黑曲霉酸性β-甘露聚糖酶的纯化及部分性质研究

黑曲霉(Aspergillus niger)WM20-11固态发酵成熟曲,经磷酸缓冲液浸提、硫酸铵分步盐析、DEAE-Sepharose fast flow阴离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤层析等分离纯化手段,最终获得了Native-PAGE、SDS-PAGE纯的酸性β-甘露聚糖酶组分,其纯化倍数为25.08,收率为5.1%。Sephadex G-100凝胶过滤层析和SDS-PAGE测得纯酶的相对分子质量分别为39 kD和40 kD,表明该酶以单体形式存在;IEF-PAGE测得该酶的等电点为4.0;含糖量测定为19.6%;酶蛋白氨基酸组成中(Asp+Glu)/(Lys+Arg)为3.74。     

乌梅等20种中药对胸膜肺炎放线杆菌的体外抗菌活性研究

【目的】观察乌梅Fructus mume等20种中药的体外抗胸膜肺炎放线杆菌Actinobacillus pleuropneumoniae活性.【方法】通过乙醇回流、水煎煮和超声波等方法对20种中药进行提取,采用二倍稀释法测定其对胸膜肺炎放线杆菌的体外抗菌活性;并研究抗菌活性较强的几味中药的体外联合抑菌活性.【结果和结论】乌梅、黄连Rhizoma coptidis、诃子Terminalia chebula、秦皮Cortex fraxini、地榆Sanguisorbae officinalis、虎杖Polygonum cuspidatum 6种中药提取物对胸膜肺炎放线杆菌的最小抑菌浓度(Minimal inhibitory concentration,MIC)范围是6.25~50.00 mg/mL;大青叶Isatis indigotica、茵陈Artemisia capillaris、甘草Glycyrrhiza uralensis和白鲜皮Dictamnus dasycarpus 4种中药提取物的MIC范围是50.00~100.00 mg/mL;黄柏Phellodendron amurense、杜仲Eucommia ulmoides、金银花Lonicera japonica、柴胡Bupleurum chinense、蒲公英Taraxacum mongolicum、板蓝根Baphicacanthus cusia、栀子Gardenia jasminoides和黄芪Astragalus membranaceus等10种中药提取物的MIC100.00 mg/mL.联合抑菌试验结果表明,乌梅、黄连、诃子和虎杖两两联合抑菌指数(FICI)≤1,乌梅、虎杖分别与秦皮的FICI2.乌梅、黄连、诃子、虎杖、秦皮、地榆对胸膜肺炎放线杆菌均具有较好的体外抗菌活性;乌梅、黄连、诃子和虎杖两两联合为相加、协同作用;秦皮分别与乌梅、虎杖为拮抗作用.     

猪传染性胸膜肺炎病原的分离鉴定及防治

胸膜肺炎放线杆菌是猪传染性胸膜肺炎的致病菌,该病是一种呼吸道疾病,影响着全球养猪业的发展.本研究采用多种培养基进行接种培养,从某猪场典型传染性胸膜肺炎症状猪的肺脏和扁桃体中分离到了革兰氏阴性杆菌.通过该病原菌的培养特性、生物学特性和生化鉴定结果显示,该细菌为猪胸膜肺炎放线杆菌.同时本研究也为今后对该病的预防控制与诊断治疗奠定了有效的基础.     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定

从江西省猪场病死猪肺脏中分离到三株胸膜肺炎放线杆菌。本试验对分离菌株的理化特性进行了测定，并用分离菌株制备了灭活疫苗，有效控制了菌株分离场的猪传染性接触性胸膜肺炎。     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌变异株的分离与鉴定

对江苏泰兴某猪场疑似猪传染性胸膜肺炎病料进行实验室分离培养,成功分离到1株猪传染性胸膜肺炎放线杆菌,并对其进行生化特性、双抗夹心ELISA鉴定。为进一步分析该分离株的血清型,针对ApxIVA和ApfA保守基因设计2对检测引物,PCR结果表明:该分离株未扩增出预期大小的片段,说明该分离株很有可能是1株猪传染性胸膜肺炎放线杆菌变异株,其血清型还有待进一步鉴定。     

猪胸膜肺炎放线杆菌毒素ApxⅠ对小鼠的致病性及免疫原性研究

将血清10型胸膜肺炎放线杆菌接种于含0.02%NAD、5%犊牛血清、1mMcaCl<,2>的LB液体培养基中培养12h,离心后的上清液经硫酸铵盐析、葡聚糖凝胶分子筛层析,分离纯化Apx Ⅰ.将纯化的ApxⅠ进行半数致死量测定,并对小鼠剖检后进行内脏器官病理变化观察.将纯化的Apx Ⅰ与弗氏佐剂按1:1的比例混合制备亚单位疫苗,免疫小鼠,初免2周后加强免疫1次,二免2周后用血清10型胸膜肺炎放线杆菌攻毒,测定最佳免疫剂量.根据最佳免疫剂量于30日龄和45日龄免疫小鼠,60日龄时分别用血清1、3、5、7型胸膜肺炎放线杆菌攻毒.结果该毒素对小鼠的LD50为80.9mg/kg,LD50的95%平均可信限为63.2～103.5mg/kg;Apx Ⅰ亚单位疫苗的最佳免疫剂量为40μg,对血清1、3、5、7型胸膜肺炎放线杆菌的攻击具有一定的免疫保护效果.     

猪胸膜肺炎放线杆菌结构蛋白基因ApxIVA特异性片段的表达和纯化

以猪胸膜肺炎放线杆菌的血清8型分离株Hpn-405株基因组DNA为模板,PCR方法扩增ApxIVA特异性片段,PCR产物经纯化后与载体pMD18-T进行连接、转化,经酶切及序列分析鉴定后,亚克隆到原核表达载体pET-28a中,构建成重组表达质粒pET-ApxIVA3,转入到大肠埃希氏菌BL21(DE3)中,以IPTG进行诱导重组蛋白的表达,SDS-PAGE检测结果显示,表达的融合蛋白分子质量约为18 ku,与预期片段大小相符;将经过超声破碎的菌液离心取沉淀经尿素洗涤溶解后用镍金属螯合层析柱进行纯化。Western-blot分析证实,该融合蛋白具有免疫学活性。     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定与药敏试验

从苏北地区某疑似猪传染性胸膜肺炎发病猪采集病料,经细菌分离培养得到3株分离株,分别命名为YC01、YC02、YC03。经形态学检查、CAMP试验、卫星生长现象、尿素酶试验鉴定,3株分离菌均为猪传染性胸膜肺炎放线杆菌。药敏试验显示,3株分离菌对头孢噻肟、氟苯尼考及由板蓝根、麻黄、连翘等组成的中药复方高度敏感。采用高敏药物对某感染猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的商品猪场进行治疗,结果表明,板蓝根、麻黄、连翘等组成的中药复方水提物口服与头孢噻肟肌肉注射联用对控制猪传染性胸膜肺炎死亡有较好效果。     

间接ELISA检测胸膜肺炎放线杆菌血清1型抗体的研究

进行了胸膜肺炎放线杆菌血清1型荚膜多糖的提取制备实验,并以该抗原作为诊断抗原建立了检测胸膜肺炎放线杆菌血清1型抗体的间接ELISA方法。此抗原与猪巴氏杆菌病、猪布氏杆菌病、仔猪副伤寒等阳性血清无交叉反应;与胸膜肺炎放线杆菌血清2型、3型、4型、6型、7型、8型、9型、10型标准阳性血清也无交叉反应。可用于猪群感染血清1型胸膜肺炎放线杆菌的诊断和监测。     

马铃薯多酚氧化酶的分离纯化及酶学特性研究

为控制马铃薯在贮藏和加工过程发生的酶促褐变,对马铃薯多酚氧化酶进行分离纯化,并研究其酶学特性。采用缓冲液提取、低温离心得到马铃薯多酚氧化酶(PPO)粗酶液,粗酶液经硫酸铵分级盐析、Sephadex G-25分子凝胶柱层析脱盐处理、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换柱层析和Sephadex G-75分子筛凝胶过滤层析分离纯化得到马铃薯PPO,进一步对其部分酶学特性进行研究。结果显示：纯化后的马铃薯PPO其比活力为283.0 U·mg^-1,回收率为16.8%,纯化倍数为18.6倍;该酶最适反应温度为30℃,最适反应pH为6.5;以邻苯二酚为底物时,最适底物浓度为50 mmol·L^-1。该酶对焦性没食子酸、间苯二酚的底物亲和性较强,对4-甲基儿茶酚、咖啡酸、没食子酸、对苯二酚、邻苯二酚、绿原酸的底物亲和性较低,对N-BOC-酪胺、愈创木酚亲和性很低。     

脲酶抑制剂在畜牧生产中应用的研究进展

本文综述了畜牧生产领域的脲酶抑制剂研究成果。这些内容包括 :脲酶抑制剂的种类、作用机理及在畜牧生产上使用效果。     

温度和底物对陕西土壤脲酶活性的影响

在不同温度和底物浓度条件下,对陕西７种土壤１９个土样脲酶的活性进行了测定。结果显示,在一定温度和底物浓度范围内,随温度和底物浓度增加,脲酶活性升高,在不同温度和浓度区段,影响幅度有明显差异,除水稻土外,其余高肥力土样脲酶活性受其影响较大;在同一生态区中,脲酶活性与理化性质呈极显著正相关,土壤脲酶活性可作为土壤肥力水平高低的重要指标之一;土壤脲酶作用的最适温度为６０℃．     

4-取代基苯胺棉酚席夫碱的合成及脲酶抑制作用研究

使用脲酶抑制剂能够降低脲酶的活性,减缓尿素的水解,是提高尿素利用率的有效途径。以天然产物棉酚为原料,通过N-取代基苯胺对其进行化学改性制备高效脲酶抑制剂苯胺棉酚席夫碱(Gos-H),氨基苯甲酸棉酚席夫碱(Gos-COOH)和氨基苯磺酸棉酚席夫碱(Gos-SO3H),并探究其抑制土壤氨挥发的效果。结果表明,棉酚及其衍生物均有较强的脲酶抑制活性。其对刀豆脲酶的抑制IC50值分别如下:Gos,2.61×10-5 mol·L-1;Gos-H,9.93×10-5 mol·L-1;Gos-COOH,1.49×10-4 mol·L-1和Gos-SO3H,1.85×10-4 mol·L-1。抑制土壤氨挥发的IC50值分别为:Gos,5.74×10-5 mol·L-1;Gos-H,3.47×10-5 mol·L-1;Gos-COOH,2.27×10-5 mol·L-1和Gos-SO3H,1.75×10-5 mol·L-1。总体来说,改性引入的含O基团能够增加棉酚席夫碱的抑制能力。     

农用化学物质对土壤脲酶活性的影响

通过对呋喃丹、铁灭克、天王星3种农药对土壤脲酶活性的抑制性进行试验 ,分析了不同农药用量、培养时间、尿素用量及外加不同 pH值缓冲溶液的情况下对脲酶活性的影响。结果表明 ,3种农药在不同情况下对脲酶活性均有不同程度的抑制作用 ,也证明了在本地区特有的农业环境条件下 ,农用化学物质可能会影响和破坏农业生态环境     

反刍动物瘤胃脲酶抑制剂的作用及应用

反刍动物能够利用饲料中的非蛋白氮 (NPN )作为氮源 ,尿素是反刍动物重要的 NPN。在瘤胃脲酶的作用下 ,进入瘤胃的尿素快速分解 ,氨释放速度是瘤胃微生物利用速度的 4倍。瘤胃脲酶抑制剂的应用 ,减缓了尿素在瘤胃内的分解。土壤脲酶抑制剂种类很多 ,但能够用做反刍动物瘤胃脲酶抑制剂的并不多 ,文章总结了几种研究较多的瘤胃脲酶抑制剂的作用及其应用。     

化学农药对土壤脲酶的影响

通过对拟除虫草酯类、有机磷类、有机氯类、氨基甲酸酯类、酰胺类几种农药对土壤脲酶活性的影响进行了试验，分析了不同农药用量，不同尿素用量影响下对脲酶活性的作用。试验结果表明，九种农茏在不同情况下对脲酶活性均有不同程度的影响作用，也证明了本地区特有的农业环境条件下，化学农药可能会影响和破坏农业生态环境。     

产酸性尿酶Y2002菌株的分离与鉴定

从嘉兴豆制品厂排水沟污泥中分离到 1株产酸性脲酶的菌株 ,命名为 Y2 0 0 2 ,该菌株细胞杆形 ,大小为 0 .41μm×1 .70 μm,无鞭毛、无芽孢、G-。生长最适 p H6.8～ 7.2 ,范围为 4.0～ 8.5 ;最适温度为 3 7℃ ,可生长范围为 1 5～ 42℃ ,在p H4.0～ 5 .5发酵液中产酶稳定 ,酶活可达 0 .2 68U。根据其生理生化特性 ,鉴定为肠杆菌科克雷伯氏菌属肺炎克雷伯氏菌。     

氢醌对水稻土脲酶活性抑制效果的研究

在田间盆栽条件下研究氢醌对脲酶活性的抑制效果.结果表明:不同时间测定结果表现出一定规律性,并能使氮肥的释放与水稻需肥规律相一致,可减少施肥次数,降低生产成本.     

八达岭地区主要森林类型土壤脲酶活性研究

通过对八达岭地区9种森林类型土壤脲酶活性及理化性质的研究,结果表明:土壤脲酶活性有从表层到底层垂直递减规律,其含量受到树种的影响;有机质、全氮和碱解氮是影响脲酶活性的主要因素;由主成分分析得出的第一主成分可综合反映土壤保肥供肥的信息,方差贡献率达44.86%;由此可见土壤脲酶活性是评价森林土壤肥力的一项重要的生物活性指标。     

土壤粘粒吸附脲酶特征的研究

研究了 8种土壤粘粒对脲酶的吸附情况 ,结果显示 ,土壤粘粒对脲酶吸附 12 0 min可达平衡。土壤粘粒对脲酶的吸附等温线为 L型 ,可用双表面 L angm uir方程较好描述。初步认为土壤粘粒对脲酶吸附为化学吸附和物理吸附 ,且以化学吸附为主