鸡上部呼吸道疾病病原体生物学特性的研究(第二报)

为了进一步系统地研究该病病原体的生物学特性,我们利用各种日龄的鸡进行人工感染试验。这对以后的鸡上部呼吸道疾病类症鉴别有重要的意义。兹将试验内容及结果报导如下。一、5日龄鸡雏人工感染试验在试验中利用5日龄之雏鸡,采取气管内、滴鼻、肌肉、喉头等四种感染方法。病毒取自7代的致死鸡胚之绒毛尿囊液及羊水液,做为原毒,并将其10倍稀释。气管内感染之病毒,其稀释之倍数是由 10~(-1)—10~(-10),喉头内感染是由 10~(-1)—10~(-5),滴鼻由 10~(-1)—     

制备鸡新城疫病毒抗原的优化实验

本实验主要以NDV弱毒株为实验对象探讨了几种培养因素对鸡胚尿囊液收量和血凝效价的影响。实验选择9、10、11日龄非免疫鸡胚以三个接种剂量分别接种NDVLasota株病毒液于鸡胚尿囊腔中。实验结果表明选用10日龄鸡胚接种,接种剂量为0.1ml/枚时获得尿囊液量和血凝效价为最高。     

一株鹅副粘病毒分离株的增殖最佳条件及其致病性研究

为了探讨鹅副粘病毒在鸡胚中增殖的最佳条件及其致病性,将不同血凝滴度的鹅副粘病毒分别接种于9～11日龄鸡胚尿囊腔,收获孵化36、48、60、72和84 h的鸡胚尿囊液,测定血凝滴度。结果表明将血凝价为1∶64的鹅副粘病毒稀释50倍后,接种9日龄鸡胚,37℃培养48～72 h获得的尿囊液血凝价可达1∶256～1∶512,平均尿囊液量可达9.4 mL/胚。动物试验表明增殖获得的鸡胚尿囊液具有较强的致病性,将该尿囊液接种10日龄鸡胚和颈部皮下注射21日龄非免疫雏鹅,结果接种后鸡胚于30～48 h全部死亡。雏鹅平均死亡时间为62.6 h。特征性剖检病变为脾脏肿大,有灰白色坏死点;胰脏出血,有灰白色坏死点;肠道出血,溃疡;病料分离培养的病毒液HA价高达28,能凝集鸡红细胞,并出现解凝现象。     

鸡传染性法氏囊病毒田间株的分离和鉴定

山东某鸡场送检的40日龄发病鸡法氏囊经处理,离心取上清液,以绒毛尿囊膜途径接种10日龄SPF鸡胚,分离到一株病毒株.该毒株能使鸡胚于接种后72～84h内死亡,经琼脂扩散、血凝试验及动物回归试验,排除其他病原混合感染的可能,鉴定该分离毒株为鸡传染性法氏囊病毒(IBDV).     

安徽省鸡腺胃型传染性支气管炎的研究初报

1997年6月份以来,安徽省淮南等地鸡群流行一种以腺胃病变为主要特征的传染病。经9日龄鸡胚接种病鸡的肝、脾、腺胃等病料分离到的HN毒株,在鸡胚中可稳定传至12代,具有规律性死亡和胚胎病变,ELD50为109.75。用HN鸡胚尿囊液毒人工感染试验鸡,能引起与自然病例相同的临床症状和典型病变。HN鸡胚尿囊液经负染后电镜观察,具有典型的冠状病毒形态。病毒液经胰蛋白酶处理后能凝集鸡红细胞,IBV单抗ELISA检测呈强阳性反应。应用分离毒研制的油乳剂疫苗经试验和临床应用表明有良好的保护作用。研究结果初步表明,HN每株为IBV成员。     

鸡胚液中蛋白质动态电泳分析

通过SDS—PAGE对9,11,13,15,17日龄罗曼鸡胚尿囊液、羊水、房水中的蛋白质组成进行了初步研究,结果显示：鸡胚尿囊液中蛋白组分较少,含量低,不同日龄样品中组分基本一致。9日龄鸡胚羊水中含蛋白质极少,随日龄的增大,羊水中的蛋白质含量和种类呈递增趋势,13日龄后,羊水中蛋白质含量剧增;眼房水中蛋白质组分丰富,蛋白含量有随日龄增加而升高的趋势。     

鸡胚液中蛋白质动态电泳分析

通过SDS-PACE对9,11,13,15,17日龄罗曼鸡胚尿囊液、羊水、房水中的蛋白质组成进行了初步研究,结果显示:鸡胚尿囊液中蛋白组分较少,含量低,不同日龄样品中组分基本一致.9日龄鸡胚羊水中含蛋白质极少,随日龄的增大,羊水中的蛋白质含量和种类呈递增趋势,13日龄后,羊水中蛋白质含量剧增;眼房水中蛋白质组分丰富,蛋白含量有随日龄增加而升高的趋势.     

鸡肾型传支病毒繁毒规律及其血凝特性研究

９日和１０日龄鸡胚尿囊腔中接种稀释比例为１／１００￣１／５００的肾型传染性支气管炎病毒,常规培养４８ｈ进行繁毒规律和血凝特性分析。结果表明：１０日龄鸡胚尿囊液收毒量大于９日龄鸡胚。１％的胰酶３７℃作用１￣４ｈ,作用时间对血凝价影响差异不显著,５６℃１％的胰酶作用０．５￣２ｈ,作用时间对血凝价影响差异显著。０．５％￣１％鸡红细胞对血凝价影响差异不显著。９日龄以１／１００种毒繁毒后凝集价最高,１０日龄     

鸡胚尿囊液量与种毒接种日龄及接种剂量的相关性研究

选择9、10、11日龄非免疫的罗曼蛋鸡胚各180个,随机分成9组,每组60个,分别接种NDVLasota种毒液0.05、0.10、0.20ml/个于鸡胚尿囊腔中。试验结果表明:所采收的尿囊液量与不同的接种剂量及接种日龄有很大的联系。     

鹅副粘病毒人工感染鹅、鸡、鸭试验

用江西农大预防兽医学实验室分离的一株鹅副粘病毒(JXG1)的F4代鸡胚尿囊液人工感染鹅、鸭、鸡试验.结果表明:该毒株对鹅、鸡具有较强致病性,40日龄鹅感染后发病率100%,死亡率50%～80%;25日龄雏鸡感染后的发病率和死亡率达100%;人工感染致死鹅、鸡的眼观病理变化与自然发病鹅的病变基本一致;鸭人工感染后仅表现一过性拉白色稀粪;鹅、鸡、鸭感染后均能产生相应抗体.     

病毒性关节炎的研究

作者根据广东省江门市某鸡场以破行鸡为主的鸡病流行情况,临床症状及病理变化等,作出鸡病毒性关节炎的假定性诊断。 从病鸡的关节滑液中分离到一种病毒,该病毒能在鸡胚卵黄囊内、尿囊腔内和绒毛尿囊膜上生长并致死鸡胚,使鸡胚皮肤呈暗红色。病毒也能在鸡胚肾细胞、鸡胚成纤维细胞上生长并引起细胞病变。病毒对鸡红细胞无凝集作用,用含病毒的鸡胚尿囊液接种敏感鸡后,可复制出与临床所见相类似的疾病。 在电镜下观察,病毒直径为63～74nm,在感染的鸡胚绒毛尿囊膜上可见到胞浆内的包涵体,经测定,病毒含有双股RNA,对氯仿、乙醚、60~0C1小时有抵抗力,对胰酶敏感。 实验结果表明:被分离到的病毒为传染性关节炎病毒,因此江门市某鸡场所发生的以跛行为主要特征的疾病可以确诊为鸡病毒性关节炎。     

氟哌酸对鸡胚和雏鸡毒性的观察

本文对10日龄鸡胚采用尿囊腔注射和3日龄雏鸡采用经口服一次给药的方法,观察了氟哌酸的急性毒性。结果表明,氟哌酸对鸡胚的最小致死剂量为320mg/kg胚重;对3日龄雏鸡的LD_(50)为4985±753.18mg/kg体重。对雏鸡的毒性主要表现为严重的胃肠道反应和中枢神经症状。蓄积毒性试验表明,本品无明显蓄积毒性,不影响雏鸡增重,未见其它不良反应。     

H9亚型禽流感病毒NJ01株动物回归试验前后生物学特性比较

将鸭源H9亚型禽流感毒株NJ01在SPF鸡胚上所传第四代（E4）,经静脉注射回归8日龄非免疫樱桃谷鸭,取死亡鸭肺组织作为病毒重分离材料,接种SPF鸡胚,收获24～96h死亡鸡胚尿囊液,混合为F1,取F1,按上述方法再次进行回归试验并分离病毒,收获的病毒液记为F2,取E4、F1及F2病毒液,对其生物学特性进行了比较研究。研究结果表明：F2较E4对鸡胚的敏感性增强,其MDT／MLD值减小,对44日龄非免疫樱桃谷鸭静脉攻击的感染性增强,以10^8.5ELD50／羽的剂量攻毒后1d＋2d喉拭子的病毒重分离阳性率由3／5增至4／5。     

鹅副粘病毒病的病原分离及初步鉴定

2000年3月从江西余江县某种禽场以消化系统病变为特征的发病鹅群中,通过鸡胚分离到一株具有血凝活性的病毒(JXG1),经血清学鉴定为副粘病毒.该毒株F4代鸡胚尿囊液半数感染量EID50为10-7.4/mL.分离毒株人工感染40日龄丰城灰鹅(每羽胸部皮下注射0.1mLF4代鸡胚尿囊液),发病率为100%,死亡率为50%,且临床症状和病理变化与自然发病鹅相同.     

鸡传染性支气管炎病毒M41型的扩繁及在鸡胚肾细胞上的适应性研究

探明鸡传染性支气管炎病毒（Avian Infectious Bronchitis Virus,IBV）感染鸡胚肾细胞（Chicken Embry-o Kidney Cells,CEK cell）,并且实现其增殖为目的。将IBV稀释液注射到SPF鸡胚尿囊腔内,培养鸡胚扩繁,观察记录结果;并培养CEK细胞,采用100倍半数组织培养感染量的IBV进行染毒实验;应用Reed-Muench法计算半数鸡胚感染量为10-6.68/0.1 mL;用Real time PCR检测IBV在感染细胞中的含量,以确定IBV在CEKcells中已经感染且增殖成功。结果表明,接种10日龄的SPF鸡胚可以收集更多的、约8 mL的尿囊液毒;反复盲传至7代的IBV可使CEK cells产生明显的细胞病变效应;通过实时荧光定量PCR和RT-PCR检测,最终确定IBV-M41型扩繁成功并且能够在CEK细胞上繁殖,为下一步实验提供了参考。     

猪流感福建流行毒株的分离、鉴定

疑似猪流感(SIV)病猪的鼻拭子尿囊腔接种10日龄SPF鸡胚,72 h后致死鸡胚.取尿囊液进行血凝试验,分离物能使多种禽类和哺乳动物红细胞发生凝集;取尿囊液接种鸭胚、鹅胚,48 h后即致死鸭胚、鹅胚;取尿囊液接种鸡、鸭、鹅胚等成纤维原代细胞和Vero、PK、BHK、MA-104等传代细胞,发现病毒能使成纤维细胞、Vero出现变圆、皱缩、脱落等病变;尽管PK、BHK21、MA-104等细胞接种后不出现病变,但培养上清能凝集鸡红细胞;亚型鉴定该株病毒属猪流感病毒H1N1.进行病毒对BALB/C小鼠、信鸽、8周龄仔猪的回归试验,发现该株流感病毒能使信鸽和8周龄仔猪发病;BALB/C小鼠接种病毒后临床上不表现症状,但体内产生针对该病毒的抗体.     

灰树花胞外多糖发酵液的抗病毒作用研究

以一株灰树花菌株发酵胞外多糖在鸡胚水平上进行了抗新城疫病毒作用研究。将新城疫病毒分别和灰树花发酵胞外多糖混合接种到9~11日龄鸡胚,继续孵化,记录鸡胚死亡时间并测定死亡鸡胚尿囊液血凝价。结果表明,与对照组相比,通过发酵制备的灰树花发酵胞外多糖对新城疫病毒有很好的抑制作用,减缓并降低了鸡胚的死亡,降低了血凝效价,对新城疫病毒有一定的杀灭作用。     

生物素标记IBDV─RNA探针的制备及其对IBDV─RNA检测的初步研究

以传染性法氏囊病毒强毒株接种９日龄鸡胚尿囊腔，待鸡胚死亡后，收集其尿囊液，提取病毒。纯化的病毒ＲＮＡ在３％琼脂糖凝胶电泳上呈现出２９０ｂｐ和３４００ｂｐ的两条带。收集这两条带，以病毒全基因组制备生物素标记的探针。此探针有良好的特异性。它不与其它３种禽类病毒（ＮＤＶ，ＩＢＶ，ＩＬＶ）的核酸抽提物发生交叉反应。此试验是快速、敏感、可重复的。其敏感度达０．５ｐｇ。     

鸡新城疫B_1系苗接种鸡胚免疫之研究

本文利用鸡新城疫B_1系苗研究鸡胚的免疫反应。试验证明,对疫苗的应答能力取决于鸡胚的日龄,接种途径和疫苗剂量。18日龄鸡胚尿囊腔注射2.5×10~(5.8)EID_(50)/0.1ml的B_1系苗,出壳后第6天和第41天均具有坚强的保护力,保护率达100％。与一日龄雏点眼组(10~(6.8)EID_(50)/0.1ml)的保护率没有明显差异(P>0.05)。且不影响孵化率(P>0.05。) 母源抗体对鸡胚免疫接种具有干扰作用。从2.5×10~(5.8)EID_(50)10.1ml尿囊腔接种平均母源抗体为5.3log的18日龄鸡胚,出壳后第19天保护率为64％,与一日龄雏点眼组(10~(6.8)EID_(50)/0.1ml)的保护率没有显著差异(P>0.05)。增加免疫剂量到3.3×10~(5.8)EID_(50)/0.1ml可提高保护率到92％,但至第41天又下降到75％。     

生物素标记IBDV─RNA探针的制备及其对IBDV─RNA检测的初步研究

以传染性法氏囊病毒强毒株接种９日龄鸡胚尿囊腔，待鸡胚死亡后，收集其尿囊液，提取病毒。纯化的病毒ＲＮＡ在３％琼脂糖凝胶电泳上呈现出２９０ｂｐ和３４００ｂｐ的两条带。收集这两条带，以病毒全基因组制备生物素标记的探针。此探针有良好的特异性。它不与其它３种禽类病毒（ＮＤＶ，ＩＢＶ，ＩＬＶ）的核酸抽提物发生交叉反应。此试验是快速、敏感、可重复的。其敏感度达０．５ｐｇ。