中草药添加剂对仔猪cAMP/cGMP及免疫功能的影响

 对试验猪的有关测定表明,中草药添加剂可明显提高仔猪血液cAMP的含量及cAMP/cGMP的比值,分别提高164.07％和55.79％. 和对照组比较,血液中免疫球蛋白（IgG）的含量升高58.7％.对白细胞数量及分类计数发现,试验组相关值远高于添加常规抗生素的仔猪,其中嗜酸性白细胞升高437.5％.     

AP液对家兔血浆环核苷酸（cAMP、cGMP）含量影响的研究

 用放射免疫分析法（RIA）测定健康家兔血浆cAMP、cGMP含量，观察AP液对环核苷酸的影响。实验结果表明，AP液能促使cAMP、cGMP水平都明显增高，两者与试验前相比，差异均极显著（P＜0.01）、且比值基本不变。鉴于环核苷酸可作为植物性神经功能的指标，因而本项研究为植物性神经高阈平衡论提供了分子生物学水平的论据。     

艾灸盒温灸对阳虚体质者症状及血清cAMP/cGMP比值的影响

目的 观察艾灸盒温灸疗法对阳虚体质者症状及血清环磷酸腺苷（cAMP）/环磷酸鸟苷（cGMP）比值的影响,探究阳虚体质与cAMP/cGMP比值的相关性。方法 将90例阳虚体质受试者随机分为灸盒组、参附液组、肾气丸组,每组30例,3组均以7 d为1个疗程,连用4个疗程。根据治疗后受试者阳虚质判定评分量表的得分情况评价疗效,同时观察治疗前后血清cAMP/cGMP比值变化情况。结果 治疗后,3组受试者阳虚体质转化分均较前显著下降（P<0.01）,灸盒组下降程度高于参附液组和肾气丸组（P<0.05）;3组受试者血清cAMP/cGMP比值均较前下降（P<0.05）,其中灸盒组下降幅度最高（P<0.05）;灸盒组总有效率为53.3%,参附液组总有效率为43.3%;,肾气丸组总有效率40.0%,3组整体疗效相当（P>0.05）。结论 艾灸盒温灸能显著改善阳虚体质,cAMP/cGMP与阳虚体质存在一定的相关性。     

猪中性粒细胞磷酸二酯酶基因表达及活性研究

 【目的】通过对猪中性粒细胞磷酸二酯酶（PDE）基因表达、活性及特异性抑制剂实验检测，研究其存在的主要PDE亚型及在体外的活性，为探讨PDE在中性粒细胞的分布、活性变化及对cAMP、cGMP调节与中性粒细胞功能关系提供依据。【方法】采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测PDE基因在猪中性粒细胞的表达，以高效液相色谱（HPLC）检测环核苷酸在PDE反应前后的含量变化，计算PDE活性。【结果】在检测的18个PDE亚型中，PDE1B、2A、3A、3B、4A、4B、4C、4D、5A、7A、7B、8A、8B、9A、11A 共15个PDE mRNA在猪中性粒细胞表达，特异性抑制剂实验表明PDE4、PDE5分别为水解cAMP、cGMP的主要PDE亚型；cAMP/cGMP-PDE在10～40 μl范围内，与其活性存在良好的线性关系（r＝0.9929/0.9992）。【结论】猪中性粒细胞至少存在15个PDE亚型，其中PDE4、PDE5为主要存在的2个亚型，PDE样品量在一定范围内与其活性存在良好的线性关系，可作为筛选PDE型中性粒细胞功能调节剂的方法。     

猪嗜中性粒细胞cAMP磷酸二酯酶的提取与活性检测

目的:提取动物体的cAMP磷酸二酯酶(PDE),并检测其活性,为兽医临床研究PDE活性的生理病理变化和中西药物对PDE活性调节作用建立实验方法。方法:猪血经过葡聚糖沉降,淋巴细胞分离液分离,特殊分离液洗涤和红细胞溶胀后,获得嗜中性白细胞。嗜中性白细胞破碎后释放PDE,通过反相高效液相色谱(RP HPLC)法测定反应体系中cAMP的含量,根据底物(cAMP)的减少量,确定嗜中性白细胞中PDE活性。结果:经显微镜计数嗜中性粒细胞纯度达95%;酶量在10～40μl间对cAMP的分解率为9 90%～31 39%,与PDE活性之间存在直线相关关系(r=0 99)。结论:猪嗜中性粒细胞中含有高纯度、高活性的cAMP PDE;高效液相色谱法可以准确测定PDE反应前后cAMP含量的变化;两种方法结合可以作为兽医临床研究机体PDE活性变化和中西药物对PDE活性调节作用的新方法。     

外源性cAMP和cGMP对黑白花奶牛泌乳性能的影响

对泌乳黑白花奶牛分别注射cAMP+cGMP组合剂、组合剂cGMP和自制环核苷酸组合剂(cAMP+cGMP).注射当月各组奶牛产奶量无差异;注射后1月,奶牛日平均产奶量比对照分别提高14.1%、23.6%和19.7%,差异达显着水平(P<0.05).对血液和乳生化指标测定结果表明,cGMP是提高黑白花奶牛产奶量的主要调节物;环核苷酸主要通过cGMP升高血糖、加快乳腺细胞乳的合成速度,从而使产奶量提高.     

ZD制剂对小鼠巨噬细胞促炎性介质的影响

目的:研究ZD制剂在体外的抗炎机制。方法:通过脂多糖(LPS)刺激RAW264.7细胞系建立炎症细胞模型,使用5种不同浓度的ZD制剂进行试验,分别采用Griess反应测定细胞上清液中NO水平,ELISA法检测ZD制剂干预前后细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6的浓度。结果:用ZD制剂干预后,上清液中NO、TNF-α、IL-1β、IL-6含量与模型组相比均有下降,并存在剂量依赖关系。结论:因此,中药复方汤剂ZD制剂的体外抗炎作用机理之一是抑制NO、TNF-α、IL-1β、IL-6等炎性介质的产生。     

牛蒡子与牛蒡子苷对小鼠骨骼肌cAMP及其磷酸二酯酶活性和生长性能的影响

 【目的】观察中药牛蒡子及其主要成分牛蒡子苷对小鼠骨骼肌cAMP磷酸二酯酶(cAMP PDE)活性和cAMP含量、血浆cAMP含量与生长性能的影响,探讨促进动物生长的作用及机理。【方法】断奶ICR小鼠分别灌服不同剂量的牛蒡子煎剂：1.00、0.50、0.25 g/只,牛蒡子苷溶液：1.50、0.75、0.38 mg/只和阳性对照茶碱溶液：0.75、0.38、0.19 mg/只。记录体重和采食量,采用HPLC和ELISA法分别测定骨骼肌组织cAMP PDE活性和血浆cAMP含量。【结果】1.00 g和0.50 g的牛蒡子煎剂和3个剂量的牛蒡子苷显著或极显著降低采食量;除0.38 mg的牛蒡子苷外,各剂量给药组都显著或极显著促进增重;各剂量的牛蒡子、牛蒡子苷和茶碱都极显著提高饲料转化率(P＜0.05,P＜0.01,或P＜0.001)。各剂量的牛蒡子、牛蒡子苷和茶碱都显著或极显著抑制cAMP PDE活性;除1.5 mg的牛蒡子苷外,都显著或极显著提高骨骼肌组织cAMP含量,除0.75 mg茶碱外,都显著或极显著提高血浆cAMP含量(P＜0.05,P＜0.01,或P＜0.001)。骨骼肌cAMP含量与cAMP PDE活性呈极显著负相关,r = -0.402(P＜0.001),血浆cAMP含量与骨骼肌cAMP含量呈极显著正相关性,r =0.553(P＜0.001),与cAMP PDE活性呈负相关,r =-0.436(P＞0.05)。【结论】牛蒡子和牛蒡子苷通过抑制骨骼肌cAMP PDE活性,提高骨骼肌和血浆cAMP水平,提高动物生长性能。     

囊素对杂交瘤细胞内第二信使物质的影响

以分泌抗人IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞为对象,通过免疫试验测定了囊素对其第二信使物质的影响.结果表明,囊素处理对杂交瘤细胞内cAMP浓度的影响不明显(P>0.05),而对cGMP浓度的影响与囊素作用的时间和剂量有关.分别用50μg/mL和500μg/mL囊素处理5 min后,两组细胞cGMP浓度均显著下降(P<0.05),导致cAMP/cGMP值明显上升(P<0.05),10 min后,前者的cGMP浓度不再变化,而后者的cGMP浓度继续下降.提示囊素可能以cGMP浓度或cAMP/cGMP值的变化为介导而起作用.     

中草药和芦荟多糖对肉鸡cAMP/cGMP与免疫功能的影响

研究了内仔鸡日粮中添加中草药添加剂和芦荟多糖对环核苷酸含量与免疫功能的影响.结果表明,中草药添加荆和芦荟多糖均能显著(P＜0.05)增加内鸡体重和肝脏重量,提高血浆和肝脏的cAMP和cGMP水平,以及血浆和肝脏的cAMP/cGMP比值.中草药添加剂加芦荟多糖提高了肉仔鸡对新城疫疫苗(NDV)的抗体水平,二免后,中草药添加荆加芦荟多糖既显著提高了内仔鸡对新城疫疫苗(NDV)的抗体水平(P＜0.05),同时还增强了肉仔鸡对NDV的免疫应答.表明中草药添加剂和芦荟多糖能提高内仔鸡的体液免疫功能,日粮中添加中草药添加荆加芦荟多糖比单独使用中草药添加剂或者芦荟多糖的效果要好,充分体现了不同的化学成分形成的协同免疫效应.     

犬中枢神经不同部位磷酸二酯酶基因表达和活性测定

为探明磷酸二酯酶(phosphodiesterase,PDE)在犬中枢神经活动中的作用,采用反转录聚合酶链反应检测18个PDE亚型在犬中枢神经不同部位中(大脑、小脑、延髓和脊髓各段)的表达分布,以高效液相色谱法检测环核苷酸在酶反应前后的含量变化,计算PDE活性。结果显示:在所测18个PDE亚型中,犬中枢神经的8个测定部位均有PDE1A,PDE1B,PDE1C,PDE2A,PDE3A,PDE3B,PDE4A,PDE4B,PDE4C,PDE4D,PDE5A,PDE7A,PDE7B,PDE8A,PDE8B,PDE9A,PDE11A表达,PDE10A均呈阴性表达,不同部位之间表达量差异较大,其中PDE4在各部位均呈优势表达;8个测定部位cAMP-PDE活性均高于cGMP-PDE活性,且不同部位PDE活性存在差异,其中脑组织cAMP-PDE活性和cGMP-PDE活性均高于脊髓各段。结果提示PDE可能在由cAMP和cGMP介导的中枢神经经信号传导中发挥着重要作用。     

PDE5抑制剂Sildenafil对小鼠卵母细胞自发成熟的影响

采用体外培养方法和放射免疫分析法(RIA)研究磷酸二酯酶5(PDE5)抑制剂Sildenafil(西地那非)对小鼠卵母细胞体外自发成熟的作用。结果显示:该抑制剂显著抑制(P<0.05)小鼠卵母细胞的自发成熟,且其抑制作用是可逆的。放射免疫分析实验表明,Sildenafil对卵丘细胞(CCs)和裸卵母细胞(DOs)内环鸟苷一磷酸(cGMP)水平没有显著的升高作用,却能够显著提高CCs和DOs内环腺苷一磷酸(cAMP)的水平。以上结果提示,cGMP和cAMP信号通路之间的互作可能参与了PDE5调控的小鼠卵母细胞自发成熟过程。     

牛蒡子苷对小鼠原代骨骼肌细胞磷酸二酯酶活性及细胞生长的影响

 【目的】以茶碱为参照,观察中药成分牛蒡子苷对原代骨骼肌细胞磷酸二酯酶（Phosphodiesterase,PDE）活性及蛋白质合成的影响,探讨中药通过抑制PDE促进肌肉生长的作用及机理。【方法】分离1～3日龄ICR小鼠四肢肌肉用于骨骼肌原代细胞培养,在培养至第5～6天时向培养基中添加不同浓度的牛蒡子苷和茶碱,以不含牛蒡子苷和茶碱的培养基为阴性对照,继续培养24 h,采用HPLC、ELISA以及考马斯亮蓝法分别测定骨骼肌细胞cAMP PDE的活性、细胞内cAMP水平以及细胞总蛋白质合成。【结果】牛蒡子苷终浓度达到2.5 μg•ml-1、茶碱终浓度为20 μg•ml-1时均能极显著抑制原代培养骨骼肌细胞cAMP PDE的活性(P＜0.01）,显著提高细胞内cAMP水平（P＜0.05）,极显著促进肌细胞总蛋白质的合成（P＜0.01）。【结论】中药成分牛蒡子苷具有通过调节骨骼肌细胞内PDE的活性和cAMP水平,增加肌细胞蛋白质合成,促进骨骼肌细胞生长的作用。结果提示对PDE有抑制作用的中药有望成为促进动物生长的新型饲料添加剂。     

外用ZD制剂对急性软组织损伤模型小鼠血清IL-8和IL-10含量的影响

为了评估ZD制剂对急性软组织损伤的疗效,检测ZD制剂对急性软组织损伤模型小鼠体内相关炎性因子的动态变化。将144只昆明种小鼠随机分为空白组,模型组,阳性药物组,ZD高、中、低剂量组,采用重物砸伤法制作急性软组织损伤模型,测定造模后第1 d,3 d,5 d,7 d,9 d,11 d,13 d和15 d血清中白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-10(IL-10)含量的变化。结果表明:连续用药7d后阳性药物组和ZD高剂量组血清中IL-8的含量与空白组比较差异不显著(P0.05),与模型组比较差异显著(P0.05);连续用药11d后ZD制剂中、低剂量组与空白组比较差异不显著(P0.05),与模型组比较差异显著(P0.05)。连续用药9d后阳性药物组和ZD高剂量组血清中IL-10与空白组比较差异不显著(P0.05),与模型组比较差异显著(P0.05),连续用药13d后,ZD制剂中、低剂量组血清中IL-10与空白组比较差异不显著(P0.05),与模型中比较差异显著(P0.05)。以上结果表明ZD制剂高剂量组与阳性药物组疗效相当,且优于ZD中、低剂量,能显著降低血清中IL-8和IL-10的含量,抵抗炎症反应,是一种抗炎作用明显的外用中药软膏。     

黄芪多糖及黄芪甲苷干预对脂多糖诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎症的作用

【目的】考察黄芪提取物黄芪甲苷(Astragalus Ⅳ,AS-Ⅳ)及黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)干预对脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)诱导奶牛乳腺上皮细胞(Bovine mammary epithelial cells,BMECs)炎症的作用及对炎症细胞中β–酪蛋白表达的影响。【方法】使用APS、AS-Ⅳ干预LPS诱导的BMECs，检测细胞炎症因子、氧化因子、凋亡因子、β–酪蛋白的变化。【结果】CCK-8筛选发现，1 g/L APS及50、75、100 mg/L AS-Ⅳ为刺激BMECs的最适质量浓度，0.5 mg/L LPS刺激BMECs 24 h后成功建立炎症细胞模型。AS-Ⅳ、APS可显著抑制炎症细胞中乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)的表达，缓解炎症状态下细胞膜的持续损伤；显著抑制炎症细胞中丙二醛(Malondialdehyde,MDA)和活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的表达，缓解细胞的氧化损伤；显著抑制炎症细胞中IL-6、IL-8和TNF-α炎...     

外源CNT对哈白兔体内CNT和GH及瘦素动态变化的影响

【目的】研究外源性环核苷酸(CNT)对动物血浆中内源环鸟苷酸(cGMP)和环腺苷酸(cAMP)、生长激素(GH)及瘦素动态变化规律的调控作用。【方法】以哈白兔为试验动物,设置对照组(注射生理盐水)、cGMP组、cAMP组和cGMP+cAMP组,后3个处理组分别外源注射cGMP、cAMP及其等量混合物的腹腔注射液,在注射后1,3,6,10,15,21,28,36,45,55,65,75,85,95h采集血样,分别运用放射免疫法测定动物内源cGMP、cAMP、瘦素及GH的含量。【结果】单独注射cGMP可以显著提高内源性cGMP的水平,而且在注射后45h以内效果最佳;单独注射cAMP可以显著提高内源性cAMP的水平,而且在4d或者更长时间会持续有效;无论单独注射cAMP或cGMP,还是混合注射cAMP+cGMP,内源性cAMP总有优于内源性cGMP 6%的优势。此外,cGMP对血浆瘦素水平有较小的正调控作用,cAMP对血浆瘦素水平有负调控作用,cGMP+cAMP对血浆瘦素的调控作用介于以上两者之间,而且cAMP的作用相对较为明显;注射cAMP后的55h以内,瘦素质量浓度明显降低,以后趋于正常;cGMP、cAMP及cGMP+cAMP对血浆GH质量浓度均有显著的正向调控作用,而且以cGMP的优势更为明显。【结论】探讨了外源CNT作用下内源cGMP、cAMP、瘦素及GH的动态变化规律,为通过外源CNT来调节动物体生理水平提供了理论依据。     

Wistar大鼠GTH细胞的cAMP对FSHβ mRNA表达的影响

[目的]从分子水平阐述大鼠FSHβmRNA表达的GnRH受体后信号转导机制。[方法]采用细胞体外培养技术结合实时荧光定量PCR技术,检测大鼠GTH细胞中cAMP改变对FSHβmRNA表达的影响。[结果]cAMP含量对大鼠GTH细胞表达的FSHβmRNA的Ct值的影响不显著。FSK和SQ22536能有效改变GTH细胞的cAMP含量,却不能改变PKC活性。FSHβ的表达是受GnRH调控的。[结论]cAMP不是FSHβmRNA表达的GnRH受体后的信号转导途径。     

蟾酥醇提取物的体外抗炎作用研究

为了考察蟾酥醇提取物的体外抗炎作用,用LPS诱导RAW 264.7细胞和小鼠腹腔巨噬细胞建立细胞炎症模型,采用Griess法测定蟾酥醇提取物对细胞上清液中的NO水平,ELISA法测定TNF-α、ILlβ、IL-6含量,荧光法测定细胞内ROS水平。结果显示,蟾酥醇提取物对LPS诱导的RAW264.7细胞和小鼠腹腔巨噬细胞所分泌的炎症因子(NO、TNF-α、IL-1β、IL-6)有明显的抑制作用,与空白对照组相比明显降低,同时蟾酥醇提取物极显著降低LPS诱导的细胞内ROS水平(P0.01)。由此推测,蟾酥醇提取物通过抑制炎症因子、降低细胞内活性氧水平减轻细胞的炎症反应,具有良好的抗炎作用。     

千里光石油醚提取物对LPS激活的炎症反应的抑制效应

以千里光石油醚提取物（PEESS）为材料，以脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7小鼠单核巨噬细胞为炎症模型，通过CCK-8法检测细胞增殖、Griess法检测一氧化氮（NO）含量、RT-PCR法检测炎症相关因子的表达，及Western blot法检测炎症关键转录激活因子的活化，研究PEESS的抗炎作用及可能的分子机制。结果显示，0~80 μg/mL的PEESS对巨噬细胞增殖无明显影响，但能显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的分泌，并呈浓度依赖性；炎症相关因子基因mRNA表达检测结果显示：PEESS能显著抑制LPS刺激的RAW264.7 细胞炎症模型中IL-1β及IL-6的表达；同时，PEESS还显著降低了NF-κB p65及 p44/p22 MAPK蛋白的磷酸化水平。以上结果表明，千里光石油醚提取物对LPS 诱导的RAW264.7 细胞炎症模型具有较好的抗炎效应，其作用发挥可能与其抑制NF-κB和MAPK信号通路的活化以及NO、IL-1β和IL-6等炎症介质的分泌有关。     

枣和酸枣等14种园艺植物cAMP含量的研究

本试验借助蛋白结合法对14种园艺植物、44个枣品种、59个酸枣品种和类型的cAMP含量进行了测定。结果表明,不同植物种、品种或类型、同一植物不同组织及同一组织不同时期的cAMP含量存在很大差异;同一植物不同组织cAMP的相对含量因物候期而异;在所测植物材料中,枣和酸枣成熟果肉的cAMP含量最高(平均值分别为38.05和23.87nmol/g·fw),其中山西木枣成熟果肉cAMP含量(302.50nmol/g·fw)是迄今己测高等植物中最高的。