番茄品种对ToMV抗性与氧化酶活性的关系研究

测定了6个不同抗性番茄品种接种ToMV两周后POD、PPO和PAL活性,以及POD同工酶酶谱的变化。结果表明:抗、感病品种接种ToMV后POD、PPO和PAL活性均比相应未接种株高,而且POD、PPO和PAL的酶活增长率与抗病性成负相关;感病品种接种株的POD同工酶谱带数都比相应未接种株多出2条酶带,而抗病品种只增加了1条酶带。     

加工番茄Tm-22基因的SCAR鉴定

[目的]建立利用SCAR标记技术鉴定番茄花叶病毒病抗性基因Tm-22的技术体系,开展分子标记辅助选择育种,选育加工番茄抗病品种.[方法]以6份ToMV表现型鉴定已知的加工番茄材料为试材,选用与Tm-22基因连锁的SCAR标记,通过PCR扩增和Hind Ⅲ酶切鉴定有无Tm-22基因,并将其应用于加工番茄品种选育.[结果]抗感试材均产生950 bp和1 100bp的特异片段,纯合抗病基因型无HindⅢ酶切位点,杂合抗病基因型和感病基因型有Hind Ⅲ酶切位点,酶切结果为:纯合抗病1 100 bp+ 950 bp、杂合抗病1 100 bp+950 bp +500 bp +300 bp+ 150 bp、感病基因1 100 bp +500 bp +300 bp+ 150 bp.[结论]通过酶切产生的特异性片段就可鉴定出Tm-22基因,成本低,操作不受时间、地域、发育时期的限制,提高了选择的准确性,加快了育种进程.     

甘肃河西地区番茄病毒病病原种类鉴定

2006-2008年对甘肃河西地区番茄病毒病的种类进行了调查和鉴定.河西地区番茄病毒病田间表现为花叶和条斑等症状,种子可带毒.采用DAS-ELISA方法,从田间样本及该地区出入境番茄种子上检测到烟草花叶病毒(TMV)、番茄花叶病毒(ToMV)和黄瓜花叶病毒(CMV),并对TMV 和ToMV阳性样品进行了 IC-RT-PCR鉴定.该地区番茄病毒病优势病毒为烟草花叶病毒;13%的样本中检测出2种病毒的复合侵染.     

新疆加工番茄上番茄花叶病毒的分子鉴定

从表现花叶、畸形的加工番茄病株上获得分离物xj124,用1 对ToMV CP 基因引物进行 RT-PCR ,扩增得到了689 bp 的特异性核苷酸片段.将PCR产物插入到克隆载体pMD1 8-T中再转化到大肠杆菌TOP10.经限制酶酶切鉴定,重组克隆中含有与PCR 产物大小相同的689 bp 的插入片段.cDNA全序列分析表明,所扩增出的689 bp ToMV CP基因,含1个480 bp开放阅读框架( ORF),编码160氨基酸组成的蛋白,所克隆的基因包含完整的ToMV CP基因.所测得的xj124分离物与国内外已报道的部分ToMV CP基因序列比较,核苷酸同源性高达84.4;～99.8;,氨基酸同源性高达98.7;～100;.因此将该分离物鉴定为番茄病毒病花叶病毒.     

武汉市设施秋番茄新品种引进筛选

基于8个番茄品种植物学性状、抗性、产量以及分子标记,筛选适宜武汉市秋季设施栽培的番茄新品种。结果表明,安莎迪、迪达2个品种产量高,抗黄化曲叶病毒病(Ty-1)、根结线虫病和烟草花叶病毒病,果实商品性好,符合武汉市消费习惯,可在武汉市及周边地区示范推广;迈阿蜜经分子标记检测含有Ty-2基因。     

番茄抗青枯病材料及抗病基因SSR标记的初步筛选

[目的]快速筛选出番茄青枯病抗性基因的SSR标记。[方法]对来自4个国家27份番茄材料青枯病的抗性进行鉴定,并用一套SSR标记对材料进行分析,寻找与青枯病抗性基因连锁的标记。[结果]来自国内的3份材料表现出理想的抗病性,"湘引79-1"表现高抗,"860"及"039-3"表现抗病。标记TOM176-177在3份抗病材料上能扩增出相同带型,而在其他材料上扩增出的带型不同。TOM176-177在27份材料上存在4个等位基因,在3份抗病材料上是同一个等位基因,其扩增产物比其他等位基因小。[结论]该研究初步推断标记TOM176-177与青枯病抗性基因连锁。     

兼抗黄化曲叶病毒病、灰叶斑番茄新品种浙粉712的选育

抗病品种的使用是预防番茄黄化曲叶病毒病(TYLCVD)最经济有效的措施。浙粉712是以F8A-1-81为母本,以T12-032A为父本通过常规杂交育种技术结合分子标记辅助技术选育的杂交一代番茄新品种。该品种丰产,果实商品性优良,综合抗性强,抗番茄黄化曲叶病毒病、灰叶斑、番茄花叶病毒(ToMV)、枯萎病,适宜在我国喜食粉红果地区种植。     

不同番茄品种对番茄黄化曲叶病毒病抗病性分析与筛选研究

[目的]通过不同番茄品种设施栽培下抗番茄黄化曲叶病毒病(Tomato Yellow Leaf Curl Virus,TY)抗病性、植株生物学、果实品质和产量的分析与筛选,为南疆地区适宜的秋延茬番茄品种选择提供一定的参考依据.[方法]于2013年在喀什地区,对引进的国内外抗TY番茄品种进行番茄黄化曲叶病毒病发生情况的调查和取样鉴定.同时,对植物和果实的其它生物学性状也进行比较研究.[结果]在抗病性方面,供试的12个番茄品种中除了欧亚多、迪欧和天马54外,其他品种均对TY有很高的的抗性;产量方面,参试的品种产量最高的是班特11 018.0 kg/667 m2,其次为奥力奥10 816.4 kg/667 m2;在品质方面,VC含量最高的品种是抗TY番茄、班特、奥力奥,欧亚多和抗TY番茄含糖量最高;生物学方面,长势较好的品种有抗TY番茄、奥力奥、班特和新达利.[结论]抗病品种大卫、班特虽然抗性好、产量高,但果肉带黄色,品质较差;欧诺虽然抗性最好、产量高,但灰霉病、脐腐病很严重,果实大小不均;欧瑞斯、奥力奥、新达利为综合性状好的推广品种.     

番茄抗黄化曲叶病毒病近等基因系的选育

[目的]选育番茄抗黄化曲叶病毒病近等基因系。[方法]通过引进含黄化曲叶病毒番茄材料与优良自交系多代回交,培育抗黄化曲叶病毒病的温室专用骨干亲本系。[结果]经分子鉴定,选育骨干亲本系抗病材料扩增到抗病基因(Ty1、Ty2和Ty3),共获得Ty13N-3010-2、Ty13N-3010-45、Ty123N-3022-21、Ty123N-3022-45 4份材料田间综合性状表现良好抗病亲本材料,可直接应用于育种。[结论]为培育抗TY病毒病的温室专用品种提供了骨干亲本。     

江苏省番茄黄化曲叶病毒病(TYLCD)的发生与诊断初报

番茄(Lycopersicon esculentum Mill.)是江苏省主要蔬菜作物,常年栽培面积在4.78×104 hm2以上,在蔬菜周年供应中占有重要地位.番茄花叶病毒病(Tomato mosaic virus,ToMV)和黄瓜花叶病毒病(Cucumber mosaic virus,CMV)一直是番茄生产中的主要病毒病.     

河北省番茄黄化曲叶病毒病的发生与分子诊断

[目的]对河北省发生的一种番茄病毒病进行症状识别和分子诊断。[方法]2008年11月及2009年7～10月对河北省番茄病毒病田间发生情况和典型症状进行详细调查,然后根据已发表的番茄黄化曲叶病毒的基因组序列设计特异引物,进行PCR检测。[结果]该病毒病的发病症状与番茄黄化曲叶病毒病相一致,从症状上初步诊断为番茄黄化曲叶病毒病;在石家庄和衡水采集的病株样本的DNA均扩增出307 bp大小的特异条带,表明该片段为TYLCV的一个分离物,证明采集的番茄病株是由TYLCV侵染所致的番茄黄化曲叶病毒病。[结论]该研究是番茄黄化曲叶病毒病在河北省大面积发生及从分子水平上确诊的首次报道。     

抗黄瓜花叶病毒RNAi载体的构建及烟草的转化

[目的]构建抗黄瓜花叶病毒RNAi载体,并将载体转入烟草。[方法]采用RT-PCR方法,扩增黄瓜花叶病毒NS04加工番茄分离物的RNA2基因组的序列。选取CMVRAN2基因组中的复制酶片段作为靶序列,构建pBi35SCR2真核表达载体,并对表达载体进行鉴定;通过农杆菌介导的方法将表达载体转入烟草,用PCR的方法检测载体是否转入。[结果]系统进化树分析结果表明,RNA2中编码CMV-2a的序列与中国浙江的DQ412731分离物有较高核苷酸及氨基酸同源性,分别达到98.0%和96.5%;PCR结果表明,试验成功构建了pBi35SCR2真核表达载体,并成功将表达载体转入烟草。[结论]试验获得的转基因烟草可作为后期攻毒试验的材料,并为研究加工番茄抗黄瓜花叶病毒奠定了基础。     

加工番茄上CMV与BBWV的ELISA检测及相关性分析

[目的]探讨加工番茄上2种病毒的侵染方式及其积累量的相关性。[方法]以黄瓜花叶病毒（CMV）和蚕豆萎蔫病毒（BBWV）为研究对象,用针对CMV和BBWV的单克隆抗体对田间表现病毒病症状的115个加工番茄自然病株进行间接ELISA检测,通过复合侵染病株上2种病毒的积累量分析两者之间的相关性。[结果]CMV和BBWV在加工番茄上的侵染率分别为73．0％和59．1％,并且2种病毒常复合侵染,复合侵染率达53．9％。BBWV单独侵染率很低,其侵染方式主要是与CMV复合侵染。CMV和BBWV在病株上的带毒量分析结果表明,2种病毒在病株上的积累是相互影响的,为正相关关系。[结论]该研究为病毒互作机制研究提供了理论基础。     

市售马铃薯转基因成分检测

[目的]检测市售马铃薯转基因成分。[方法]采用CTAB法提取样品的基因组DNA,分别设计花椰菜花叶病毒35s启动子（pro-moter from canliflomer mosaic virus,CaMV 35s）和胭脂碱合成酶3’转录终止子（nopaline synthase lerminator,NOS）作为特异性引物,然后对基因组DNA进行PCR扩增检测,根据扩增后产物的琼脂糖凝胶电泳图可分析出其中是否含有转基因成分。[结果]10份马铃薯样品中5份检测出含有转基因成分,占检测样品的50%。[结论]由结果推断出市场上销售的转基因马铃薯占总马铃薯销售量的50%左右。     

番茄育苗期烟粉虱危害情况调查与病毒病传入风险评估

[目的]评价秋冬栽培番茄育苗期病毒病侵入的风险。[方法]对秋冬栽培番茄育苗期烟粉虱的危害情况进行了调查。[结果]自番茄出苗后烟粉虱即开始危害,且至移栽前番茄病毒传入的风险较高,近30%的番茄苗为带毒苗,移栽后也会成为烟粉虱的重要虫源和番茄病毒病的重要病源。[结论]常规育苗将导致烟粉虱的扩散及病毒病的严重发生,秋冬栽培的番茄育苗需采用隔离育苗的方法。     

羊传染性脓疱病毒B2L基因片段重组腺病毒载体的构建（摘要）（英文）

[目的]利用腺病毒载体系统构建羊传染性脓疱病毒B2L基因重组腺病毒载体。[方法]以从羊传染性脓疱病毒株JLSY04中提取的基因组DNA为模板,PCR扩增获得B2L目的基因片段;然后将B2L目的基因克隆至PD-NR-CMV载体,筛选阳性克隆获得质粒CTC572-6;再将质粒CTC572-6与腺病毒载体进行同源重组,筛选阳性克隆,并进行菌液PCR、酶切、测序等鉴定。[结果]经酶切和基因测序等鉴定,成功构建了携带羊传染性脓疱病毒B2L基因的重组腺病毒载体CTC572Ade-30。[结论]为羊传染性脓疱基因工程疫苗的进一步研究奠定基础。     

转基因番茄植株Mi1.2表达水平的Real Time PCR检测体系的建立

[目的]为转基因番茄植株的高通量筛选奠定基础。[方法]利用CTAB法提取番茄叶片总RNA进行Real Time PCR扩增,分析转Mi1.2基因的番茄植株表达水平的检测体系。[结果]提取RNA的A260/A280为1.78~1.88,RNA无明显降解。在严谨扩增条件下,引物SYBR2的扩增效率高于SYBR1。Mg2+的适宜浓度为2.0 mg/L。Real Time PCR扩增产物具有良好的特异性,熔解曲线特异峰出现在84.5℃附近,在熔解曲线略低于83℃附近有极微弱的非特异峰。因此在定量反应中信号检测步骤应放在84℃。以4种不同模板分子数条件下扩增曲线Ct值得到的回归方程为Y=-3.78×log(copynumber)+39.50,相关系数为0.998。[结论]该试验获得的Real Time PCR体系可用于转基因植株表达水平的检测。     

钾素对番茄青枯病抗性的影响及机理研究

[目的]探究钾素对番茄青枯病抗性的影响。[方法]通过水培试验研究4个不同浓度钾素对番茄生长和养分吸收的影响,并在接种青枯菌后,统计不同处理青枯病的发病情况,分析番茄叶片H_2O_2浓度、过氧化物酶(POD)和多酚氧化酶(PPO)活性变化。[结果]提高钾营养浓度能够减轻番茄青枯病发病情况,钾素能够促进番茄的生长及对钾的吸收利用,在接种青枯菌后,钾素还能促进番茄叶片H_2O_2的合成,并提高叶片POD和PPO活性。[结论]钾素营养能够降低番茄青枯病的发生,钾素营养通过促进番茄的生长、钾素的吸收及生理抗性酶活性进而增强了对番茄青枯病的抗性。     

芝麻黄花叶病毒病田间流行规律

[目的]明确芝麻黄花叶病毒病田间流行规律,为防治该病提供参考。[方法]于2014年调查芝麻黄花叶病毒病的田间发生、流行规律。[结果]芝麻黄花叶病毒病的发生、流行与芝麻的生育期和蚜虫发生密切相关。苗期、蕾期是感染芝麻黄花叶病毒病的敏感期。蚜虫发生高峰15 d后,病害出现发病高峰。[结论]调节芝麻播种期,使苗期、蕾期,特别是蕾期错过蚜虫发生高峰能有效预防芝麻黄花叶病毒病的发生。     

转病毒移动蛋白及复制酶基因烟草的协生和重组风险分析

 对转化番茄花叶病毒 (ToMV)、烟草花叶病毒 (TMV)移动蛋白 (MP)基因和黄瓜花叶病毒P1株系(CMV P1)部分复制酶基因的 3种转基因烟草 ,分别接种马铃薯X病毒 (PVX)、马铃薯Y病毒 (PVY)、CMVRB株系 (CMV RB)和TMV。症状观察和ELISA测定发现 ,各病毒在转基因烟草和非转基因烟草上的症状及病毒浓度没有显著差异 ,表明这些病毒在转基因烟草上没有协生作用发生。对转化ToMVMP基因和转化CMV P1部分复制酶基因的转基因烟草 ,分别接种TMV和CMV RB ,定期进行生物学、ELISA和免疫捕获反转录PCR(IC RT PCR)检测 ,在 16个月的连续测定中未发现病毒重组现象。