| 肠炎沙门菌Ⅰ型菌毛主要亚单位FimA原核表达及纯化 |
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| 引用本文： | 王勇祥,孟霞,段进坤,周明旭,陶洁,杨溢,朱国强.肠炎沙门菌Ⅰ型菌毛主要亚单位FimA原核表达及纯化[J].中国动物传染病学报,2014(6):18-24. |
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| 作者姓名： | 王勇祥 孟霞 段进坤 周明旭 陶洁 杨溢 朱国强 |
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| 作者单位： | 扬州大学兽医学院;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31101826,31270171,31101833);国家科技支撑计划(2012BAK17B10);教育部创新团队(IRT0978);江苏高校优势学科建设工程资助项目(PAPD);江苏省自然科学基金(BK2012265,BK2011430);扬州市农业科技攻关计划项目(YZ2011066) |
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| 摘 要： | 为探讨肠炎沙门菌非编码小RNA(non-coding small RNA)IsrE在转录后水平是否参与对fimA的调控作用,在大肠杆菌中构建并表达FimA重组蛋白,并对其培养条件进行优化,制备高纯度FimA重组蛋白。利用原核表达载体p ET-28a(+)构建出能表达fimA的重组质粒,并分别对IPTG浓度、诱导温度和诱导时间等条件进行优化,以提高目的蛋白的产量和增大其可溶性,最后经Ni-NTA亲和层析分离纯化FimA重组蛋白。通过酶切、测序和Western blot鉴定分析,成功构建并表达肠炎沙门菌I型菌毛主要亚单位FimA,蛋白分子质量约为19.3 kDa,且主要以包涵体的形式表达,经Ni-NTA亲和层析纯化后的重组蛋白在SDS-PAGE中显示单一条带。本研究构建、表达并获得纯度较高的重组蛋白FimA,为进一步研究和验证肠炎沙门菌非编码sRNA IsrE是否在转录后水平参与对fimA的调控奠定了基础。
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| 关 键 词： | 肠炎沙门菌 非编码sRNA IsrE FimA 原核表达 |
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