猪Delta冠状病毒的流行病学调查及M基因序列分析

为了解猪Delta冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)在发生腹泻疫情猪群中的感染情况,根据PDCoV M基因的保守序列设计了一对检测引物,建立了猪Delta冠状病毒的的检测方法,其最低核酸检测限量为3.92×10~3 copies/μL,特异性和灵敏度均较好。利用该方法对2015—2017年上海周边猪场的518份猪腹泻粪便样品进行检测,检测出25份PDCoV阳性样品,阳性感染率达4.8%。在所检出的阳性样本中,PDCoV与猪嵴病毒(Porcine kobuvirus,PKV)和猪星状病毒(Porcine astrovirus,PAstV)的混合感染率较高,分别为40%和48%;PDCoV与猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)混合感染率为8.0%,未检测到PDCoV与猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TEGV)混合感染的样本。随机选取10份PDCoV阳性样本,对扩增的M基因片段同源性进行分析,结果发现,10份样品中核苷酸同源性达95.0%—99.6%,与GenBank登录的PDCoV毒株的同源性为96.1%—100%,说明目前流行的PDCoV毒株的遗传差异不大,该研究可为了解PDCoV流行情况提供参考依据。     

猪感染牛病毒性腹泻病毒研究进展

牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)和猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、绵羊边界病毒(Border disease virus,BDV)同属于黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus)[1],而且在血清学上具有一定的交叉反应,它们所引起的传染性疾病给各国养牛、养猪和养羊业造成了严重的危害。牛病毒性腹泻病(BVD)呈世界性流行,给各国养殖业造成了严重的经济损失[2]。但直到2012年,世界动物卫生组织(Office International Des     

牛疱疹病毒I型gB基因的原核表达

根据GenBank中BHV-1 Colorado 1毒株的全基因组序列,针对gB基因的主要B细胞免疫区域设计一对引物。提取BHV-1 Colorado 1毒株的基因组DNA,PCR扩增大小为585 bp的gB片段,将其克隆至pET-22b（+）原核表达载体并测序分析,同时用Nde I和Not I酶切鉴定。SDS-PAGE和Western blot试验结果证明,获得的可溶性gB重组蛋白能与牛传染性鼻气管炎病毒标准阳性WEI血清发生特异性反应,为ELISA等免疫诊断方法的建立奠定了物质基础。     

肠炎沙门菌Ⅰ型菌毛主要亚单位FimA原核表达及纯化

为探讨肠炎沙门菌非编码小RNA(non-coding small RNA)IsrE在转录后水平是否参与对fimA的调控作用,在大肠杆菌中构建并表达FimA重组蛋白,并对其培养条件进行优化,制备高纯度FimA重组蛋白。利用原核表达载体p ET-28a(+)构建出能表达fimA的重组质粒,并分别对IPTG浓度、诱导温度和诱导时间等条件进行优化,以提高目的蛋白的产量和增大其可溶性,最后经Ni-NTA亲和层析分离纯化FimA重组蛋白。通过酶切、测序和Western blot鉴定分析,成功构建并表达肠炎沙门菌I型菌毛主要亚单位FimA,蛋白分子质量约为19.3 kDa,且主要以包涵体的形式表达,经Ni-NTA亲和层析纯化后的重组蛋白在SDS-PAGE中显示单一条带。本研究构建、表达并获得纯度较高的重组蛋白FimA,为进一步研究和验证肠炎沙门菌非编码sRNA IsrE是否在转录后水平参与对fimA的调控奠定了基础。     

不同动物源大肠杆菌gapA看家基因的克隆及序列比较

3-磷酸甘油醛脱氢酶(Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase,GAPDH/G3PDH)是糖酵解反应的关键酶,为生命体的各种生命活动提供能量.在大肠杆菌中,GAPDH由看家基因gapA编码.本研究对不同动物源的大肠杆菌菌株(包括禽源致病性大肠杆菌(APEC)分离株O1和CE129、人源肠致病性大肠杆菌(EPEC)菌株738、人源益生菌Nissle1917和猪源表达F18菌毛大肠杆菌标准株F107/86的gapA基因进行PCR扩增、克隆测序,并与GenBank中8株菌株序列比较,发现其核酸序列虽有少数位点的突变,但是氨基酸序列仍保持完全一致,从分子基础上保证了GAPDH的酶活性.本研究验证了原核病原微生物,尤其是大肠杆菌gapA基因转录翻译的GAPDH蛋白的高度保守性,为制备大肠杆菌专用内参蛋白抗体提供可能,并进一步为对致病性大肠杆菌的蛋白代谢通路和合成生物学研究提供了基础材料.     

淀山湖野生鱼类群落多样性与生长特性研究

通过拖网调查数据对淀山湖主要野生鱼类的种群数量、密度、多样性以及生长特性进行了研究.调查期间共捕获了15种野生鱼类,主要优势鱼类为刀鲚、细鳞斜颌鲴、太湖新银鱼、间下鱵、斑条鱊和鲹条.野生鱼类平均密度是0.83 ind/m<'2>,4.64g/m<'2>.淀山湖野生鱼类群落多样性较低,以个体数为单位计算的Shannon-wiener多样性指数H'为0.669,Simpson优势度指数λ为0.738,Pielou种类均匀度指数J'为0.247.主要优势鱼类的生长个体都比较小,细鳞斜颌鲴、太湖新银鱼和碜呈等速生长,刀鲚和斑条鱊旱异速生长.需要采取措施对鱼类群落结构进行调控,加强对淀山湖野生鱼类资源的保护.     

对黔南州刺梨产业发展的几点思考

近年来,贵州省黔南州加大刺梨产业培育,计划用几年时间打造成为贵州省乃至全国最大的刺梨产业区,占领主要消费市场,促进地方经济发展。就刺梨产业发展,谈了几点建议。     

α-氧化铝–细菌二元复合胶体对锑的吸附研究

锑(Sb)在土壤胶体微界面的吸附解吸深刻影响其迁移、转化和归趋。土壤矿物、有机物、微生物等胶体组分多结合在一起,形成复杂的矿物–有机复合体。目前,锑在单一土壤组分上的吸附研究颇多,但较少有学者关注锑在土壤矿物–有机复合胶体界面的吸附过程和机制。通过宏观吸附以及光谱学技术探究锑在典型铝氧化物–细菌复合胶体上的吸附行为,结果表明:α-Al_2O_3纳米级颗粒覆盖在蜡状芽孢杆菌表面,形成一层不完整的"矿物膜"。朗格缪尔(Langmuir)模型可以很好地拟合Sb(Ⅴ,Ⅲ)的等温吸附数据(R~20.98);α-Al_2O_3对Sb的吸附量远大于细菌;Sb在Al_2O_3–细菌复合胶体上的吸附不符合"组分相加"原则,存在显著的促进效应。扫描电镜-能谱分析显示Sb主要结合在复合胶体的矿物组分上。X-射线光电子能谱结果表明铝羟基、羧基和氨基参与了Sb的吸附,且细菌会抑制Sb(Ⅲ)在α-Al_2O_3表面的氧化。本研究证实,细菌不仅影响锑在矿物界面的吸附量,还影响其氧化还原反应,因此,在预测锑在土壤中的形态转化、迁移和归趋时必须考虑矿物–微生物相互作用。