鸡产蛋下降综合症（EDS_（－76））Z_（16）毒株的分离和鉴定

从５个爆发产蛋下降综合症的鸡场收集８０个样品中，分离到５株具血凝性的病毒，命名为ＣＡＶ—Ｚ＿（１６）、Ｚ＿２、Ｗ＿４、Ｔ＿１和Ｔ＿３株。病毒大小７０～８０ｎｍ，无囊膜，二十面体对称；对氯仿不敏感，ｐＨ３～５下稳定，５０～６０℃１小时不被完全灭活；在ＤＥＦ细胞上繁殖能被ＩＵＤＲ抑制；经血凝抑制试验、琼扩试验和微量中和试验证实与ＡＶ—１２７株属同一血清型，鉴定为ＥＤＳ＿（－７６）病毒。ＣＡＶ—Ｚ＿（１６）株能在鸭胚上繁殖，致死鸭胚，ＨＡ效价达２￣（１３）～２￣（１７），也能在鸭胚成纤维细胞上繁殖，产生ＣＰＥ，但ＨＡ效价仅有２￣７～２￣（１０）。初次分离ＥＤＳ＿（－７６）病毒选用鸭胚较佳，从生殖道分离成功率较高。     

鸭源新城疫病毒和减蛋综合征病毒在同一鸭胚中增殖的观察

用鸭源新城疫病毒（ＮＤ）Ｄ１０株和减蛋综合征（ＥＤＳ—７６）病毒ＧＣ２株同时在同一鸭胚中复制增殖．结果表明：（１）两种病毒同时感染同一鸭胚后，鸭胚平均死亡时间（ＭＤＴ）７３．６ｈ，死亡率８８．２％（１５／１７）．胚体皮肤出血、淤血，绒毛尿囊膜水肿、增厚，尿囊液能凝集人和鸡红细胞．（２）尿囊液感染鸡胚成纤维（ＣＥＦ）细胞，致细胞病变（ＣＰＥ），证实尿囊液中存在ＮＤＶ．用间接法Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ检测ＥＤＳ—７６病毒抗原，结果为阳性．（３）电镜观察经提纯浓缩后的尿囊液，可见到两种病毒粒子：ＮＤＶ形态不一，多数直径约１２０～１３０ｎｍ或更大．有囊膜；ＥＤＳ—７６病毒呈圆形，直径约７０ｎｍ，有囊膜．（４）用血凝试验（ＨＡ）测定两种病毒．其生长规律与单独接种时一致．（５）接种灭活的含毒尿囊液的雏鸡，在血清中出现抗两种病毒的ＨＩ抗体及抗ＥＤＳ－７６病毒的中和抗体，对ＮＤＶ强毒攻击有坚强的免疫力。     

鸡新城疫和减蛋综合症异源二联油乳剂灭活疫苗的研制

将鸭源鸡新城疫（ＮＤ）病毒Ｄ１０株和鸡减蛋综合症（ＥＤＳ－７６）病毒ＧＣ２株同时接种于同一鸭胚内复制，增殖 ９６ ｈ收取尿囊液，用甲醛灭活后加白油佐剂制成 ＮＤ和 ＥＤＳ－７６异源二联油乳剂灭活疫苗。简化了生产工艺、降低了制苗成本。经试用表明，该疫苗可有效地预防ＮＤ和ＥＤＳ－７６的发生。     

间接Dot—ELISA检测EDS—76病毒抗原的研究

本研究成功地建立了间接酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）用于检测ＥＤＳ－７６病毒抗原的标准化程序。对纯化ＥＤＳ－７６病毒抗原的最低检出量为１ｎｇ／Ｄｏｔ,其敏感性约为ＨＡ的１５．６倍。ＥＤＳ－７６阳性鸡血清特异性阻断试验及交叉反应试验证明,该法对ＥＤＳ－７６病毒抗原的检测具有特异性。试验结果表明,间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测ＥＤＳ－７６病毒抗原,具有敏感性高、特异性强、重复性好、经济、方便、快速等优点,适合于大规模样本的检测。     

减蛋综合征贵州分离毒全基因组探针的制备及检测

为准确检测鸡群中减蛋综合征病毒感染情况,从减蛋综合征病毒（ＥＤＳ）贵州分离毒株ＨＳ－１中提纯病毒ＤＮＡ后,用地高辛标记制备了全基因组探针。在Ｄｏｔ－ｂｌｏｔ中该探针不与正常鸭胚尿囊液核酸提取物及马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＤＮＡ发生反应,只与３株ＥＤＳ病毒（国际标准毒ＡＶ－１２７、贵州分离毒ＨＳ－１、南京分离毒（ＧＣ２）ＤＮＡ呈阳性反应,具有较高的特异性;可检测出３０ｐｇ的同源ＤＮＡ,具有较强的灵敏度     

陕西关中地区EDS－76病毒的分离与初步鉴定

采用鸭胚传代的方法，首次从陕西省关中地区ＥＤＳ－７６ＨＩ抗体阳性鸡群的卵巢和输卵管中分离到１株病毒，经血凝与血凝抑制试验、电镜现实、乙醚和氯仿的敏感性试验、核酸型鉴定试验及回归动物试验等，鉴定该分离物为ＥＤＳ－７６病毒。从病原学上证实陕西省已有该病的发生与流行     

鸡新城疫、产蛋下降综合症病毒血凝抑制试验抗原的研制

新城疫病毒（ＮＤＶ）鸡胚尿囊液和产蛋下降综合症病毒（ＥＤＳＶ）鸭胚尿囊液在不同保护剂和保存条件下血凝（ＨＡ）试验结果表明，以１０％甘油做保护剂制备的抗原，在－１８℃、４～８℃和常温条件下可保存一年，其ＨＡ效价稳定。抗原制备方法简单，成本低廉，适合基层生产单位使用。     

鸡传染性支气管炎（IB）诊断方法的研究

本试验用鸡胚大量繁殖鸡传染性支气管炎病毒,收集尿囊液,用１％胰蛋白酶处理制备ＩＵＢＶ血凝抗原,建立了血凝－血凝抑制检测ＩＢＶ抗体的方法,其特异性强,操作简便。另外,本试验建立Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ方法用于检测ＨＢＶ,病料经处理后,点样于硝酸纤维素膜,加兔抗ＩＢＶ抗体,经ＰＰＡ－ＤＡＢ－Ｈ２Ｏ２显色,其检测结果与双抗体夹心ＥＬＩＳＡ的检测结果一致。     

鸡产蛋下降综合症（EDS—76）Z16毒株的分离和鉴定

从５个爆发产蛋下降综合的鸡场收集８０个样品中，分离到５株具血凝性的病毒，命名为ＣＡＶ－Ｚ１６、Ｚ２、Ｗ４、Ｔ１和Ｔ３株。病毒大小７０－８０ｎｍ，无囊膜，二十面体对称；对氯仿不敏感，ＰＨ３－５下稳定，５０～６０℃１小时不被实例灭活；在ＤＥＦ细胞上繁殖能被ＩＵＤＲ抑制；经血凝抑制试验、琼扩试验和微量中和试验证实与ＡＶ－１２７株属同一血清型，鉴定为ＥＤＳ－７６病毒。ＣＡＶ－Ｚ１６株能在鸭胚上繁殖，致死鸭     

减蛋综合征油佐剂灭活疫苗的研制

减蛋综合征（ＥＤＳ）病毒南京毒株（ＮＥ４）在鸭胚中增殖后，用甲醛灭活，加入７号白油，制成ＥＤＳ油佐剂灭活疫苗，抗原量为每头份５０００血凝（ＨＡ）单位。经１２００万只鸡的试用表明，该苗能够有效地预防ＥＤＳ的发生。     

PCR方法检测鸡减蛋综合征病毒

根据已报道的鸡减蛋综合征(Egg drop syndrome 1976 EDS-76)病毒DNA序列,设计合成了1对能扩增300 bp DNA片段的引物,建立了EDS-76病毒的聚合酶链式反应(PCR)诊断方法。该方法对EDS-76病毒标准株AV-127扩增结果为阳性;对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)和鸡新城疫病毒(NDV)的扩增结果均为阴性。结果表明该方法特异且敏感,检测的最低病毒DNA含量达到2.5×10-2pg,PCR检测表明,从试验感染鸡的心脏中不能检测出病毒,肝脏和肾脏只有在感染后7~15 d检出,在试验感染后4~21 d的子宫、血液和4~17 d的脾中均能检测到病毒。     

ND-EDS-76异源二联油苗的研制

将鸭源鸡新城疫 (ND)病毒 D1 0 株和鸡减蛋综合症 (EDS- 76 )病毒 GC2 株同时接种于同一鸭胚内复制 ,增殖 96 h收取尿囊液 ,用甲醛灭活后加白油佐剂制成 ND- EDS- 76异源二联油乳剂灭活疫苗。该疫苗生产工艺简单 ,成本低 ,经试用表明可有效地预防 ND和 EDS- 76的发生。     

双夹心ELISA检测鸡EDS-76病毒抗原的研究

应用鸡抗EDS-76病毒、兔抗EDS-76病毒抗体和羊抗兔抗体,建立了检测EDS-76的双夹心ELISA方法,本试验确定的鸡抗EDS-76病毒抗体、兔抗EDS-76病毒抗体和HRP-羊抗兔抗体的最佳工作浓度分别为1∶160、1∶300和1∶1000。本法对纯化EDS-76病毒的最低检出量约为5 ng/孔。通过对EDS-76病毒试验感染鸡脏器带毒、排毒情况和临床样本的检测,表明双夹心ELISA方法对EDS-76病毒的检测特异性强、敏感度高、适合于成批样本的检测。     

免疫鸡血清与卵黄中EDS-76抗体水平比较

分别采取接种前和接种后的36只处于产蛋期的试验鸡血液分离血清及收集鸡蛋提取卵黄。卵黄分别用16%NaCl、8%柠檬酸钠和氯仿处理后,与血清一起检测减蛋综合症(EDS-76)病毒间接血凝抑制(HI)抗体。试验结果表明,血清HI抗体效价和卵黄HI抗体效价具有较好的一致性。由卵黄代替血清检测减蛋综合症HI抗体效价,作为鸡群诊断,免疫水平评估和疫苗质量评价的手段是可行的,在减蛋综合症防制中具有实际意义。     

应用竞争性酶联免疫吸附试验检测鸡产蛋下降综合症抗体

用鸡产蛋下降综合症(Egg Drop Syndrome-76,EDS-76)灭活油佐剂苗,免疫30周龄产蛋鸡,获取高免血清。提取特异性免疫球蛋白后,用辣根过氧化酶标记,制备成酶标抗体,建立了竞争性酶联免疫吸附试验。该法与血凝抑制试验的平行测定的比较结果为,前者的阳性检出率为71.8%,而后者为59.0%,所以前者明显地优于后者。而且该试验敏感性高,特异性强,具有快速、准确的优点,适用于大规模的检测和检疫。     

ND-EDS-76异源二联油苗田间试验研究

鸭源ＮＤＶ－Ｄ１０毒株与ＥＤＳ－７６ＧＣ２每株混合接种同一鸭胚，培养９６ ｈ收集尿囊液，制成ＮＤ－ＥＤＳ－７６异源二联油乳剂灭活疫苗，然后与普通二联油乳剂灭活疫苗接种同一鸡群，在 １０，２０，３０，１８０，３６０ ｄ分别检测抗体滴度并进行比较，结果差异不显著。在免疫后 ３０，１８０，３６０ ｄ随机取鸡各 ６０只为 １组，用 ＮＤＶ－Ｆ４８Ｅ９和 ＥＤＳ－７６ＧＣ２强毒株进行攻毒保护试验并进行比较，结果表明两种疫苗在 ３０，１８０ ｄ免疫保护率均为 １００％，３６０ ｄ对ＮＤ和ＥＤＳ－７６的免疫保护率分别为９２％和８７％以上．对临床２００万只开产前１２０日龄左右蛋鸡群免疫接种ＮＤ－ＥＤＳ－７６异源二联油乳剂灭活疫苗，可有效地保护整个产蛋期对ＮＤ和ＥＤＳ－７６强毒的攻击。     

用全血平板凝集抑制试验快速诊断鸡减蛋综合症(EDS_(76))

利用鸡产蛋下降综合症(EDS_(76))病毒具有凝集红细胞的特性,建立了全血平板凝集试验。用各种不同血凝价的病毒制备平板抗原,通过方阵试验,确定了全血平板凝集抑制试验抗原的测试单位。该法具有较高的阳性检出率,而且具有比现有的血凝抑制试验(HI)和琼脂扩散沉淀试验(AGP)更快速、更简便易行的优点,适用于基层单位的推广应用,尤其适于净化种鸡群,淘汰阳性种鸡。     

鸡产蛋下降综合症(EDS—76)灭活油乳剂苗的研究 Ⅱ.不同单位病毒和佐剂的疫苗及和其它同类产品的免疫比较

在本试验中,我们比较了每头份疫苗含不同血凝单位病毒的免疫效果,结果每头份含2000单位和3000单位的病毒疫苗免疫后HI抗体峰值分别为9.2log_2和9.6log_2,而含1000单位病毒的疫苗HI抗体峰值为6.8log_2.油乳剂苗的免疫后抗体效价显著高于氢氧化铝胶为佐剂的灭活苗。     

间接ELISA检测减蛋综合征病毒抗体方法的建立

应用SephdexG-200亲和层析获得纯化的减蛋综合征病毒EDSV作ELISA抗原,应用抗鸡Ig轻链单抗1B7辣根过氧化物酶结合物建立了定量检测EDSV抗体水平的ELISA方法。确立了将鸡血清100倍稀释监测ELISA效价(ET)的回归方程y=0.59287x+0.75757(r=0.96763)可用于定量测定。血凝抑制(HI)抗体与ELISA方法的比较试验表明,ELISA法比血凝抑制试验敏感2倍以上.