一株菠萝叶纤维脱胶菌产果胶酶的相关性质研究

对分离保存的1株能分解果胶的菌株进行发酵罐发酵和摇瓶培养,并用DNS法测定了果胶酶活力及分析了影响该酶活力的相关因素.结果表明,用发酵罐发酵的果胶酶活力在接种后10 h出现最大值,而摇瓶发酵的果胶酶活力峰值出现在接种后11 h,果胶酶活力作用的最适温度为45℃、pH值为5.0,金属离子Fe2+对酶活力有明显的激活作用,而Li+、Zn2+对酶活力有强烈的抑制作用.     

一株高产果胶酶菌的分离及其产酶条件的优化研究

[目的]挖掘新的高效产果胶酶菌株,为优化苎麻生物脱胶技术奠定基础。[方法]从沤麻池的厌氧泥、腐败的麻、苎麻园土壤中分离高产果胶酶菌株,在果胶平板上筛选、复筛选其中生长速度快、透明圈大、高产果胶酶的菌株,对其发酵培养基的初始pH值、发酵温度、发酵时间及接种量进行优化。[结果]获得了8株高产果胶酶的菌株,其中HY11产果胶酶活最高;该菌株在pH值为6、温度为35℃、时间为30 h、2.0%菜籽饼为碳源、1.0%NH_4H_2PO_4为氮源的培养基中为最佳发酵条件,果胶酶活力达到453 U/mL,比优化前提高了33.52%。[结论]获得了高产果胶酶菌株HY11,优化后的条件大大提高了其产酶活力。     

变色栓菌产漆酶培养条件及热激对发酵的影响

[目的]为提高漆酶发酵水平提供一种有效的控制策略。[方法]采用栓菌菌株14001,对其发酵产漆酶条件及热激对漆酶酶活的影响进行研究。[结果]栓菌产酶最适Cu2＋浓度为20mg/L,最适起始pH值为4.5,最适接种量为10%,最适培养温度为25℃,并对发酵过程进行pH控制,其酶活比不进行pH控制的酶活最大能提高30%;热激作用能诱导漆酶相应的mRNA产生,提高漆酶酶活1倍以上。[结论]优化后的培养条件和热激均能提高漆酶的发酵水平。     

环境微生物果胶酶活性研究

[目的]对从环境中筛选到的一种产果胶酶酶活较高的菌株进行酶学特征研究。[方法]通过功能平板从果园土壤中筛选到一种产果胶酶的菌株,通过DNS法在不同的温度和pH值条件下测定该酶酶活力。[结果]对菌株TP1粗酶进行的分析表明：其最适温度为60℃,最适pH值为7．50,酶活为38U,半衰期为1h,在80℃保温5min其酶活由最初酶活的79％下降到15％,温度下降到65℃后活性可恢复到最初酶活的65％以上。[结论]菌株TP1所产果胶酶的酶学特征适合推广,有进一步研究的价值。     

纸浆中高产纤维素酶生产菌的筛选及发酵条件研究

[目的]筛选高效纤维素分解菌优化纤维素酶的发酵工艺条件。[方法]从造纸厂废纸浆中筛选了一株纤维素分解菌株JX-2,考察碳源、氮源、碳氮比、营养盐、pH值、装液量、接种量以及发酵时间对产酶特性的影响。[结果]较优的培养基组成是麸皮1.5%,豆饼粉0.5%,NaCl0.5%,KH2PO40.1%,发酵的较优条件是培养液的初始pH值10.0,发酵温度37℃,装液量20%,接种量2%,发酵时间48h,该条件下滤纸酶活力高达1158.6U/ml发酵液。[结论]该菌株为专性嗜碱好氧菌,发酵的较优条件之一指标已具备一定的工业应用前景。     

产纤维素酶海洋细菌的筛选鉴定和产酶条件优化

从宁波洋沙山海域采集样品,通过刚果红染色法共筛选到23株具有纤维素分解能力的菌株。根据复筛结果,选择其中一株高产碱性纤维素酶的海洋细菌MB117进行深入研究。经16S rDNA鉴定,MB117为交替假单胞菌属（Pseudoalteromonas sp.）细菌。发酵条件研究结果表明,MB117菌株培养的最适pH为7.0,1%接种量和10%装液量最利于产酶,低温有助于菌体生长和产酶。酶学性质研究结果表明,酶反应的最适pH为9.0,pH 7.0~10.0范围内酶活力均可保持在85%以上;MB117菌株CMCase不耐高温,酶最适反应温度为40 ℃。     

海洋产几丁质酶微生物选育及组合发酵优化

[目的]探索海洋产几丁质酶微生物最佳的发酵组合。[方法]从唐山港曹妃甸港区海泥中分离筛选出2株几丁质酶活性强的菌株,研究不同的培养条件、诱变及组合发酵对菌株产酶的影响。[结果]通过紫外诱变产生的菌株的透明圈较大,直径在3~4 mm,但数量不多;培养基碳源以胶体几丁质最好,产几丁质酶的最适温度在32℃;pH在7.0~8.0产酶量最高;以蛋白胨和酵母粉为氮源对产酶的效果明显;添加Mn2+的培养基产酶能力最强;随着培养时间的增加,诱变的菌株组合发酵产酶后,几丁质酶活性显著提高。[结论]在组合发酵中,选取高产酶培养条件、不同来源的菌株混合培养对组合发酵有着重大的意义。     

降解纤维素真菌的分离筛选及其环境适应性初探

为获得有强降解纤维素能力的真菌,以羧甲基纤维素钠培养基为基础培养基,从采集的秸杆、牛粪等样品中进行分离筛选,获得具有分解纤维素能力的9株真菌菌株。采用羧甲基纤维素钠刚果红培养基进行粗选,初步得到6株透明水解圈较大的菌株。将所有待测真菌菌株进行液体发酵培养,测定其滤纸崩溃度及羧甲基纤维素钠酶活力,得到2株分解纤维素能力较强的优良菌株,命名为F-1,F-6。对这2株菌株进行碳源、氮源、pH值和培养时间的适应性研究及混合发酵培养的简单研究。结果发现,F-1菌株在碳源为滤纸,氮源为硝酸铵时,具有最佳产酶效果,而其最适产酶pH为6.5～7,最适产酶时间为6～7d。F-6菌株与其类似。混合发酵的最佳产酶时间为6～8d。通过鉴定可知2株菌都属于头孢霉属（cephalosporium corda）。     

双峰驼粪便中纤维素分解菌的筛选及酶学特性分析

旨在从双峰驼粪便中筛选能够分解纤维素的菌株,并对分离菌株进行鉴定和酶学特性分析。采用羧甲基纤维素平板法初筛和摇瓶发酵法复筛,从双峰驼粪便中分离筛选到1株能够降解纤维素的纤维素分解菌;采用形态学观察、生理生化特性以及16S rRNA基因序列同源性分析,初步鉴定该菌株为纤维化纤维微菌(Cellulosimicrobium cellulans)。根据该菌株的产酶特性评定其产酶能力;从其发酵产纤维素酶的适宜pH、温度、时间和接种量来评价该菌株的酶学特性。结果显示,该菌株最适酶反应条件为50℃,pH为6.0,且该菌株产生的纤维素酶具有较好的热稳定性。该菌株的最佳产酶条件为接种量10%,初始pH为7.0,培养温度为30℃,发酵时间为72 h。所筛选菌株产生的酶具有一定的耐碱性和耐热性,可应用于食品行业或废料处理等方面。     

产蛋白酶海洋细菌的筛选及产酶工艺优化

[目的]筛选产蛋白酶的海洋细菌资源。[方法]分别采用2216E培养基和酪蛋白固体培养基,对采自宁波洋沙山和象山海域的海水进行微生物的分离与纯化,采用平板透明圈法初筛和酶活力测定法复筛,采用16S r DNA序列分析进行菌株鉴定,并进行产酶工艺优化研究。[结果]纯化出15株产蛋白酶海洋细菌,从中筛选出1株产蛋白酶活力最高的菌株PB02,经鉴定为交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)。该菌株最适培养温度为20℃,最适装液量为10%,最适接种量为0.5%,最适转速为100 r/min,最适培养基pH为7。酶促反应最适温度为40℃,最适pH为10。[结论]该研究为蛋白酶高产菌株的改造和定向进化奠定了资源基础。     

果胶酶澄清金秋梨果酒的研究

[目的]探讨果胶酶澄清金秋梨果酒的最佳工艺条件。[方法]金秋梨榨汁后通过发酵获得金秋梨酒,然后添加不同量的果胶酶,通过单因子试验研究果胶酶添加量、不同酶解温度、不同酶解时间和不同酶解处理pH值对金秋梨酒澄清的影响,通过正交试验确定果胶酶澄清金秋梨果酒的最佳工艺条件,并探讨果胶酶澄清避免金秋梨果酒后浑浊发生的可能性。[结果]应用果胶酶澄清金秋梨果酒的最佳工艺条件为：温度30℃、添加0.2 ml/L果胶酶、酶解酸度为3.5、酶解时间90 min,该条件下澄清后果酒透光率为92.1%。澄清后获得的酒呈亮金黄色、透明清澈,具有金秋梨自然色泽、口味纯正、营养丰富。[结论]利用果胶酶澄清能较好地避免金秋梨果酒后浑浊的发生,因而果胶酶用于澄清金秋梨果酒具有应用前景。     

复合果醋研制中酶解工艺的研究

目的]对复合果醋研制中的酶解工艺进行研究,为对后续果醋的乙醇和醋酸发酵研究提供参考。[方法]以苹果、番木瓜和柑橘为原料,通过测定产酒率和透光率的方法,对此复合果汁酶解特性进行系统研究。[结果]确定了苹果、柑橘和番木瓜原汁的最佳体积配比为7：2：1;酶解的最佳工艺参数为：果胶酶的用量为0.08%（V/V）,酶解时间为2.5 h,酶解温度为45℃,酶解pH为4.0。[结论]果汁的酶解作用对果醋质量的提高起到很关键的作用。     

甘蓝与大白菜的原生质体融合

[目的]研究两种近缘物种原生质体的最佳融合条件。[方法]利用培养好的甘蓝与白菜的幼苗在果胶酶与纤维素酶的作用下分离出原生质体,再利用PEG融合液将这2种原生质体融合。[结果]用6％甘露醇＋8％纤维素酶＋2％果胶酶处理材料,酶解4h后,可以获得大量的游离原生质体,大部分原生质体呈圆形,散乱地游离在原生质体溶液各处。利用30％PEG融合液及0．1mol／LCaCI：溶液（含9％甘露醇,pH值9．5）将这两种原生质体融合可以获得稳定的、可育的细胞杂种植株,可以直接作为育种的种质材料。[结论]该研究为远缘杂交和进一步研究原生质体的培养及再生奠定了基础。     

果胶酶用于制取脐橙果汁的优化工艺研究

[目的]研究果胶酶制取脐橙果汁的优化工艺。[方法]采用果胶酶制取脐橙果汁,通过单因素试验和正交优化试验研究酶量、酶解时间、酶解温度、酶解pH 4个因素对脐橙出汁率的影响。[结果]在酶添加量0.06%、酶解时间0.5 h、酶解温度45℃、酶解pH 4.0,脐橙的出汁率最高可达到53.93%。[结论]该研究结果为脐橙果汁的深加工奠定了基础。 更多还原     

牛蒡寡糖-钕配合物对西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)的影响

[目的]确定牛蒡寡糖－钕配合物对病原菌的最佳作用浓度。[方法] 采用平板培养和液体培养法,研究了不同浓度牛蒡寡糖－钕配合物对尖镰孢菌菌落直径、果胶酶活性、菌丝生长量和菌丝细胞膜透性的影响。[结果] 在平板培养试验中,2～180 mg/L的牛蒡寡糖－钕配合物促进菌落扩展,但菌丝稀疏,200～400 mg/L 的牛蒡寡糖－钕配合物抑制菌落扩展,菌丝稀而薄。在液体培养试验中,2～400 mg/L的牛蒡寡糖－钕配合物抑制菌丝生长,抑制率为4.3%～64.4%,随着牛蒡寡糖－钕配合物浓度的升高,其抑制作用加强;2～400 mg/L 的牛蒡寡糖－钕配合物降低了果胶酶活性;当测定时间为15、30、60、90、120和180 min 时,2～400 mg/L的牛蒡寡糖－钕配合物增加了菌丝细胞膜透性。[结论] 该研究为牛蒡寡糖-钕配合物在植物上的合理应用提供了理论依据。     

聚电解质刷SiO2-g-PSStNa固定化果胶酶的研究

[目的]研究果胶酶的固定化方法,以期提高固定化酶的活性。[方法]通过表面原子转移自由基聚合(SI-ATRP)的方法,利用SiO2表面引发剂合成了SiO2-grafted PSStNa的纳米复合材料。并分别研究了固定化对果胶酶在水相介质中的pH、温度以及存储稳定性的影响。[结果]SiO2-grafted PSStNa不仅具有核壳结构,而且是表面富集大量负电荷的"聚电解质刷",将果胶酶固定于该"聚电解质刷",实现了方便、温和和省时的果胶酶的固定化。研究发现,自由果胶酶和固定化果胶酶的最佳反应pH为6.0,最佳反应温度为50℃。[结论]该研究结果对固定化酶在工业上的制备及应用有着重要的意义。     

水酶法提取南瓜籽油的研究

[目的]研究水酶法提取南瓜籽油的最佳工艺条件。[方法]分别采用单因素试验和正交试验确定南瓜籽油热处理工艺、酶解工艺的最佳条件,并试验纤维素酶和果胶酶的总添加量及添加比例对南瓜籽油提取率的影响。[结果]热处理工艺的最佳条件为热处理温度90℃,热处理时间10 min。酶解工艺的最佳条件为酶解时间6 h,酶解温度50℃,酶解pH 7,蛋白酶添加量3%,料水比1∶5;在该条件下,南瓜籽油的提取率为83.32%。维素酶和果胶酶的总添加量为2%,最佳添加比例为2∶1。[结论]水酶法工艺条件温和,适合油料作物油脂的提取。     

Bispora sp.MEY-1来源的新型嗜热多聚半乳糖醛酸酶的酶学性质研究及其应用评估

果胶酶作为添加剂广泛应用于食品行业的果汁澄清工艺中,发现和挖掘适用于工业应用的优质果胶酶,能够为工业应用提供更多的选择。从嗜酸的Bispora sp.MEY-1基因组中克隆得到一个多聚半乳糖醛酸酶基因Bspg28b,并在毕赤酵母GS115中实现高效异源表达。对重组蛋白纯化后进行酶学性质的测定,其最适pH 3.5,最适温度为65℃,在酸性至中性的环境中具有很好的pH稳定性,完全满足果汁澄清工艺的需求;BsPG28b在55℃下保持高度稳定,在65℃中保温10 min后仍能剩余50%的酶活,是真菌来源中少见的耐高温优质果胶酶。对BsPG28b的应用效果进行评估发现,可显著提高葡萄汁的澄清度,体现巨大的应用潜力。     

黑莓山楂复合果汁的研制

[目的]将黑莓和山楂制成复合饮料,提高产品的附加值和经济效益。[方法]以黑莓和山楂为原料,运用酶法液化法制取黑莓原果汁,浸提法制取山楂原果汁,以适当的比例调配黑莓山楂复合果汁,并加入适量的稳定剂,白砂糖及柠檬酸,配制成酸甜适口的果汁饮料。[结果]通过酶法液化法处理黑莓果酱泥的正交试验得出,果胶酶用量0.050%(果胶酶活力为3 000 U/g),酶解时间3 h,酶解温度55℃,效果最好。浸提山楂的单因素试验表明,果胶酶添加量的适宜范围1～3 U/ml,酶解时间2 h左右。复合果汁调配的单因素试验表明,黑莓-山楂比例为1∶3,制得的复合果汁色泽、气味、状态、口味最好。[结论]试验制得的黑莓-山楂复合果汁产品营养丰富,酸甜适口,得到品尝者的一致好评     

酶解生产鲜罗汉果速溶粉工艺研究

[目的]研究酶解生产鲜罗汉果速溶粉工艺。[方法]以无籽罗汉果鲜果为原料,采用湿法超微粉碎、酶解、喷雾干燥等技术研究鲜罗汉果速溶粉的生产工艺。[结果]酶解生产鲜罗汉果速溶粉的最佳工艺为：鲜果粗破碎并经胶体磨研磨,添加0.10 ml/L植物蛋白酶和0.25 ml/L果胶酶,在50℃下酶解60 min,最后采用进风温度160℃、入料流量15 ml/min、喷头转速20 000 r/min的操作条件进行喷雾干燥,得到水分含量低于3%,总苷含量达9.96%,甜苷V含量达5.42%的鲜罗汉果速溶粉。[结论]研发的产品醇香甘甜,既可作为直接冲饮型产品,也可作为食品和饮料产品中甜味剂的代用品。