马铃薯‘华颂66号’遗传转化体系的建立

为探究马铃薯的最佳遗传转化体系,以紫色马铃薯‘华颂66号’无菌组培苗茎段为外植体,用农杆菌介导法将含有植物沉默载体质粒pBWA(V)KS-miR8019转化马铃薯外植体,测定不同预培养时间、不同激素组合及抗生素对马铃薯愈伤再生转化体系的影响。结果表明：1)茎段预培养时间为2 d时,愈伤组织诱导率最高;2)最适的外植体愈伤组织诱导的培养基配方为：MS干粉式培养基+2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D,愈伤组织的诱导率为96.7%。最适愈伤组织分化的培养基为：MS干粉式培养基+4.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+1.0 mg/L GA₃;3)植株再生及生根的抗生素最适筛选浓度为75 mg/L的卡那霉素;4)农杆菌抑制剂的最适浓度为300 mg/L的特美汀,且在愈伤组织诱导、分化及生根阶段都需要加入。综上,通过对农杆菌介导的愈伤再生转化过程中各个影响因素进行试验,初步建立了马铃薯‘华颂66号’的遗传转化体系。     

尾巨桉遗传转化体系研究

以尾巨桉(Eucalyptus urophylla×E.grandis)32-29无性系为研究对象,研究了不同农杆菌种类以及侵染时间因素对尾巨桉茎段和愈伤组织遗传转化的影响,探讨了适宜尾巨桉转化的卡那霉素和抑菌抗生素使用浓度。结果表明,茎段外植体较愈伤组织转化率高,侵染时间为4min。LBA4404转化效率高于EHA105,GUS检测转化率分别为80.7%、63.5%。适宜生长在50mg.L-1的卡那霉素4、00 mg.L-1头孢唑林钠的筛选培养基上。     

天山雪莲遗传转化体系建立

采用根癌农杆菌介导法进行GFP基因的遗传转化,建立了农杆菌介导天山雪莲遗传转化体系。以天山雪莲胚性愈伤组织为受体;40 mg/L的卡那霉素为胚性愈伤组织筛选质量浓度;胚性愈伤组织预培养2 d后用含100μmol/L AS和500 mg/L脯氨酸的感染工程菌液侵染25 min,能够取得比较理想的转化效果。对8株卡那霉素抗性植株进行PCR及GFP荧光蛋白检测,共获得6株阳性植株。结果表明GFP基因已整合到天山雪莲的基因组中并得到表达。     

农杆菌介导雪莲PBP基因对棉花的遗传转化研究

雪莲磷脂酰乙醇胺结合蛋白（Phosphatidyl ethanolamine-binding family protein, PBP）基因表达产物与细胞膜的冷稳定性有关，可能在植物抗寒方面起一定作用。本研究将XLPBP基因以农杆菌介导的方法转化新陆早17号、新陆早13号、新陆早1号3个品种陆地棉，通过对不同激素浓度、预培养时间、菌液浓度和浸菌时间等因素对转化培养物的影响以及茎段外植体对卡那霉素（Kan）的敏感性等方面的探讨，确定了新陆早13号外植体材料（茎段）的最佳转化条件，即：在OD600为0．4的农杆菌菌液中侵染10min，在茎段最适培养基（含0．1mg／LKT和0．1mg／L2，4-D，pH5．8）上进行预培养2d，共培养2d，转至不含选择压的培养基（含Cef 500 mg／L）上进行延迟培养7d，再进行选择培养，茎段愈伤分化达25％（诱导出愈伤组织的外植体数占接种的外植体数）以上；茎段转化适宜的选择压力为Kan 50 mg／L；在获得的抗性愈伤中8％左右经检测为GUS阳性。     

抗生素对薰衣草愈伤组织诱导和生长的影响

研究了卡那霉素(Kanamycin)和头孢霉素(Cefotaxime)对法国孟士德薰衣草(Lavandula angustifolia,cv. Munstead)愈伤组织诱导和生长的影响.结果表明:在以卡那霉素为抗性选择标记时,叶盘的选择压力为10 mg/L,愈伤组织的选择压力为20 mg/L;在以头孢噻肟钠为抑菌剂用于薰衣草叶盘遗传转化实验时,其浓度为200 mg/L时即可有效抑制农杆菌的生长,同时又不会对薰衣草愈伤组织产生明显的伤害作用.     

3种抗生素对尾巨桉愈伤组织诱导及植株再生的影响

【目的】研究潮霉素、卡那霉素和头孢霉素对尾巨桉愈伤组织诱导、不定芽分化及生根的影响,确立抑制农杆菌生长的头孢霉素质量浓度。【方法】以尾巨桉无菌苗茎段为外植体,先后接种于添加不同质量浓度抗生素的愈伤组织诱导培养基、不定芽诱导培养基以及生根培养基上,统计愈伤组织诱导率、不定芽诱导率和不定芽生根率,观察头孢霉素对农杆菌生长的影响。【结果】(1)培养基中的潮霉素、卡那霉素、头孢霉素的质量浓度分别为15,25,200 mg/L时,尾巨桉外植体的愈伤组织诱导率分别为6.7%,12.1%和26.7%;(2)潮霉素、卡那霉素、头孢霉素的质量浓度分别为15,25,250 mg/L时,不定芽分化受到明显抑制,不定芽诱导率分别仅有2.6%,10.2%和7.6%;(3)潮霉素、卡那霉素、头孢霉素的质量浓度分别为15,25,250 mg/L时,不定芽生根困难,生根率分别为10.2%,16.2%和10.1%;当头孢霉素质量浓度≥200 mg/L时,农杆菌生长被完全抑制。【结论】尾巨桉对不同抗生素的敏感性存在差异,在尾巨桉遗传转化过程中,抗性愈伤组织与不定芽诱导的潮霉素适宜质量浓度为10 mg/L,卡那霉素为20 mg/L;生根诱导适宜的潮霉素和卡那霉素的质量浓度分别为15 和25 mg/L;抑制农杆菌生长的头孢霉素较适宜的质量浓度为200 mg/L。     

抗生素对薰衣草愈伤组织诱导和生长的影响

研究了卡那霉素（Kanamycin）和头孢霉素（Cefotaxime）对法国孟士德薰衣草（Lavandula angustifolia,cv．Munstead）愈伤组织诱导和生长的影响。结果表明：在以卡那霉素为抗性选择标记时,叶盘的选择压力为10mg／L,愈伤组织的选择压力为20mg／L;在以头孢噻肟钠为抑菌剂用于薰衣草叶盘遗传转化实验时,其浓度为200mg／L时即可有效抑制农杆菌的生长,同时又不会对薰衣草愈伤组织产生明显的伤害作用。     

农杆菌介导的紫穗槐茎段愈伤组织遗传转化研究

采用农杆菌介导法对紫穗槐茎段诱导的愈伤组织进行遗传转化研究。确定了卡那霉素临界耐受浓度为40mg/L。菌液浓度与侵染时间的正交试验结果表明:侵染菌液OD600为0.8、侵染时间为30min时转化效率最高,达17.95%。GUS染色检测分析表明:含pBI121-GUS质粒DNA农杆菌侵染转化的愈伤组织其抗性不定芽和再生植株根和叶均呈蓝色。转化植株叶PCR检测结果表明外源GUS基因已整合到紫穗槐基因组中。以上结果表明建立了以茎段诱导愈伤组织为转化受体、农杆菌介导的紫穗槐高效遗传转化体系。为了验证其可重复性,又进行了pBI121-GFP基因的转化,T0代再生植株PCR检测整合率达85%,在488nm蓝光源激发下转化株的顶芽产生绿色荧光,说明转入的基因在35S启动子下过量表达。此遗传转化体系可应用于转基因育种。     

‘克新13号’马铃薯植株再生和转化技术

为研究马铃薯植株再生和转化技术,以‘克新13号’的茎段、叶片和微型薯为外植体,接种到不同激素配比的培养集中进行愈伤组织诱导和分化,再采用农杆菌转化法,初步建立了马铃薯遗传转化再生体系。结果表明：茎段是‘克新13号’马铃薯比较理想的外植体材料,最佳的愈伤组织诱导培养基为4.4 g/L MS+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂+2 mg/L 6-BA+0.5 mg/L 2,4-D+0.4 mg/L KT,愈伤组织诱导率在95%以上;最佳的分化培养基为4.4 g/L MS+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂+2 mg/L 6-BA+3 mg/L KT+0.5 mg/L GA₃+0.1 g/L肌醇,出苗率为56.25%;外植体预培养2 d后,用OD₆₀₀=0.5的农杆菌菌悬液侵染7 min,再共培养3 d,以50 mg/L Kan和200 mg/L Tim为抗生素进行筛选,能成功获得含目的基因Cas9p的转化植株。     

不同抗生素对刺槐遗传转化受体系统的影响

本试验研究了卡那霉素(Kana)、头孢霉素(Cef)、氨苄青霉素(Amp)、羧苄青霉素(Carb)、红霉素(E)对刺槐形成层为外植体的遗传转化受体系统的影响。结果表明:刺槐形成层诱导愈伤时Cef对受体材料伤害最小,抑菌效果最好,浓度为200 mg/L时能完全抑制农杆菌生长;用Kana作为刺槐转基因植株的筛选,刺槐形成层愈伤组织分化时选择剂浓度为100~125 mg/L最佳,生根培养时选择剂浓度为75 mg/L最佳。     

企业文化就是一言一行

几年前,中国企业家调查系统在对2881位企业经营者做出的问卷调查表明,有60．1％的人同意“企业文化是企业发展到一定阶段才形成的”这一说法。     

蓝猪耳再生条件优化及不同外植体再生比较

为了寻求一种最佳的蓝猪耳再生体系, 比较了叶片诱芽、诱愈及幼苗生根的几种培养基, 结果表明,1 /2MS+BA1mg/L+NAA0 1mg/L、MS+BA1mg/L+ 2 .4 D0 1mg/L和1 /2MS分别是诱芽、诱愈及生根的最佳培养基。不同外植体诱芽结果显示, 根、茎和叶片都可以诱导不定芽的产生, 但以叶片诱导的效率为最高。几种再生体系比较的结果表明, 蓝猪耳叶片诱芽的再生体系为最佳再生体系。     

灰楸体外植株再生体系建立

以灰楸茎段为试验材料,进行了灰楸的植株再生研究.结果表明:灰楸茎段愈伤组织和芽诱导最适培养基为MS+0.3mg/L IBA+5 mg/L BA,丛生芽诱导最适培养基为MS+0.1 mg/L NAA+12 mg/L BA,根诱导最适培养基为1/2MS+0.5mg/L NAA.     

马铃薯延薯4号再生体系建立

为了建立马铃薯高效、稳定离体再生体系,以延薯4号无菌试管苗茎段为材料,通过对茎段再生体系的筛选,优化了培养基内最佳激素配比浓度。结果表明:马铃薯延薯4号无菌试管苗茎段诱导愈伤组织最适培养基为:MS+6-BA3.0 mg·L~(-1)+NAA1.0 mg·L~(-1)。茎段丛生芽分化的最适培养基为:MS+6-BA2.0mg·L~(-1)+NAA0.20mg·L~(-1)+G A_31.0mg·L~(-1)。     

甘薯高效再生体系的建立

[目的]为甘薯品种的基因转化改良奠定基础。[方法]以郑9728-4甘薯苗的枝条为材料,探讨不同激素组合对其愈伤组织产生、分化、增殖及生根的影响。[结果]以甘薯顶芽下3～4节为外植体诱导无菌芽效果较好,外植体以0.1%的HgCl2灭菌6～7min效果较好;甘薯枝条腋芽诱导的最佳培养基为MS＋BA1.0mg/L＋NAA0.1mg/L;无菌芽各种外植体愈伤组织形成、分化和增殖的最佳培养基为BA1.0mg/L＋IAA0.1mg/L（成愈率为98.7%,分化率为91.2%,增殖倍数为4.5倍,且丛芽生长健壮）;再生芽生根的最佳培养基为1/2MS＋NAA1.0mg/L。[结论]建立了甘薯的高效再生体系。     

菊花幼嫩花瓣愈伤组织的诱导和植株再生

以菊花幼嫩花瓣作为供体材料,ＭＳ作为基本培养基,在激素组合为６ＢＡ１～３ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ１ｍｇ／Ｌ或２,４ Ｄ１～３ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ１ｍｇ／Ｌ的范围内均能诱导出愈伤组织,但以ＭＳ附加６ＢＡ２ｍｇ／Ｌ和ＮＡＡ１ｍｇ／Ｌ的诱导率最高,可达１００％。将愈伤组织转移到ＭＳ＋６ＢＡ２ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０２ｍｇ／Ｌ的培养基上,分化芽的频率为７７８％。将３ｃｍ左右的茎段转移到不含激素的ＭＳ培养基或ＭＳ＋ＮＡＡ０１ｍｇ／Ｌ的培养基上,生根率可达９５％以上。     

地锦组织培养及无性系建立研究

以生长旺盛的地锦嫩茎为材料,进行了愈伤组织的诱导和分化、不定芽的分化及试管苗的生根、移栽、扦插和移植的研究。结果证明：MS＋BA0．4～0．6mg／L＋2,4-D1．5～2．0mg／L是诱导嫩茎形成具有分化能力愈伤组织的理想培养基;MS＋AgNO3 0．8mg／L＋BA 0．6mg／L＋NAA 0．1mg／L是诱导愈伤组织分化培养的理想培养基;B5＋BA 0．5mg／L＋NAA 0．1mg／L是不定芽分化培养的理想培养基;B5＋IAA 0．2mg／L＋NAA 0．1mg／L是试管苗生根继代培养的理想培养基;移植的试管苗具有生长旺盛整齐、根系发达、开花结果时间推迟15d左右的特点。     

刺儿菜的组织培养及无性系建立研究

以刺儿菜嫩茎为材料,进行了愈伤组织诱导、愈伤组织和不定芽分化以及试管苗生根假植、扦插、移植等研究,建立了刺儿菜的无性繁殖体系.研究结果表明:在刺儿菜组培繁殖过程中,MS+NH4H2PO4 50 mg/L+BA0.5 mg/L+2,4-D0.8 mg/L是诱导嫩茎形成颗粒状愈伤组织的理想培养基,MS+AgNO31.5 mg/L+BA1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L是诱导愈伤组织分化和不定芽分化的理想培养基,1/3 MS+IAA0.3 mg/L是不定芽生根培养的理想培养基,炉灰渣是试管苗移栽和扦插的理想基质:移植到荒坡上的刺儿菜小苗生长旺盛,并保持了野生刺儿菜的特有生物学性状.     

西双版纳甜糯山药茎尖组培技术优化研究

甜糯山药是西双版纳的特有品种，传统的繁殖方式效率不高。为推广、扩繁该品种，本研究以西双版纳甜糯山药的茎尖和茎段为材料，对各阶段的培养基、培养条件进行筛选优化，获得了一套适合西双版纳甜糯山药茎尖、茎段组培的快繁体系。其中：最适诱导培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L+PVP 150 mg/L+VC600 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7.8 g/L；最适分化培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 2.0 mg/L+PVP 150 mg/L+VC600 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7.8 g/L，培养30 d分化率可达到73.33%；最适生根培养基为1/2MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+蔗糖15 g/L+琼脂7.8 g/L，培养30 d后生根率达到80.00%；最后组培苗通过炼苗移栽至装有育苗土（沙∶土∶基质=1∶1∶1）的穴盘中，10～15 d后成活率可达65%以上。     

杜仲愈伤组织的诱导及植株再生的研究

在附加不同浓度ＮＡＡ,６—ＢＡ的ＭＳ培养基上对杜仲的下胚轴和子叶进行愈伤组织的诱导并获得两类不同的愈伤组织,一类是白色的结构松散的非胚性愈伤组织,虽然能继代培养,但在附加较高浓度的６─ＢＡ的ＭＳ培养基上都不能再生植株;另一类是黄绿色的结构紧密的有颗粒状突起的胚性愈伤组织．在附加适量的６—ＢＡ的ＭＳ培养基上能较容易再生小植株。实验表明,杜仲的下胚轴和子叶在附加１．０ｍｇ／ＬＮＡＡ和１．０ｍｇ／Ｌ６—ＢＡ的ＭＳ培养基上能１００％诱导成胚性愈伤组织;胚性愈伤组织在附加０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ和２．５ｍｇ／Ｌ６—ＢＡ的ＭＳ培养基上培养,植株再生频率高达９２％;小植株转移到附加１．５ｍｇ／Ｌ的ＩＢＡ的１／２ＭＳ培养基上,１５ｄ左右长出较粗的根。