枯草芽孢杆菌对三疣梭子蟹免疫指标、生长性能及养殖水质的影响

[目的]探讨枯草芽孢杆菌对三疣梭子蟹饲养效果的影响,为开展三疣梭子蟹高效健康养殖和促进益生菌在蟹类养殖领域的推广应用提供参考依据.[方法]以三疣梭子蟹为研究对象,分别设试验组(EG,添加2×1010 CFU/g枯草芽孢杆菌)和对照组(CK,不添加任何益生菌),试验周期28 d,期间定期检测生长指标和水质因子,试验结束时测定三疣梭子蟹血淋巴中的碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、过氧化物酶(POD)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和溶菌酶(LZM)等相关酶活力.[结果]枯草芽孢杆菌可显著提高三疣梭子蟹血淋巴中的AKP活力(P<0.05,下同),随着养殖时间推移,AKP活力逐渐升高;而ACP和POD活力均呈先升高后降低的变化趋势,于第21 d时达最高值,分别为6.47 U/100 mL和45.93 U/mL,显著高于CK组;枯草芽孢杆菌对三疣梭子蟹血淋巴T-SOD活力无显著影响(P>0.05),但对LZM含量有明显影响,也于第21 d时达最高值(3.81μg/mL),此后LZM含量维持在相对较稳定的水平.枯草芽孢杆菌对三疣梭子蟹的生长促进作用不明显,但能显著提高其存活率,至试验结束时三疣梭子蟹存活率较CK组提高了17.78%(绝对值).枯草芽孢杆菌对三疣梭子蟹养殖水体氨氮(NH3-N)和亚硝态氮(NO2--N)有显著的降低作用,但在21 d后作用效果略有下降.[结论]枯草芽孢杆菌能显著影响三疣梭子蟹免疫相关酶活力,提高其存活率,且能有效降低养殖水体中的NH3-N和NO2--N含量,进而达到净化养殖水质的效果.     

温度胁迫对三疣梭子蟹血清中非特异性免疫因子的影响

以同期普通三疣梭子蟹Portunus trituberculatus（以下简称普通蟹RS）为对照,研究了低温（8℃）和高温（34℃）胁迫12 h内经溶藻弧菌感染后筛选的抗病候选群G2代三疣梭子蟹（以下简称筛选蟹G2S）的血蓝蛋白含量,以及血清中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）、碱性磷酸酶（AKP）和酸性磷酸酶（ACP）活力的变化。结果表明：温度骤变后,筛选蟹G2S和普通蟹RS的血蓝蛋白含量在3 h时均达到峰值（P〈0.05）,随后又逐渐下降,到3～12 h时已基本恢复到0 h的水平（P〉0.05）。两组蟹的SOD和AKP在低温、高温胁迫3 h内也均显著下降（P〈0.05）,到3～12 h达到稳定的低水平（P〉0.05）;在温度骤变的胁迫下,POD、CAT和ACP活力随时间变化也基本呈峰值变化,但达到峰值和趋于稳定的时间不具同步性。方差分析结果显示,筛选蟹G2S的免疫指标值均显著高于普通蟹RS（P〈0.05）,说明筛选蟹G2比普通蟹RS在非特异性免疫因子方面更具免疫优势。以上结果表明：温度骤变的短期胁迫会影响机体的生理功能和机体的免疫防御能力,导致自由基代谢紊乱,从而诱导病害发生。     

干露下三疣梭子蟹家系间血淋巴免疫因子活性差异分析

分别设置了10 ℃、20 ℃和30 ℃ 3个温度干露条件,比较了不同三疣梭子蟹家系血淋巴酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）、过氧化氢酶（CAT）、一氧化氮（NO）含量、过氧化物酶(POD)等5种非特异免疫因子活性随干露时间延长的变化情况。结果表明,酸性磷酸酶（ACP）指标在3个家系间没有差异,碱性磷酸酶（AKP）、过氧化氢酶（CAT）、一氧化氮（NO）含量和过氧化物酶(POD)在3个家系间存在着差异,其中一氧化氮含量（NO）可以作为指示家系是否具有耐干露特性的一个指标。在此基础上,进一步探讨了这些差异的原因及在培育三疣梭子蟹耐干露新品种上的意义。     

复合免疫增强剂对刺参生长和非特异性免疫酶活性的影响

为研究不同复合免疫增强剂对刺参Apostichopus japonicus非特异性免疫酶的影响,试验设置正常对照组(A组)、芽孢杆菌+壳寡糖+刺五加等中草药组(B组)、芽孢杆菌+壳寡糖+百合等中草药组(C组)、芽孢杆菌+壳寡糖+大黄等中草药组(D组)、芽孢杆菌+壳寡糖+黄芪等中草药组(E组)、芽孢杆菌+壳寡糖组(F组)、壳寡糖组(G组)和芽孢杆菌组(H组)8组,通过在饲料中添加中草药、芽孢杆菌和壳寡糖,研究了芽孢杆菌、壳寡糖和中草药对体质量为(3.87±0.54)g的刺参幼参生长及其酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、溶菌酶(LZM)、超氧化物歧化酶(SOD)等非特异性免疫酶活力的影响。结果表明:投喂芽孢杆菌、壳寡糖和中草药制剂均促进了刺参的生长,各试验组刺参的增重率和特定生长率均显著高于对照组(P0.05),其中,D和E组均显著高于其他试验组(P0.05);在饲料中添加不同配伍的复合免疫增强剂对AKP活力无显著性影响(P0.05);投喂50 d后,C、D、E组ACP活力显著高于对照组(P0.05);投喂50 d后,除H组外,其他试验组SOD活力均显著高于对照组(P0.05),其中B、C和D组SOD活力较高;投喂50 d后,除G组外,其他试验组LZM活力均显著高于对照组(P0.05)。研究表明,饲料中共同添加芽孢杆菌、壳寡糖和中草药复合免疫增强剂能进一步提高刺参非特异性免疫酶活力,其中C、D和E试验组均能提高刺参的非特异性免疫力,且C组效果最好。     

人工感染3种弧菌对鲻鱼血清酶活力的影响

[目的]了解病原菌对鲻鱼非特异性免疫功能的影响,为鲻鱼细菌性疾病的免疫防治提供参考依据.[方法]采用腹腔注射法将等比例混合浓度为4.5× 106 CFU/mL的副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）、创伤弧菌（Vibriiovulnificus）和哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）混合菌悬液人工感染鲻鱼,对照组注射等量灭菌生理盐水,分别在感染后第0、1、3、7、11、15、19、23、27、31和35 d采集血样测定血清中酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）、溶菌酶（LSZ）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、谷草转氨酶（GOT）和谷丙转氨酶（GPT）活力的变化.[结果]鲻鱼在感染3种弧菌混合悬液后第3d开始出现发病症状,其血清中的溶酶体酶（ACP、AKP和LSZ）活力总体上呈先降低后升高再降低的变化趋势;抗氧化酶（SOD和POD）活力也呈先降低后升高再降低的变化趋势;氨基转移酶（GOT和GPT）活力在感染初期呈急剧上升态势,而后下降回归至正常水平.[结论]鲻鱼受到外源微生物（弧菌混合悬液）刺激后,其体内非特异免疫系统被激活、组织（肝脏）受到损伤,即血清中非特异免疫酶可作为鉴定鱼体健康状况的指标.     

铵氮胁迫对拟穴青蟹Scylla paramamosain免疫力的影响

实验室条件下测定了在氨氮浓度0,0.5,1.5,2.5 mg/L胁迫0,24,48,72和96 h下,拟穴青蟹(Scylla paramamosain)血细胞总数(THC)、血细胞吞噬能力及其血清中溶菌酶(LZM)、超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、过氧化物酶(POD)、酚氧化酶(PO)、溶血素等免疫相关因子的活力变化.结果表明:铵氮胁迫24 h时各试验组血细胞吞噬能力明显增强,其后逐渐减弱;铵氮浓度0.5 mg/L组AKP,SOD,PO,POD,溶血素等活力在试验24和48 h时均显著高于对照组(P＜0.01);铵氮浓度1.5 mg/L组仅SOD和POD活力在试验48 h内略高于对照组,其后下降,而其它试验组各测定指标在整个实验过程中均低于对照组并呈下降趋势,且下降的幅度与胁迫浓度、时间成正相关.说明低浓度的铵氮胁迫短时间内会使青蟹产生应激反应,适当提高其免疫力,而长时间或高浓度的铵氮胁迫会抑制青蟹各免疫因子的活性,从而降低其免疫力.     

感染后家蝇幼虫离体血细胞及培养上清中2种酶活性的变化

[目的]探讨大肠杆菌感染后家蝇三龄幼虫血清中酸性磷酸酶（ACP）、过氧化物酶（POD）活性升高的机制。[方法]家蝇三龄幼虫离体培养血细胞中加入大肠杆菌菌液,于离体培养后48、1、2、16 h测定血细胞及培养上清中ACP、POD活性的变化。[结果]（1）大肠杆菌感染后各时间组培养上清和离体血细胞中ACP活性显著高于CK（P〈0.01）。其中培养上清和离体血细胞中ACP活性分别在感染12 h8、h达高峰,然后逐渐下降。（2）大肠杆菌感染后各时间组培养上清和离体血细胞中POD活性显著高于CK（P〈0.01）。其中培养上清和离体血细胞中POD活性分别在感染12 h4、h达高峰,然后逐渐下降。[结论]家蝇幼虫血细胞脱颗粒释放ACP、POD是引起感染后血清中这2种酶活性升高的主要机制。     

人工感染呼肠孤病毒对拟穴青蟹部分免疫因子的影响

采用注射和浸泡的方式人工感染拟穴青蟹呼肠孤病毒,研究了其对拟穴青蟹血细胞密度以及血清中酚氧化酶（PO）、超氧化物歧化酶（SOD）和碱性磷酸酶（AKP）活力的影响.结果表明：注射（第Ⅱ组）和浸泡（第Ⅳ组）方式均能感染健康青蟹,病发死亡时间为7～9 d,死亡率达100%,血细胞平均密度在试验36～72 h间迅速上升并达最高值,其血细胞密度最高值分别为1.4008×107cells/mL与1.8243×107cells/mL;感染病毒的青蟹PO活性均大致呈现下降的趋势,其中,第Ⅳ组感染12 h青蟹PO活性相对对照组显著升高（P〈0.05）,其值为（6.90±1.54）,达实验所测PO活性最高值;各实验组血清SOD活性呈无规律的变化;AKP活性感染组与对照组表现不同.表明测定血细胞密度以及PO和AKP活性可用来辅助诊断青蟹疾病,而SOD活性变化不能很好地表征青蟹受病毒感染的状况.     

富硒海洋小球藻对三疣梭子蟹血清中部分免疫活性酶的影响

对三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)分别饲以单纯配合饵料(对照组)和"配合饵料+富硒藻粉"的混料(试验组),研究其血清中部分免疫活性因子超氧化物歧化酶(SOD)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、过氧化氢酶(CAT)活性的变化,并对试验结果进行统计学分析。结果表明,试验组三疣梭子蟹血清中的SOD活性逐渐上升,至72 h达到最高点,比对照组高44%;ACP活性24 h即呈大幅度上升趋势,24 h时比对照组高97%,上升趋势维持到48 h达最高点(是对照组的3.7倍),72 h仍为对照组的2.8倍;AKP活性5、24 h分别比对照组高39%、38%,48 h达最高(比对照组高80%);CAT活性24 h是对照组的4.3倍,48 h仍为对照组的2.1倍。试验证实,在投喂"配合饵料+富硒藻粉"的混料72 h内,三疣梭子蟹体内的免疫因子发生了明显的变化,血清中SOD、ACP、AKP、CAT活性在不同时间段均有诱导性升高,显著高于对照组水平,说明饲喂普通饵料添加一定量富硒藻粉能有效激活三疣梭子蟹的免疫活性。     

壳聚糖纳米颗粒对红鳍东方鲀生长、免疫酶及免疫基因的影响

为了研究壳聚糖纳米颗粒这一新型免疫添加剂对红鳍东方鲀Takifugu rubripes生长性能、免疫指标的影响,以体质量为(9.910±0.306)g的红鳍东方鲀幼鱼为研究对象,试验设6组,每组设3个平行,每个平行放30尾鱼,投喂基础饲料中分别添加0(对照)、0.2%的壳寡糖(COS)、0.2%的壳聚糖(CS),以及0.2%、0.1%、0.02%的壳聚糖纳米颗粒(CN)的试验饲料,养殖周期50 d,试验结束后测定各组红鳍东方鲀的特定生长率,肝、脾、肾组织中碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、酸性磷酸酶(ACP)及溶菌酶(LZM)的活性,以及补体c3、热休克性蛋白hsp70、免疫调节因子ifr2、Toll样受体tlr3等免疫基因的相对表达量。结果表明:饲料中添加壳聚糖纳米颗粒和壳寡糖能显著促进红鳍东方鲀的生长(P0.05);饲料中添加壳聚糖纳米颗粒能显著增加鱼体肝脏的AKP、CAT酶活性,脾脏的ACP、LZM活性,肾脏的SOD、LZM酶活性(P0.05);壳聚糖纳米颗粒对鱼体ifr2基因表达的促进作用不明显(P0.05),但能显著提高脾脏中c3、tlr3、hsp70的相对表达量(P0.05)。研究表明,饲料中添加壳聚糖纳米颗粒对红鳍东方鲀的生长具有促进作用,并能提高鱼体的免疫力,同时与壳寡糖的作用效果相当。     

复方中草药饲料添加剂对克氏原螯虾非特异性免疫功能的影响

[目的]探讨复方中草药饲料添加剂对克氏原螯虾非特异性免疫功能的影响。[方法]在基础饲料中添加1%、2%的复方中草药制剂,连续投喂40 d,分别在养殖后的20、30、40 d测定克氏原螯虾的溶菌酶、超氧化物歧化酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶的活性。[结果]与对照组相比,添加1%和2%的中草药制剂对克氏原螯虾溶菌酶、超氧化物歧化酶的活性影响极显著(P<0.01),对碱性磷酸酶和酸性磷酸酶的活性影响显著(P<0.05)。2个试验组除酸性磷酸酶外,其他3种酶的活力均无显著差异(P>0.05)。[结论]复方中草药饲料添加剂可以显著提高克氏原鳌虾的非特异性免疫功能。从免疫力和经济角度方面考虑,建议中草药的添加剂量以1%为宜。     

不同盐度对脊尾白虾非特异性免疫及抗氧化酶活性的影响

为了研究不同盐度对脊尾白虾免疫水平的影响,实验对5个盐度组脊尾白虾的肝胰腺和肌肉组织中的非特异性免疫及抗氧化酶相关的酶活性进行了比较分析。结果表明,除LSZ酶活外,不同酶活在肝胰腺中的分布均高于肌肉;除肌肉中的LSZ酶活外,不同盐度组间的免疫酶活性有显著差异。ACP、AKP酶活在肝胰腺中分布以26.6盐度组最高,显著高于11.0、16.2、21.4盐度组（P〈0.05）;不同盐度间脊尾白虾肝胰腺中LSZ酶活差异显著（P〈0.05）,以26.6盐度组酶活最高;T-AOC、SOD酶活在肝胰腺中的分布差异显著（P〈0.05）,以31.8盐度组最高,21.4盐度组最低。     

患上皮瘤病异育银鲫几种免疫相关酶活性的变化

通过对健康对照组、患上皮瘤病较轻组和严重组异育银鲫Allogynogenetic crucian carp的上皮（瘤）组织、血浆、肝脏、肾脏和脾脏中的碱性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）、超氧化物岐化酶（SOD）和溶菌酶（LSZ）活性进行测定和比较,研究了异育银鲫患上皮瘤病后免疫相关酶活性的变化规律。结果表明：AKP活性在上皮（瘤）组织、血浆和脾脏中除较轻组在血浆中与对照组无显著差异外,其余均显著高于对照组,严重组显著高于较轻组,而在肝脏和肾脏中较轻组和严重组均显著低于对照组,严重组显著低于较轻组;ACP活性在上皮（瘤）组织、血浆、肾脏和脾脏中除严重组在上皮（瘤）组织中与对照组无显著差异外,无论较轻组还是严重组患病鱼均显著高于对照组,而在肝脏中却显著低于对照组,在肾脏和脾脏中严重组显著高于较轻组;SOD活性在上皮（瘤）组织和血浆中只有严重组显著低于对照组,在肝脏、肾脏和脾脏中除严重组在肾脏中与对照组无显著差异外,无论较轻组还是严重组均显著高于对照组;LSZ活性在测定的5种组织中除较轻组在肝脏中与对照组无显著差异外,较轻组和严重组均显著低于对照组。研究表明,异育银鲫患上皮瘤病后,测定的4种免疫相关酶活性在不同组织中发生了上升或下降的变化,变化幅度与患病程度呈正相关关系。     

κ-卡拉胶寡糖对仿刺参溶菌酶、碱性磷酸酶和超氧化物歧化酶活性的影响

采用10 g/L的两种κ-卡拉胶寡糖对仿刺参Apostichopus japonicus进行体壁注射刺激后,测定其体腔液中溶菌酶（LSZ）、碱性磷酸酶（AKP）和超氧化物歧化酶（SOD）活性的动力学变化。结果表明：在注射κ-卡拉胶寡糖后的第1天,1、2号寡糖组的LSZ活性达到最高,分别是对照组的7.0和6.0倍,极显著高于对照组（P〈0.01）;AKP活性于注射后第2天增至最高,1、2号寡糖组的酶活性分别是对照组的1.9和2.6倍,前3天试验组的酶活性显著高于对照组（P〈0.05）;1号寡糖组的SOD活性于注射后第2天达到最高,然后逐渐下降,而2号寡糖组的酶活性第2天呈现增加,第5天达到最高,1、2号寡糖组的酶活性最高时分别是对照组的2.0倍和2.3倍,且极显著高于对照组（P〈0.01）。非参数检验分析表明,1、2号寡糖组3种酶活性变化趋势与对照组差异极显著（P〈0.01）,说明κ-卡拉胶寡糖具有增强仿刺参免疫活性的作用。     

凡纳滨对虾免疫指标变化与其养殖环境理化因子的关系

选择两口凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei养殖土池（305#、301#池）,每隔14 d定期采集一次养殖对虾和水样,检测对虾血清、肝胰脏和肌肉组织中酚氧化酶（PO）、超氧化物歧化酶（SOD）、碱性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）的活力和抗菌活力（Ua）等免疫指标,以及水温、溶解氧（DO）等环境因子,探讨了养殖对虾免疫指标与环境因子的相关关系。结果表明：凡纳滨对虾各组织中免疫指标随亚硝酸盐氮、总氨氮等浓度的转变有很明显变化,301#池塘水体中总氨氮和亚硝酸盐氮由高于305#池转变为低于305#池,其养殖对虾体内各组织的免疫指标由低于305#池转变为高于305#池。表明在检测的养殖池塘理化因子中,总氨氮和亚硝酸盐氮是影响养殖对虾免疫指标最主要的因子,因此,养殖过程中应加以严格控制,以提高对虾的免疫力和抗病力。     

盐度胁迫对刺参非特异性免疫酶的影响

盐胁迫后刺参的行为表现及免疫酶活性会发生相应变化,以达到适应盐度变化的目的。设定5个盐度梯度(18、23、33、36和40),分析盐度胁迫后刺参行为变化及不同响应时间下体腔液中碱性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）、溶菌酶（LSZ）、超氧化物歧化酶（SOD）的活力变化。实验结果发现盐度增加和降低都使刺参的活动受到影响,低盐度胁迫比高盐度胁迫对刺参的影响大。碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活性总体呈现先降低后升高,随着时间的延长逐渐恢复适应的趋势。盐度23溶菌酶活力显著高于盐度32的对照组;盐度为36时,溶菌酶活力在第1天最高,随后降低,维持2 d后,酶活力又开始升高,并高于盐度32的对照组水平;盐度为18、40时,酶活力显著低于对照组,并一直维持在较低水平。低盐18、23胁迫时,超氧化物歧化酶SOD酶活力明显低于对照组,且最低点均出现在第8 d。高盐36、40胁迫时,酶活力明显高于对照组,最高点分别出现在第5 d和第8 d。研究结果为刺参机体在盐度胁迫下的调节适应机制研究工作奠定一定的基础。