表达

墨子是中国历史上第一个为“草根”说话的思想家,反对“大型综艺晚会”,谓之“非乐”。为什么呢？因为对劳动人民没好处。     

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她留我走——快女60进20的最后一个晋级名额诞生后,包小柏因不满唱功不佳的选手曾轶可晋级甩袖而去。     

VOICE表达

“她留我走”——“快女”60进20的最后一个晋级名额诞生后，包小柏因不满唱功不佳的选手曾轶可晋级甩袖而去。     

爱需要表达

有这样一个故事:一位母亲十分疼爱自己的孩子,那时家贫,凡有什么好东西,母亲总是让给孩子.一次,亲戚送给她一条鱼,煮好后,母亲习惯地将鱼身夹给了孩子,而将鱼头放在了自己的碗里.许多年后,孩子长大了,过年时他回到家乡,母亲煮了一锅鱼.餐桌上,孩子孝顺地将鱼头分给了母亲,并说,我知道妈妈最爱吃鱼头.母亲一脸愕然,没想到孩子完全没能理解自己对他的爱.     

家蚕iap基因在原核表达系统中的表达

为研究IAP蛋白抑制细胞凋亡的作用,用PCR法扩增出家蚕iap基因的cDNA,然后插入pET28a载体,得到阳性质粒pET28a-iap,并转化感受态细胞BL21,使用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导IAP蛋白的表达,应用SDS-PAGE和Western Blotting法分析目的蛋白,得到一条分子量约为38.8 kDa的特异表达条带,与表达产物的理论值相符。为进一步研究BmIAP蛋白的功能奠定了基础。     

爱的表达

婚姻中,除去说一句简单的＂我爱你＂,我们还能做什么？ 学会倾听 晚餐并不丰盛,老公却吃得津津有味。他刚参加完远房亲戚的喜宴,情绪一直在兴奋中。他再次说起童年往事：他小时候因家里穷,9岁才第一次吃上白米饭,一次吃了3碗,就是在这位亲戚家……我知道,接下来他会从远亲说到初恋和各种糗事。虽然已经听了很多次,但我喜欢看他神采飞扬的表情。问他：＂真的呀？＂＂怎么会这样？＂无论他说多少遍,我都听得津津有味。吃过饭,他不仅主动去洗碗,还美美地哼起歌来。     

大肠杆菌表达系统和酵母表达系统的研究进展

由于DNA重组技术和蛋白组技术的发展与成熟,外源基因表达技术备受关注。其在生物、食品、工业以及医学领域发挥着举足轻重的作用。以原核生物细胞及真核生物细胞作为表达系统,进行目的基因序列的表达以生产蛋白疫苗、核酸疫苗和生物酶制剂等是近年来发酵工业的新型领域。原核和真核表达系统是近年来研究和应用最广泛和最成熟的外源基因表达系统。对近年来关于大肠杆菌表达系统和酵母表达系统的研究进展进行了综述。     

miRNA-143表达载体构建及表达活性检测

以大白猪基因组DNA为模板,利用PCR扩增miRNA-143前体序列,构建重组载体pEGP-miR-143,转染猪胎儿成纤维细胞,通过荧光观察转染效率和报告基因表达效率,再利用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)测定细胞内miRNA-143的表达,以检测外源基因的表达活性;对PCR产物进行测序鉴定及重组载体酶切验证。结果表明:成功构建了pEGP-miR-143载体;转染细胞后进行荧光观察,载体中GFP有较好的表达活性;QRT-PCR表明,与对照组细胞相比,试验组miRNA-143表达有显著提升,差异极显著(P<0.01)。说明已成功制备miRNA-143过表达载体,为在动物细胞和体内开展miRNA-143相应的功能研究奠定基础。     

大肠杆菌中的表达

 在大肠杆菌中表达苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis，简称Bt）cry2Ac4基因；笔者以含有Bt WB9菌株cry2Ac4基因的质粒pMD2Ac为模板，利用cry2Ac4基因的特异引物对(ET-F/ET-R)扩增获得该基因，进而将cry2Ac4基因与pET-29a原核表达载体连接；成功构建了重组表达载体并转化大肠杆菌JM109，从阳性转化子中提取重组表达质粒pET-29a-cry2Ac4，再转化大肠杆菌BL21（DE3）pLysS，经IPTG诱导后，对诱导表达产物进行了SDS-PAGE检测；cry2Ac4基因编码的约70kDa蛋白在大肠杆菌中得到了高效表达。     

苎麻UDPGDH原核表达载体的构建与表达

通过RT-PCR 获得UDPGDH cDNA序列,经酶切、连接,以pET-32a为原核表达载体,构建成pET-32a- UDPGDH 重组表达载体.经酶切、PCR及DNA测序鉴定后,将阳性质粒转化表达受体菌E. coli BL21(DE3),经IPTG诱导后表达出1个约53 000的蛋白,与推测的UDPGDH编码产物的大小一致.凝胶成像分析表明,最高表达量可占菌体总蛋白的47.1%,表明UDPGDH 重组载体在大肠杆菌中获得了稳定的表达.     

绿色荧光蛋白基因银耳表达载体构建及表达

以银耳芽孢为材料,由载体pEGFP、pCAMBIA1300经过HindIII和EcoRⅠ双酶切、连接、转化,重组质粒酶切验证,成功构建了由双孢蘑菇gpd启动子调控EGFP基因的银耳真核表达载体,命名pCB-BEGFP。采用电击转化法将携带EGFP基因的银耳表达载体pCB-BEGFP转化到银耳芽孢。提取4个转化子基因组DNA,用EGFP基因特异引物PCR扩增,电泳结果表明有与EGFP基因大小一致的特异带出现;荧光显微镜观察在再生培养基上的转化子可看到很强的绿光;其中一个转化子蛋白SDS-PAGE电泳,结果发现在大约27kD处有一明显的蛋白条带出现,与预期的蛋白分子量相近。以上结果证明EGFP基因转入银耳芽孢中,双孢蘑菇启动子可以调控外源基因的在银耳芽孢中正确表达。     

胡杨叶与根中特异性表达基因的表达谱分析

以2年生胡杨实生苗为研究材料,通过NaCl溶液处理24 h,分别收集NaCl处理后的细嫩白根及叶片,采用CTAB法抽提胡杨盐胁迫下的叶与根的RNA,用基因芯片技术研究胡杨盐胁迫后叶与根中基因的差异表达。经过比对,差异10倍以上的基因共有175个,其中在叶中表达上调的有120个,在根中表达上调的有55个。     

鳗鲡病原菌外膜蛋白三联表达载体的构建、表达与表达产物的纯化

为研制能同时预防鳗鲡3种常见病原菌感染的三联外膜蛋白疫苗,分别选择创伤弧菌(Vibrio vulnificus)、迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)和嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)外膜蛋白的ompU、ompA和omp porinП基因,设计特异性引物后分别扩增基因中表达外膜蛋白膜外区域且抗原决定簇丰富的3个基因片段并通过融合PCR技术进行连接。根据表达载体(pGEX-2T-his)的限制性酶切位点,在连接片段的两端引入BamHⅠ和EcoRⅠ两个酶切位点,将3个外膜蛋白基因片段与质粒连接后成功构建了重组表达载体。重组表达载体成功转化大肠杆菌(E.coli BL21)后,当菌液浓度(D600nm)为0.8时加入0.25mmol/L IPTG,16℃培养过夜后得到了高效表达。表达产物用镍柱进行洗脱纯化后经梯度尿素复性获得了分子质量约85ku的高纯度蛋白。     

GPC3过表达载体的构建和表达检测

目的构建并检测磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（glypican-3,GPC3）真核表达重组质粒。方法提取肾组织RNA进行逆转录,扩增GPC3基因的编码区,将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,酶切鉴定并测序;将克隆成功的质粒转染至Huh7细胞,用荧光定量PCR和Western blot检测GPC3的表达水平。结果成功扩增GPC3编码区,并克隆至载体pcDNA3.1中;GPC3过表达载体转染至Huh7细胞后,荧光定量PCR和Western Blotting检测结果显示GPC3mRNA和蛋白表达水平均明显增加。结论成功构建GPC3过表达载体可用于后续研究。     

MBP-mCTCF融合蛋白原核表达载体的构建及表达

为了构建鼠的CTCF与麦芽糖结合蛋白(MBP)融合蛋白的原核表达载体,并进行原核诱导表达及鉴定,以pMXs-3Flag-m CTCF为模板,PCR扩增得到mCTCF序列,目的基因片段EcoRI,SalI双酶切后连接到同样双酶切的pMal-C2G载体上,测序鉴定。将测序正确的质粒转化到E.coli BL21中,用IPTG诱导融合蛋白的表达,用SDS-PAGE分离检测蛋白表达效果。经菌液PCR、测序鉴定、双酶切鉴定证明,得到的重组质粒pMal-C2G-mCTCF构建成功,且成功诱导出了MBP-mCTCF融合蛋白,最佳诱导条件为:10×10~(-4) mol/L IPTG浓度在37℃诱导6 h。     

水稻种子特异表达基因OsEnS38的克隆与表达

以粳稻中花11为材料,利用生物信息学技术,结合RT–PCR,克隆了水稻OsEnS38的c DNA序列;其编码的蛋白序列包含2个Cupin_1保守结构域,属于典型的Bicupin亚家族。启动子分析发现,OsEnS38启动子区域含有多种与胚乳特异表达相关的顺式作用元件;q RT–PCR和原位杂交结果证实,OsEnS38在开花后7~14 d的种子中特异表达,在第10天的胚乳中表达量最高,达29.73;杂交信号在第7、10天的胚乳中高表达;共表达分析显示,共表达基因参与水稻胚后发育和生殖发育调控,表明该基因在种子发育和储藏物质积累过程中发挥作用。