比空白对照组多,且免疫组前肠数量明显多于空白对照组前肠。研究表明,在罗非鱼前、中、后肠存在M样细胞,肠道接触无乳链球菌弱毒抗原之后,在数量、分布上均发生变化,初步表明M样细胞参与肠道免疫应答。     

感染小鼠肠道内猪痢疾密螺旋体的定位研究

用过氧化物酶-抗过氧化物酶法(PAP)对感染猪痢疾密螺旋体的小鼠肠道组织切片进行染色观察。发现特异的酶染颗粒主要分布于盲肠,其次是结肠前段和后段。在感染的早期,主要分布于肠腺的深部,以后有逐渐向肠腔面转移的趋势。在小肠和肠细胞内未见有特异性的酶染颗粒。通过与常规的镀银法比较,作者认为PAP法更为灵敏、特异,不失为一种有效的猪痢疾病的研究方法。     

β-Conglycinin在不同食性鱼类肠道组织中的分布规律

【目的】研究β-伴大豆球蛋白(β-Conglycinin)在不同食性鱼类肠道组织中的分布规律。【方法】以健康的鲤鱼、埃及胡子鲇和草鱼为研究对象,以鱼粉为对照组,以添加40mg/g提纯的β-Conglycinin组为试验组,各配制成2种等蛋白(粗蛋白质量分数分别为鲤鱼360.2g/kg,埃及胡子鲇400.5g/kg,草鱼300.6g/kg)、等能(鲤鱼15.2MJ/kg,埃及胡子鲇15.8MJ/kg,草鱼15.6MJ/kg)的半精制饲料,在室内控温单循环养殖系统中进行为期6周的饲养试验,饲养试验结束后,采用免疫组织化学方法探讨β-Conglycinin在不同食性鱼类肠道中分布规律的差异。【结果】β-Conglycinin在鲤鱼和草鱼前、中、后肠的积累光密度呈上升趋势,鲤鱼后肠与前肠差异极显著(P<0.01),草鱼中、后肠的积累光密度与前肠差异极显著(P<0.01);埃及胡子鲇前肠、中肠、后肠的积累光密度差异不显著(P>0.05)。【结论】在本试验条件下,β-Conglycinin主要分布在鲤鱼后肠,草鱼的中、后肠,埃及胡子鲇的前肠、中肠和后肠。     

金属离子对红白锦鲤肠及肝胰脏蛋白酶活性的影响（摘要）（英文）

[目的]研究金属离子对红白锦鲤消化组织蛋白酶活性的影响。[方法]以酶学分析方法研究4种金属离子（Na＋、K＋、Ca2 ＋、Mg2 ＋分别来源于NaCl、KCl、CaCl2.2H2O、MgCl2.6H2O,浓度梯度均设置为25、50、75、100、125、150 mmol/L）对红白锦鲤肝胰脏、前肠、中肠、后肠蛋白酶活性的影响。蛋白酶活性的测定采用福林-酚显色法,用Thermo紫外分光光度计,根据OD680计算蛋白酶活性,以1 min水解酪蛋白产生1μg酪氨酸为一个酶活力单位,记为μg/（min.g）。[结果]在设定的浓度范围内（25 ～150 mmol/L）,4种金属离子对蛋白酶活性影响不同。K＋对肝胰脏和后肠的蛋白酶活性有不同程度的促进作用,其中K＋对中肠表现为低浓度促进,高浓度抑制的作用,对前肠蛋白酶表现为抑制作用;Na＋对肝胰脏、前肠和后肠的蛋白酶表现为不同程度促进作用,对中肠表现为抑制作用。Mg2 ＋、Ca2 ＋对肠及肝胰脏的蛋白酶均表现为不同程度的抑制作用。试验所选用的K＋、Na＋、Mg2 ＋、Ca2 ＋均属矿物元素,其中添加浓度25 mmol/LK＋对锦鲤肠蛋白酶活性促进作用最大;浓度150 mmol/L Na＋显著提高后肠和肝胰脏蛋白酶活性。这些浓度可作为饲料添加剂中的参考用量。Mg2 ＋、Ca2 ＋对锦鲤各消化器官（中肠除外）的抑制作用随浓度的增加蛋白酶活性降低,但考虑该元素系水产动物生长发育所必需,因此可选用低浓度或螯合物进行添加,以提高酶的生物学效价,提高饲料中蛋白的利用率,降低饵料系数,节约蛋白。[结论]该研究可为红白锦鲤消化生理的研究以及配合饲料的开发、优化提供基础数据和理论依据。     

锦鲤肠道不同部位菌群组成结构及多样性分析

【目的】研究锦鲤（Cyprinus carpio var.koi）肠道的菌群组成结构及多样性,为深入研究锦鲤肠道菌群的功能及肠道不同部位的生理功能的分化提供参考。【方法】收集锦鲤前肠、中肠和后肠的肠道细菌,通过传统培养技术,采用细菌微量生化鉴定管对肠道细菌进行各项生理生化指标的测定;分别提取3个肠段的肠道菌群基因组DNA,进一步采用16S rDNA高通量测序技术,分析3个肠段的菌群组成和生物多样性。【结果】前肠、中肠和后肠样本测序后分别得到48659、47013和47819条有效序列,按97%相似性水平划分OTU后,分别得到1555、1294和1423个OUTs。α多样性分析结果显示,后肠菌群样本的Shannon指数、Chao1指数最高。在门水平上,前肠、中肠和后肠丰度最高的5个菌门均是变形菌门（Proteobacteria）、梭杆菌门（Fusobacteria）、拟杆菌门（Bacteroidetes）、厚壁菌门（Firmicutes）和黏胶球形菌门（Lentisphaerae）,推测这些菌门是锦鲤肠道的核心细菌类群,但各菌门在不同部位的相对丰度有差异。构建的物种丰度热图显示相对丰度最高的前10类菌属相同,但某些菌属在肠道不同部位的相对丰度有较大差异,如代尔夫特菌属（Delft）、弓形菌属（Toxoplasma）。UniFrac分析显示中肠和后肠的肠道菌群聚为一支,表明这2个部位菌群组成结构相似度较高。【结论】锦鲤肠道不同部位具有独特的菌群结构,可能会影响肠道不同部位功能的分化。     

4种金属离子对红白锦鲤消化组织淀粉酶活性的影响

以酶学分析方法研究4种金属离子(K+、Na+、Mg2+、Ca2+)对红白锦鲤肝胰脏、前肠、中肠、后肠淀粉酶活性的影响。结果表明,在设定的浓度范围内(25～150mmoL/L),4种金属离子对淀粉酶活性影响不同。K+、Na+对肝胰脏、前肠、中肠和后肠的淀粉酶活性有不同程度的促进作用,而Mg2+对肝胰脏、前肠、后肠的淀粉酶活性有不同程度的促进作用;Mg2+对中肠的淀粉酶活性有不同程度的抑制作用,Ca2+除对肝胰脏淀粉酶没有明显抑制以外,对肠均有不同程度的抑制。     

鲤鱼、黄鱼和大眼鰤鲈消化酶活性的比较研究

对鲤鱼 (Cyprinuscarpio)、黄 鱼桑鱼 (Pseudobaqrusfulvidraco)、大眼 鱼师鲈 (Stizostedionvitreum)各消化器官消化酶进行了测定分析。结果表明 :鲤鱼肝胰脏蛋白酶活性最强 ,黄鱼桑鱼和大眼鱼师鲈胃中蛋白酶活性最强 ,3种鱼蛋白酶活性顺序为 :大眼鱼师鲈 >黄鱼桑鱼 >鲤鱼 ,表明食性不同 ,摄食能力不同 ,蛋白酶活性也不同 ;3种鱼淀粉酶的活性顺序为 :鲤鱼 >黄鱼桑鱼 >大眼鱼师鲈 ,其酶活性与鱼类的食性有关 ;消化酶在肠道分布 ,无固定规律 ,而是因鱼而异     

小兴安岭蕨类植物生态特性的研究

采用样线与样方相结合的调查方法，根据点相关系数及Ｘ＾２值连续性较正公式，测定了小兴安岭凉水自然保护区具有环境梯度的７个森林类型内主要蕨类植物的种间联结。结果表明：各林型均有其适生的蕨类类群，与该类群呈正联结的蕨类种其数量分布也多，反之刚少；具有环境梯度的不同林型序列，反映出蕨类植物适生生境的不同，据此，将本区主要蕨类植物分为４种生态类型。     

Tgf2转座子介导鲤Fst1基因元件在鲤中的转基因效率研究

卵泡抑素(follistatin,Fst)蛋白具有拮抗TGF-β超家族许多成员的功能,通过直接的蛋白结合可抑制肌肉抑制素(myostatin)的活性,从而恢复肌肉的生长,表现出增肌效应。参照鲤高通量转录组测序数据的拼接结果,筛选出鲤卵泡抑素Fst1基因的编码框(ORF)序列(全长1 260 bp,编码320个氨基酸),构建了包含金鱼Tgf2转座子左臂(220 bp)、右臂(185 bp)、斑马鱼Mylz2启动子和鲤Fst1基因ORF的供体质粒pTgf2-Mylz2-ccfst1。通过显微注射方法,并在体外合成的Tgf2转座酶5'加帽mRNA的介导下,获得了一批转鲤Fst1基因的转基因鲤。经PCR检测,转基因鲤Fst1外源基因的整合率平均为44.7%,对其中4尾转基因阳性鲤的扩增产物进行回收、克隆和测序验证,结果表明阳性鲤中均含有转基因目的片段。说明Tgf2转座子转基因系统可在鲤中实现较高的转座效率,为进一步研究卵泡抑素在鲤肌肉发育中的功能奠定了基础。     

应用RAPD技术分析三种红鲤遗传多样性

利用40个随机引物对产于江西省的荷包鲤，玻璃红鲤和兴国红鲤及野鲤（俗称“江西三红”）进行了RAPD检测及聚类分析。结果表明，25个引物的扩增效果良好，引物S225，S221对4种鲤鱼扩增出的指纹图谱差异显著，存在5个明显的特异性条带，可作为分子标记，三个品种内，以荷包红鲤的遗传距离最小（0.809)；对于品种间，则是玻璃红鲤与兴国经鲤较为相似（0．745）；“江西三红”之间的遗传差异较小，根据聚类分析可右兴国红鲤与玻璃红鲤之间的亲缘关系最近，荷包红鲤次之。     

应用RAPD技术分析三种红鲤遗传多样性

利用40个随机引物对产于江西省的荷包鲤，玻璃红鲤和兴国红鲤及野鲤（俗称“江西三红”）进行了RAPD检测及聚类分析。结果表明，25个引物的扩增效果良好，引物S225，S221对4种鲤鱼扩增出的指纹图谱差异显著，存在5个明显的特异性条带，可作为分子标记，三个品种内，以荷包红鲤的遗传距离最小（0.809)；对于品种间，则是玻璃红鲤与兴国经鲤较为相似（0．745）；“江西三红”之间的遗传差异较小，根据聚类分析可右兴国红鲤与玻璃红鲤之间的亲缘关系最近，荷包红鲤次之。