枇杷LEAFY同源基因的克隆及序列分析

为从分子水平研究枇杷成花的机理,通过分析植物花分生组织决定基因LEAFY(LFY)同源基因的保守区序列,设计了1对简并引物,用PCR方法从枇杷栽培品种‘早钟6号’基因组DNA中扩增出1个1317bp的片段,把该片段克隆到pUCm-T载体,测序和序列分析结果表明获得了枇杷LFY同源基因(ejLFY)3’端的1个片段,该片段有1个911bp的内含子,编码区共编码130个氨基酸,其序列已经在GenBank中登记(登录号为AY551183)．在GenBank中进行同源性搜索,发现该基因片段与其他作物中已经报道的LFY同源基因的同源性大都在94％以上,特别是与同属于蔷薇科的苹果的同源性最高,达到98％的同源性,推测它们具有相似的功能．     

芥菜LFY同源基因克隆及序列分析

在提取芥菜基因组DNA的基础上,克隆了芥菜中的LEAFY(LFY)同源基因,该基因长为1 307 bp.经过对该基因片段的核苷酸序列分析表明,它和花椰菜的BOFH基因在结构上有高度的保守性,同源率高达93%,与拟南芥中的LFY基因同源性达87%.

Abstract：

The homologous DNA fragment of L FY was cloned from mustard genomic DNA that had been isolated from Brassica juncea Coss. Its length was 1307kb. Analysis of the nucleotide sequence indicated that homology was up to 93% between it and BOFH of cauliflower, and up to 87% between it and LFY of Arabidopsis thaliana, which implies that they are highly conserved on their structure.     

植物开花相关基因研究进展

从同源异型基因、花分生组织特性基因、开花时间相关基因三个方面对植物开花基因进行了介绍,特别是对花器官发育的开关基因——LEAFY在果树上的研究进展进行了详细地阐述;LFY同源基因在不同植物中的表达有所不同,不同植物LFY同源基因的功能尚需用进一步研究。     

LEAFY及其同源基因的表达与高等植物的成花

综述了LEAFY及其同源基因的表达与植物成花间的关系.LFY基因控制着花序分生组织向花分生组织的转变,作用于花序和花发育的各个阶段.LFY同源基因在不同植物中的表达有所不同.     

巴西橡胶树LEAFY基因的克隆及其对拟南芥的转化

研究巴西橡胶树开花调控机理是缩短橡胶树育种周期的重要研究内容。本研究通过同源克隆的方法,克隆了2个橡胶树LEAFY(简写为LFY)基因,分别命名为HbLFY1和HbLFY2。采用农杆菌介导法,将其转化野生型拟南芥和拟南芥LFY突变体,发现克隆的橡胶树LFY1和LYF2基因并不能显著促进拟南芥提早开花,也不能恢复拟南芥LFY突变体开花时间。据此推测,LFY基因可能不是调控橡胶树开花的关键基因或不能独自起作用。     

荔枝 LEAFY 同源基因克隆及表达分析

采用RT-PCR与RACE-PCR相结合的方法,从‘糯米糍’荔枝Litchi chinensis花芽中分离得到了‘糯米糍’荔枝LEAFY同源基因(LcLFY)的cDNA全长序列.基因全长1 397 bp,其中编码区1 171个碱基,推测编码390个氨基酸.采用半定量PCR技术研究了LFY同源基因在荔枝花芽分化进程的表达情况.结果表明,在‘糯米糍’荔枝花芽分化开始时检测到LFY同源基因的表达,在花序原基出现前后表达增强,但在花分化的阶段表达水平明显减弱.     

香草兰VpLFY基因的克隆与表达分析

花分生组织特征基因LEAFY在植物花芽分化与成花诱导途径中起着重要的调控作用。通过RACE方法从香草兰中克隆Vp LFY基因的全长c DNA序列。结果显示,该基因包含一个1 493 bp的开放阅读框,编码491个氨基酸残基。经蛋白质序列同源比对分析结果发现,Vp LFY属于FLO-LFY家族。组织特异性研究结果表明,Vp LFY基因在香草兰组织中属于组成型表达。荧光定量分析结果表明,Vp LFY基因分别在香草兰纯花芽和混合花芽的不同发育阶段中有着较强的表达。     

百合LiLFY1基因的克隆和表达分析

 【目的】分离百合的LFY类基因,检测百合中LFY类基因的拷贝数并分析其表达模式。【方法】利用 RT-PCR结合RACE的策略克隆百合的LFY类基因,通过Southern杂交检测百合中LFY类基因的拷贝数,通过RT-PCR分析LiLFY1基因的表达模式。【结果】获得了包括全长开放阅读框（ORF）的LiLFY1基因的cDNA序列。与已克隆的LFY类蛋白的同源性分析表明,LiLFY1编码的蛋白与单子叶植物水稻和玉米的LFY类蛋白具有更高的同源性。Southern杂交结果表明,二倍体百合中有2个拷贝的LFY类基因。LiLFY1基因在百合的幼嫩花芽和顶端分生组织中表达,而在根、茎、成熟的叶片和成熟花的各轮器官中不表达。【结论】百合的LiLFY1基因与已克隆的其它作物的LFY类基因高度同源,在百合的顶端分生组织和幼嫩花芽中表达,LiLFY1基因的克隆将有助于调整百合开花时间的基因工程研究。     

桃基因组中R类抗病基因同源序列的克隆与序列分析

许多抗病基因均具有核苷酸结合位点(NBS)和富含亮氨酸重复区(LRR)。根据已知的NBS-LRR型抗病基因蛋白质的保守序列,设计简并引物,用以扩增桃基因组中的抗病基因同源序列。获得一条大小约500 bp的扩增片段,克隆测序后得到4个NBS-LRR类抗病基因同源片段(PNBS1、PNBS2、PNBS3、PNBS4)。推导的氨基酸均具有P-loop(激酶1a)保守区和中间的激酶2a、激酶3a保守区,除PNBS4外,均具有3端疏水结构域。它们与已克隆的N、L6、PRS2 等抗病基因在核苷酸水平上的同源性为21 1%~58 8%;在氨基酸水平上的同源性为18 8%~41 4%。这些抗病基因同源片段(RGA)可做为分子标记筛选桃的抗病候选基因。     

拟南芥lfy 突变体表型及氨基酸序列突变位点分析

LFY(LEAFY)及其同源基因是控制高等植物从营养生长向生殖生长转变的重要基因,对这些基因进行深入研 究具有缩短林木幼龄期和改良花卉花期的实际应用价值。为了深入研究LFY 氨基酸序列变化对其功能的影响,本 研究以lfy2 和lfy5 为材料分析了这2 个突变体表型变异及突变位点的特点。表型观察表明:虽然lfy2 和lfy5 属于 不同的生态型,但是表型变异类似;lfy 突变体花期比野生型推迟14 d,茎生叶和次生枝的数目增多,花器官缺失并 且被同源异型化。序列分析发现:lfy2 的LFY 氨基酸序列中只发生了P236L 位点变异,lfy5 的LFY 氨基酸序列中 发生变异的位点为F42L、V209A 和P236L,其中F42L 和V209A 是非保守位点变异。Q-PCR 结果显示:lfy2 的花序 中TFL1 和FLC 表达上调,FT 和AP2 表达下降,AP1、AP3、AG 几乎没有表达。这些结果表明,由于LFY-C 端结构域 内236 位氨基酸发生突变引起LFY 功能缺失,导致了lfy2 和lfy5 表型变异。      

苹果黑星病菌DNA提取方法研究

采用CTAB法、SDS法、Parker法及改进的SDS法提取苹果黑星病菌的DNA,经紫外分光光度计测定,改进SDS法提取的DNA得率较其他3种方法高,约为Parker法的2倍。改进SDS法提取的DNAA260nm/A280nm值为1.700～1.900,DNA纯度较高,而其他3种方法提取的DNAA260nm/A280nm值均高于1.900,DNA中所含RNA的量较高。4种方法提取的DNA在230nm波长处的吸收值分别为0.658,0.257,0.926和0.208,说明DNA不同程度地被酚类物质所污染,但改进的SDS法提取的DNA受污染程度最小。     

栎属植物DNA提取方法的研究

为了获取高质量的栎属植物基因组DNA,采用经过改良的SDS法和CTAB法对几种常见栎属植物进行基因组DNA的提取.结果表明:改进的SDS法和CTAB法都较常规的方法好.所提出的DNA较纯净.改进的CTAB法与改进的SDS法比较.改进的CTAB效果较好,所获得的DNA经紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测,纯度较高,OD260/OD280为1.75～1.80,运用SSR和RAPD进行分析时,可以获得较好的扩增片段,说明蛋白质、多糖、RNA等去除较干净.     

土壤微生物分子生态学研究中总DNA的提取

建立了一种土壤DNA提取方法。根据DNA产量和纯度2个评价指标，从3种手提土壤DNA方法中优选出方法B为手提DNA方法（Lab method），它包括样品预处理，细胞裂解，粗DNA纯化，其中细胞裂解组合了玻璃珠击打．SDS裂解，溶菌酶裂解。进一步应用PCR-限制性片段长度多性（Restriction fragmentlength polymorphism，RFLP）技术及PCR-温度梯度凝胶电泳（Temperaturegradientgelelectrophoresis，TGGE）技术．结合DNA产量、纯度、片段大小以及所反映的微生物群落结构特性等指标评价了手提方法（Labmethod）得到的总DNA质量，并将这些结果与2种应用较广的商业试剂盒（Mo Bio UhraClean Soil DNA Kit和Bio 101 FastDNA SPIN Kit（For Soil1）所得DNA的各种指标进行了比较。结果表明，手提方法（Labmethod）的粗DNA产量低于Bio 101 Kit的，但高于Mo Bio Kit的。这些方法所得DNA的长度都在21kb左右，Labmethod提取的DNA没有严重被剪切现象，而2种试剂盒提取的DNA都有不同程度的剪切。手提方法得到的DNA经纯化后，应用细菌及真菌特异引物进行PCR扩增，均能获得目的片段，表明该方法能从土壤中同时有效提取细菌和真菌总基因组DNA。并且，手提方法所得DNA的细菌16SrDNA和真菌18SrDNA的PCR-RFLP图谱与两种商业试剂盒的图谱基本相似，但3种方法提取的DNA在细菌16S rDNAV3区和真菌28SrDNA片段的PCR-TGGE图谱上都存在一定差异．主要表现在一些弱势条带的有无或强弱上。这说明手提方法提取的总DNA与2种商业试剂盒一样，在一定程度上能反映微生物群落的多样性和组成。总之，手提DNA方法（Lab method）所用试剂普通，价格便宜，能在4h以内获得够质够量的土壤DNA用于微生物分子生态学研究，较适合于广大普通实验室进行土壤DNA提取工作。     

一种简易的拟南芥幼苗微量DNA提取方法

报道了一种简易的拟南芥幼苗微量DNA提取方法。陔方法可在常温下进行DNA提取，而且样品用量少，仅需10mg左右，用100μL重蒸水回溶DNA沉淀所获得的粗提液可直接用于PCR检测。结果表明：应用该法提取的DNA完整性好，PCR效果佳，适用于拟南芥转基因植株鉴定。     

基于磁性微球的基因组核酸提取及其在中药材真伪鉴别和亲缘关系分析中的应用

为从分子水平上对中药材质量进行控制,基于磁性微球对中药材核酸进行纯化及后续生物鉴定,采用磁分离技术提取高纯度的核酸模板,以高磁响应性、粒径均一的超顺磁性四氧化三铁微球为固相载体,在聚乙二醇和氯化钠等的协同作用下,对根、茎、叶、花、果实、种子类中药材基因组核酸进行提取;分别提取丹参和柴胡的基因组核酸,并对其进行聚合酶链式反应扩增(PCR)和随机扩增多态性分析(RAPD),用于对丹参的真伪鉴别和对柴胡进行亲缘关系分析.结果表明:经提取,获得了纯度较高(OD260 nm/OD280 nm介于1.6~2.0)的中药材核酸模板;通过扩增叶绿素rpl16基因片段,可有效鉴别丹参及其伪品牛蒡;采用3个有效随机引物,可从基因水平上分析4个柴胡品种的亲缘关系远近     

Antigenic relationships in mammalian DNA polymerase

Rabbit antibody was prepared against a high-molecular-weight DNA polymerase purified from the soluble fraction of calf thymus gland. This antibody does not inhibit terminal deoxynucleotidyl transferase isolated from that source, but does inhibit both low-molecular-weight and high-molecular-weight DNA polymerases isolated from cytoplasmic and nuclear fractions of a number of mammalian tissues (mouse L cells, calf thymus, phytohemagglutinin-stimulated human lymphocytes, rat liver, and rabbit bone marrow). The results suggest that (i) no antigenic relationship exists between terminal transferase and DNA polymerase, (ii) common antigenic determinants exist in the DNA polymerases from all mammalian sources, and (iii) multiple forms of DNA polymerase found in mammalian, cells are related by having polypeptide sequences or subunits in common.     

PVP对烟草基因组DNA提取的影响

为克服烟叶组织中蛋白质、糖类、色素、烟碱及酚类等物质对烟草基因组DNA提取的干扰,防止DNA产生褐变,获得质量高且适于SRAP-PCR反应需要的DNA,采用改良CTAB法探讨了在提取液中添加不同浓度PVP对烟草基因组DNA提取质量的影响.结果表明:在1%、2%、4%PVP浓度下提取烟草DNA样品的OD260/OD280值均在1.7～1.9之间,OD260/OD280值随着提取液中PVP浓度的提高而增大,DNA褐化程度明显降低,获得的DNA能满足SRAP分析要求.     

Interferon-beta-related DNA is dispersed in the human genome

Interferon-beta 1 (IFN-beta 1) complementary DNA was used as a hybridization probe to isolate human genomic DNA clones lambda B3 and lambda B4 from a human genomic DNA library. Blot-hybridization procedures and partial nucleotide sequencing revealed that lambda B3 is related to IFN-beta 1 (and more distantly to IFN-alpha 1). Analyses of DNA obtained from a panel of human-rodent somatic cell hybrids that were probed with DNA derived from lambda B3 showed that lambda B3 is on human chromosome 2. Similar experiments indicated that lambda B4 is not on human chromosomes 2, 5, or 9. The finding that DNA related to the IFN-beta 1 gene (and IFN-alpha 1 gene) is dispersed in the human genome raises new questions about the origins of the interferon genes.     

玉米DNA导入大麦的研究初报

采用两种浸胚法将玉米ＤＮＡ导入大麦湘皮１号,获得矮秆、大穗、高结实率的株行材料。改良浸胚法能大幅度地提高外源ＤＮＡ直接导入的引变频率（由５．９３％提高到７０．８０％）,认为外源ＤＮＡ导入具有双重作用的提法有合理性,生物诱变包含返祖和突变两个方面。同时推断改良浸胚法的本质是外源ＤＮＡ渗入“受体”的“累加”效应,基因转移和突变共同构成分子育种空前的“创造力”。     

食用大豆油中DNA的快速提取和转基因成分定性检测

转基因生物（GMO）制品中转基因成分检测的难点在于深加工产品中DNA的提取。本试验以食用大豆油为研究对象,研究操作简单、费用低廉的大豆深加工产品DNA提取的新方法。利用大豆内源基因Lectin设计引物,对所获得的DNA进行PCR检测,结果证实通过本方法提取的DNA纯度足以进行PCR反应。利用转基因大豆转化载体序列设计引物,进一步对其转基因成分进行检测,结果表明,用本方法从转基因大豆油中提取的DNA含有转基因成分。