树莓果油抑制UVB诱导HaCaT细胞光老化的作用研究

【目的】探究树莓果油对中波紫外线(UVB)诱导的人永生化角质形成细胞(HaCaT)光老化的抑制作用。【方法】采用超临界CO₂流体萃取技术提取树莓果油后，通过气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)分析其化学成分。建立HaCaT的UVB光老化模型，通过CCK-8法检测细胞存活率，用酶联免疫吸附法(ELISA)和微板法测定被UVB损伤的HaCaT细胞中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、Ⅰ型胶原蛋白(COL1A1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、硫氧还蛋白(Trx)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量。【结果】GC-MS分析显示，树莓果油中含有脂肪酸、脂肪酸酯、生育酚、甾醇等53种化学成分，其中油酸、亚油酸、Z-9-油酸乙酯、维生素E和谷甾醇与其抑制UVB诱导HaCaT细胞的光老化密切相关。抗光老化活性研究发现，与模型组相比，树莓果油能明显提高UVB辐射后HaCaT细胞的存活率(P<0.01),且具有明显的剂量依赖关系。此外，树莓果油能明显升高UVB诱导的HaCaT细胞中COL1A1的含量且降低MMP-3的含量...     

绿茶和红茶提取物抑制中波紫外线诱导HaCaT细胞氧化损伤和凋亡的比较

为比较绿茶、红茶提取物对中波紫外线(UVB)诱导角质形成细胞光损伤的抑制作用,用不同浓度的绿茶、红茶提取物对人表皮角质形成细胞(HaCaT)预处理6 h,以60 mJ/cm2的剂量照射细胞,比较细胞生存率和细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH–Px)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性以及丙二醛(MDA)含量的变化,用荧光法检测细胞内活性氧(ROS)的含量,用流式细胞仪检测细胞的凋亡变化,并对绿茶、红茶的茶多酚及儿茶素类物质含量进行比较。结果表明：与空白对照组相比,UVB辐射模型组的HaCaT细胞活性下降了21.61%,细胞损伤严重;与UVB辐射模型组相比,绿茶、红茶提取物可提高UVB辐射后HaCaT细胞的存活率,提高SOD、GSH–Px活性(P<0.01),降低LDH活性、MDA含量和细胞内氧自由基含量(P<0.01),降低由UVB辐射导致的细胞凋亡率(P<0.01),使细胞凋亡率分别降低了6.94%和3.68%;绿茶中茶多酚和儿茶素类物质的含量明显高于红茶,绿茶提取物的抑制效果优于红茶提取物。综合分析以上结果,认为绿茶、红茶提取物可以减少由UVB辐射导致的HaCaT细胞损伤和凋亡,具有光保护作用,其机制与细胞抗氧化能力的增强和氧自由基的加速清除有关,且绿茶提取物的作用效果比红茶提取物的好。     

红树莓对UVB诱导HaCaT光损伤的抑制作用

为研究红树莓对中波紫外线(UVB)诱导的人表皮角质形成细胞(HaCaT)光损伤的抑制作用,用20、40、80mg/mL3个不同剂量的红树莓果汁预处理人永生化表皮角质形成细胞(HaCaT细胞)6h,再采用60mJ/cm2强度UVB照射细胞;用MTT法检测细胞的生存率,采用比色法检测细胞中丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(Hyp)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH–Px)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性,用荧光法检测细胞内活性氧自由基(ROS)的含量,用倒置显微镜和流式细胞仪观察、检测细胞的凋亡状况。结果表明:UVB辐射对HaCaT细胞造成比较严重的损伤;相比于空白对照组,UVB辐射模型组HaCaT细胞活性下降了29.54%,SOD和GSH–Px活性极显著降低(P0.01);相比于模型组,红树莓各剂量组可显著提高UVB照射后HaCaT细胞的活性(P0.05或P0.01),提高SOD和GSH–Px活性(P0.01),减少MDA和ROS含量(P0.05或P0.01),降低LDH活性和增加Hyp含量(P0.01),呈剂量依赖关系,减轻UVB所导致的细胞损伤,凋亡率降低。红树莓可以明显减少UVB诱导HaCaT细胞的氧化损伤和凋亡,具有显著的光保护功效,其作用机理与增强细胞抗氧化能力、加速清除氧自由基以及促进胶原蛋白合成有关。     

重楼皂苷Ⅰ对紫外损伤的人永生化角质形成细胞(HaCaT)的保护作用研究

【目的】研究重楼皂苷Ⅰ(polyphyllinⅠ，PPⅠ)对急性中波紫外线(medium wave ultraviolet rays,UVB)损伤的人永生化角质形成细胞(HaCaT)的保护作用及分子机制，为滇重楼在日化用品中的应用提供理论依据。【方法】采用四甲基偶氮唑蓝法检测不同浓度PPⅠ处理HaCaT的存活率，筛选出无毒性PPⅠ浓度；将HaCaT细胞随机分为4组：空白对照组、UVB处理组(21.6 mJ/cm2)、0.250μmol/L PPⅠ+UVB处理组和0.500μmol/L PPⅠ+UVB处理组，采用结晶紫染色法探究2种浓度PPⅠ对UVB处理后HaCaT细胞增殖的影响；采用蛋白质免疫印迹法检测HaCaT细胞凋亡蛋白多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP1)、cleaved-PARP1、乙酰基-赖氨酸、K68位点的线粒体超氧化物歧化酶重组蛋白(mitochondrial recombinant superoxide dismutase 2,K68-SOD2)和沉默调节3蛋白(sirtuin3,SIRT3)的表达。【结果】与空白对...     

蓝莓提取物对小鼠视网膜光损伤的保护作用研究

[目的]建立视网膜光损伤小鼠动物模型,通过该动物模型评价蓝莓提取物对视网膜光损伤小鼠的保护作用.[方法]综合评价不同剂量蓝莓提取物对视网膜组织结构的影响,以及对视网膜MDA含量,LDH、SOD、CAT和GSH-Px活性的影响.[结果]蓝莓提取物对视网膜光损伤小鼠视网膜组织有显著的改善作用;蓝莓提取物能够显著抑制小鼠视网膜细胞中LDH活性,能够显著抑制视网膜内部的脂质过氧化,还能够显著提高SOD、CAT和GSH-Px等抗氧化酶的活性.[结论]蓝莓提取物对保护小鼠视网膜光损伤具有显著作用.     

牛蒡子不同溶剂提取物的UV和IR光谱研究

[目的]测定不同产地牛蒡子药材不同溶剂提取物的UV光谱与IR光谱。[方法]对不同产地牛蒡子样品的石油醚、氯仿、乙醇提取物UV光谱进行了测定,并对各样品石油醚、乙醚、水提取物的IR光谱进行了测定。[结果]不同产地牛蒡子的同种溶剂提取物UV光谱之间、IR光谱图之间均有较好的相似性及特征性共有峰;而不同溶剂提取物的UV光谱之间、IR光谱图之间差异明显。[结论]不同溶剂提取物的UV、IR光谱特征可更加全面、细致地体现牛蒡子化学成分的吸收特征,这为牛蒡子的快速鉴别提供参考依据。     

甘草黄酮对UVB损伤HDF细胞保护作用研究

[目的]研究甘草黄酮对UVB照射后产生光老化现象的HDF细胞保护作用。[方法]采用30 m J/cm~2的UVB照射HDF细胞建立损伤模型;加入不同浓度的甘草黄酮,24 h后MTT法检测细胞活性;用试剂盒法测定细胞上清液中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量。[结果]甘草黄酮浓度为10~(-9)、10~(-10)、10~(-11)mol/L时,能使受UVB照射损伤的HDF细胞活性增强;甘草黄酮浓度为10~(-9)、10~(-10)mol/L时,GSH-Px、SOD活性升高,MDA含量降低;甘草黄酮浓度为10~(-11)mol/L时,SOD活性升高、MDA含量降低。[结论]甘草黄酮能减轻UVB对HDF细胞的损伤,其机制可能与抑制氧化损伤、提高SOD活性有关。     

扇贝多肽对H2O2损伤HaCaT细胞的保护作用

[目的]建立H2O2诱导HaCaT细胞氧化应激损伤的体外模型,探讨扇贝多肽(PCF)对H2O2损伤HaCaT细胞的保护作用及其作用机制。[方法]采用不同浓度的H2O2(50、100、200、300、500μmol/L)作用HaCaT细胞12 h后,采用CCK-8法检测细胞存活率;用不同浓度(1.42、2.84、5.68 mmol/L)的PCF分别处理细胞12 h后,加入H2O2(300μmol/L)继续作用12 h,采用CCK-8法检测细胞活力,采用酶生化法法测定细胞上清液中LDH活性以及细胞质中GSH-Px、T-AOC和CAT水平。[结果]与正常组相比,50~500μmol/L浓度的H2O2依赖性地引起HaCaT细胞氧化损伤,300μmol/L的H2O2使存活率降低到56%(P0.01);与模型组相比,不同浓度的PCF均可保护H2O2诱导的氧化损伤,增加细胞存活率,降低细胞LDH的释放量,提高GSH-Px、T-AOC和CAT含量,增强细胞抗氧化作用。[结论]扇贝多肽能对抗H2O2诱导的氧化应激,对细胞受损具有保护作用,其机制可能与提高抗氧化酶活力有关。     

黑骨藤对PC12细胞氧化损伤的保护研究

[目的]研究黑骨藤提取物对H2O2诱导的PC12氧化损伤的保护作用。[方法]使用H2O2氧化压力诱导PC12出现氧化损伤,检测黑骨藤乙醇提取物对PC12细胞的保护作用。[结果]与模型对照组相比,黑骨藤乙醇提取物浓度在16~128μg/mL时,能显著提高PC12细胞的存活率,呈典型的量效关系。[结论]黑骨藤乙醇提取物具有抗氧化损伤作用。     

GX-50对中波紫外线辐射皮肤成纤维细胞的保护作用

为观察花椒中的提取物GX-50是否对UVB诱导的光老化皮肤细胞具保护作用,使用组织块法分离培养原代人皮肤成纤维细胞,通过观察不同剂量UVB照射后的细胞形态学改变确定后续实验的UVB单次照射剂量;MTT法检测不同浓度GX-50处理后的细胞活性;采用衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)细胞化学染色法确定皮肤细胞衰老程度;测定丙二醛(MDA)和ROS含量评估皮肤细胞氧化损伤的程度;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞TGF-β1表达量的变化;Western blot法检测细胞胶原蛋白表达量的变化。结果显示UVB辐射成纤维细胞后,细胞胞体增大、颗粒增多、部分细胞死亡,在不引起细胞明显死亡的UVB最大剂量50 mJ/cm2作用下,10-6mol/L的GX-50在孵育24h时可显著增加成纤维细胞存活率(125.7%,P0.01);经UVB照射后细胞SA-β-Gal染色阳性率增加,GX-50预处理后辐射组的阳性率明显降低(45.9%,P0.05);UVB组与对照组相比,MDA、ROS含量明显上升,GX-50预处理后辐射组MDA、ROS含量分别下降了22.6%(P0.01),22.8%(P0.05),基本与对照组持平;UVB辐射后TGF-β1分泌减少,GX-50预处理后辐射组则明显上升(14.7%,P0.05);Western blot结果显示,UVB可显著抑制胶原蛋白的表达,而GX-50预处理后表达量则基本恢复。推断GX-50对UVB引起的皮肤成纤维细胞损伤起到了保护作用,其机制可能是清除自由基和抗氧化,同时活化被UVB抑制的TGF-β信号通路,从而增加了胶原蛋白的表达。     

玉米幼芽提取物对小鼠皮肤UVA照射损伤的保护作用

研究了玉米幼芽提取物(extract of maize plumule,EMP)对长波紫外线(UVA)损伤的小鼠皮肤超微结构、抗氧化酶活性及脂质过氧化作用的影响。结果表明,UVA模型小鼠真皮细胞内出现空泡变性,线粒体肿胀、嵴减少,粗面内质网和核周间隙扩张;表皮细胞微绒毛减少,细胞固缩,细胞核染色质边集。EMP保护的小鼠皮肤细胞损伤程度明显减轻,结构基本正常。EMP可显著提高UVA辐射小鼠皮肤组织中的SOD活性(P<0.01)及CAT活性(P<0.05),降低MDA含量(P<0.05),与VC的抗氧化作用一致。表明EMP能够抵抗UVA对皮肤组织的氧化损伤。     

蜂胶抗光老化功效

基于UVA辐照成纤维细胞的氧化损伤模型,对蜂胶乙醇溶液与蜂胶聚乙二醇溶液开展细胞毒性检测,进一步对蜂胶清除氧自由基、延缓皮肤光老化功效性进行评估.研究表明:与模型对照组相比,样品组能显著降低活性氧(ROS)含量、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)含量以及人成纤维细胞中氧化相关基因MMP-1表达量.因此,蜂胶可能通过清除活性氧ROS和抑制胶原等胞外基质的降解而达到抗光老化的效果.     

蓝藻抗病毒蛋白N衍生物的细胞毒性及抗病毒活性检测

[目的]研究蓝藻抗病毒蛋白N(CVN)衍生物(LCVN)对永生化上皮角质形成细胞(HaCaT)的毒性及LCVN凝胶的制备和体外活性检测。[方法]用MTT法测定LCVN对HaCaT细胞株的半数毒性浓度(CC50)以及LCVN对流感病毒毒株A/HK/8/68(H3N2)的半数抑制浓度(IC50);用流式细胞检测法检测LCVN对HaCaT细胞周期与细胞凋亡的影响;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测LCVN凝胶与HIV包膜蛋白GP120的相互作用。[结果]培养24和48 h后,LCVN对HaCaT的CC50分别为(9.25±1.21)与(1.94±0.12)μmol/L,将LCVN做成凝胶后,与HIV外膜蛋白GP120的结合在一定浓度范围内具有剂量关系,LCVN凝胶对A/HK/8/68(H3N2)毒株的IC50为(98.20±0.03)nmol/L。[结论]LCVN对HaCaT细胞的毒性明显小于CVN,当做成凝胶以后LCVN对流感病毒A/HK/8/68(H3N2)具明显抑制作用,并能与HIV包膜蛋白GP120相互作用。     

构树叶提取物体外抗病毒活性研究

[目的]研究构树叶提取物的抗病毒活性。[方法]采用MTT法,观察构树叶的水、75%乙醇和50%丙酮提取物及不同给药方式对NDV、IBDV、ILTV和IBV等病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)活性的影响,探讨构树叶提取物体外抗病毒活性及其作用机制。[结果]乙醇和丙酮提取物能显著提高NDV感染的CEF细胞活性,丙酮提取物能显著提高ILTV和IBV感染的CEF细胞活性,但对IBDV诱导的CEF细胞病变无影响。经丙酮提取物预处理的CEF细胞对NDV或ILTV感染的抵抗力呈上升趋势。[结论]构树提取物中的有效成分可能通过阻断病毒对宿主细胞的识别和粘附发挥其抗病毒活性。     

玫瑰花对β-淀粉样蛋白诱导PC12神经细胞毒性的抑制作用

[目的]研究玫瑰花提取物对β-淀粉样蛋白（Aβ25-35）诱导的损伤PC12细胞的保护作用。[方法]PC12细胞加入Aβ25-35共同孵育后,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测PC12细胞活力,比色法检测细胞内丙二醛（MDA）含量,酶联免疫法检测细胞内Nf-κb水平。[结果]玫瑰花提取物对PC12无显著细胞毒性,可以显著抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞毒性。与模型组相比,添加玫瑰花乙酸乙酯萃取物的样品组能降低PC12细胞内MDA浓度和Nf-κb表达。[结论]玫瑰花提取物对β-淀粉样蛋白致PC12细胞损伤具有一定的抑制作用,其作用机理可能与降低Aβ25-35所致的PC12细胞内的氧化应激有关。     

葛仙米提取物诱导肝癌细胞HepG2凋亡的活性研究

[目的]研究葛仙米提取物诱导肝癌细胞HepG2凋亡的活性。[方法]采用二甲基四氮唑蓝（MTT）法测定细胞存活率,形态学法观察凋亡的特征性变化,AnnexinV/PI双染及PI单染流式细胞术法检测凋亡率。[结果]经不同浓度提取物作用后,HepG2细胞的生长受到显著抑制,并呈现时间-浓度依赖关系趋势。观察细胞形态,发现有凋亡特征性变化。AnnexinV/PI双染结果显示,癌细胞早期凋亡率随提取物浓度的升高而显著增高,最高可达79.2%。PI法同样显示凋亡的发生,其凋亡峰最大比率为9.6%,显著高于对照组。[结论]葛仙米甲醇提取物能够诱导肝癌细胞HepG2的凋亡。     

龙爪槐正己烷提取物对铜绿微囊藻抑制机理的研究(英文)

[目的]对前期研究发现的具有显著抑制铜绿微囊藻的龙爪槐正己烷提取物进行抑制机理分析。[方法]采用龙爪槐正己烷提取物处理铜绿微囊藻,通过考察铜绿微囊藻的叶绿素a含量、蛋白质含量及细胞膜透性和SOD活性,初步分析龙爪槐提取物对铜绿微囊藻抑制作用的机理。[结果]龙爪槐正己烷提取物破坏铜绿微囊藻的细胞膜系统,增加细胞膜透性;叶绿素a和蛋白质含量在培养7d后分别减少为对照组的10%和50%左右,对藻细胞的光合反应系统造成破坏;另外,藻细胞的SOD活性在龙爪槐正己烷粗提物作用下,在初期呈现为应激性上升,在后期表现为抑制的阶段性变化。[结论]龙爪槐正己烷提取物抑制铜绿微囊藻的可能机理是:破坏细胞膜,使膜通透性增大;破坏光合反应系统,造成光和色素和蛋白质含量减少;SOD活性发生阶段式变化。     

非均相UV/Fenton光催化降解土霉异味研究

[目的]探索非均相UV/Fenton光催化降解土霉异味的效果。[方法]利用离子交换方法将Fe2+负载在NaY分子筛载体上,制得催化剂FeY。在不同紫外波长照射下,利用Fenton反应降解2种土霉异味物质2-甲基异莰醇(MIB)和土腥素(Geosmin),优化pH和H2O2等降解条件,并将MIB和Geosmin添加到东湖本底湖水中进行降解。[结果]FeY的负载量为352.8 mg/g,Fe2+脱附率为5.7%。在FeY为28 mg/L,pH 6.5,H2O220 mg/L和反应60min的试验条件下,非均相UVB/Fenton体系对MIB和Geosmin的降解率分别为80.2%和84.9%。在UVA、UVB和UVC紫外光(波长分别为365、312和256 nm)条件下Photo-Fenton体系对MIB和Geosmin的降解率,随着紫外波长的降低而增大,且Geosmin降解速率常数高于MIB。湖泊水样中加入MIB和Geosmin降解表明,降解效率明显低于纯水样品。[结论]该研究制得的催化剂应用于非均相光催化体系,不仅可循环使用,而且还可扩大反应体系的pH应用范围。     

PARP-1基因过表达的HaCaT细胞生物学性状分析

[目的]探讨人皮肤表皮细胞(HaCaT)聚-ADP核糖聚合酶-1基因(PARP-1)过表达后的生物学性状变化。[方法]设试验组、空载体对照组、正常HaCaT对照组,运用真核表达载体使PARP-1基因在HaCaT中过表达,在光学显微镜下观察转染重组子的试验组细胞、转染空质粒的对照组细胞及正常对照组细胞的形态学特征。绘制细胞生长曲线,并运用流式细胞技术分析细胞周期。以苯并芘(BaP)恶性转化的细胞作为阳性对照,采用软琼脂克隆形成试验对细胞的恶性程度进行鉴定。[结果]光镜下试验组细胞与空载体组细胞及正常对照组细胞相比,除体积稍有缩小外,其他形态学特征没有明显变化。3组细胞的生长曲线均呈相似的S型,但转染重组子细胞的生长速度加快。试验组、空载体组及正常细胞组的细胞周期分布为G1期(44.3%、78.1%、76.4%)、G2期(3.6%、13.3%、12.2%)和S期(52.1%、8.6%、11.4%)。正常对照细胞和空载体组分布相近,试验组S期明显增多;试验组细胞未见在双层软琼脂糖中生长出细胞集落,而阳性对照组细胞集落明显。[结论]PARP-1基因过表达后可以改变HaCaT细胞的生长速度,但并不影响细胞的恶性程度。     

酶法制备驴骨多肽的工艺研究

[目的]研究酶法水解驴骨蛋白制备骨多肽的工艺,可为充分挖掘骨蛋白资源及开发骨蛋白深加工产品提供理论依据,具有重要的科学意义。[方法]以水解度和氮溶出率为考察指标,对驴骨进行高温高压蒸煮、不同食品级蛋白酶水解及酶解条件的研究。[结果]提取驴骨蛋白的最佳蒸煮条件为：温度121℃,压力0．1MPa,蒸煮时间4h;木瓜蛋白酶的水解产物具有较高的水解度和氮溶出率,为最佳水解酶;驴骨粉经121℃加热预处理30min可提高酶解效果;木瓜蛋白酶的最佳水解条件为：水解时间5h,底物浓度8％．pH值6．0,加酶量7000U／g,温度55℃;木瓜蛋白酶水解驴骨蛋白的酶解产物pH值在5～9时,氮溶解指数高于88％,三氯乙酸氮溶解指数达84％。[结论]该酶水解的产物具有较高的溶解性,大部分为低分子肽,可直接应用于食品中。