农杆菌介导的薰衣草愈伤组织遗传转化

选用带有天山雪莲冷诱导蛋白基因的栽体pCAMBIA1304,通过根癌农杆菌EHA105介导,将其转到薰衣草愈伤组织中.经潮霉素筛选,获得抗性愈伤组织,抗性愈伤率为35.3%.经GFP瞬时检测和PCR检测,表明外源基因已经整合到薰衣草基因组中.从而有可能提高薰衣草的抗寒性.     

抗生素对薰衣草愈伤组织诱导和生长的影响

研究了卡那霉素（Kanamycin）和头孢霉素（Cefotaxime）对法国孟士德薰衣草（Lavandula angustifolia,cv．Munstead）愈伤组织诱导和生长的影响。结果表明：在以卡那霉素为抗性选择标记时,叶盘的选择压力为10mg／L,愈伤组织的选择压力为20mg／L;在以头孢噻肟钠为抑菌剂用于薰衣草叶盘遗传转化实验时,其浓度为200mg／L时即可有效抑制农杆菌的生长,同时又不会对薰衣草愈伤组织产生明显的伤害作用。     

薰衣草高频植株再生系统的建立

以薰衣草叶片为外植体,建立了薰衣草高频植株再生系统,为薰衣草规模化快繁和遗传转化体系的建立奠定了基础.以6-BA,NAA,IBA,Ce(NO3)2,Na2MoO4及蔗糖为实验因子,芽分化率为测定指标,通过L18(61×36)正交实验,筛选了薰衣草芽分化的最佳组合:MS培养基中含有6-BA 2.0 mg/L,NAA 0.5 mg/L,IBA 0.15 mg/L,Ce(NO3)2 10 mg/L,Na2MoO4 0.5 mg/L及蔗糖15 g/L.通过L9(34)正交实验,筛选了1种宜于薰衣草生根的理想培养基,即MS+IAA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖15 g/L+活性炭1.0 g/L.     

大赖草总DNA转化小麦叶片mRNA差异显示技术中总RNA提取和反转录活性研究

[目的]研究大赖草总DNA转化小麦叶片mRNA差异显示技术中总RNA的质量及反转录活性。[方法]在大赖草总DNA转化小麦幼苗叶片mRNA差异显示相关试验中,利用改进的TRIzol法,从幼苗叶片中提取总RNA,紫外光谱分析,1.2%琼脂糖电泳检测,并进行随机引物RT-PCR扩增。[结果]OD260 nm/OD280 nm比值为1.95～1.98;总RNA和RT-PCR电泳条带均表现出整齐、清晰。[结论]获得的总RNA质量好、纯度高,有很高的反转录活性,完全适合于进一步的分子生物学研究。     

新疆雪莲体外直接器官发生的快繁研究

以新疆雪莲无菌苗的下胚轴、子叶、真叶和根为外植体,在MS基本培养基上培养,探索新疆雪莲体外直接器官发生的快繁途径。结果表明:新疆雪莲不同外植体直接再生不定芽的效果不同,以真叶为外植体,直接再生芽频率最高,在MS 6-BA1.0 mg/L(单位下同) NAA0.1 2,4-D0.1上,30 d芽诱导率可达66%;在MS 6-BA0.5 NAA0.05上,芽的增殖生长效果好;在1/2MS NAA0.1上,25 d内生根率达84.7%;在珍珠岩∶腐叶土为1∶3的基质中炼苗,成活率达89.1%。     

抗生素对薰衣草愈伤组织诱导和生长的影响

研究了卡那霉素(Kanamycin)和头孢霉素(Cefotaxime)对法国孟士德薰衣草(Lavandula angustifolia,cv. Munstead)愈伤组织诱导和生长的影响.结果表明:在以卡那霉素为抗性选择标记时,叶盘的选择压力为10 mg/L,愈伤组织的选择压力为20 mg/L;在以头孢噻肟钠为抑菌剂用于薰衣草叶盘遗传转化实验时,其浓度为200 mg/L时即可有效抑制农杆菌的生长,同时又不会对薰衣草愈伤组织产生明显的伤害作用.     

新疆雪莲胚性愈伤组织的诱导及原生质体分离

以新疆雪莲无菌叶片为材料,诱导其产生胚性愈伤组织,再以胚性愈伤组织为分离原生质体的起始材料,研究质壁分离时间、渗透压浓度、酶液组合、酶解时间等因素对其原生质体分离效果的影响。结果表明:对诱导胚性愈伤组织有较好效果的培养基组合为:MS+2,4-D 0.1mg/L+BA 0.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L+葡萄糖30 g/L;原生质体分离最佳体系为:含纤维素酶2.5%、离析酶0.2%、果胶酶1%、MES 0.1%和甘露醇10%的酶解液,在温度(26±1)℃,pH 5.8条件下酶解14~16 h,游离原生质体的产量和活性均较高。     

新疆雪莲的体细胞胚胎发生及植株再生

通过对新疆雪莲进行胚性愈伤诱导培养(MS+2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 0.05 mg/L),体细胞胚胎发生诱导培养(MS+2,4-D 0.1mg/L),体细胞胚胎分化培养(MS+PEG 25 g/L),体细胞胚胎萌发(MS+GA35 mg/L)和壮苗培养(MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 0.3 mg/L),首次通过体细胞胚胎发生途径实现了新疆雪莲的植株再生,生根率100%,成活率达60%,为其大规模人工栽培奠定了基础。     

采用一种简易气升式反应器生产阿魏菇液体菌种

[目的]研究阿魏菇的液体制种技术。[方法]采用一种自制的简易气升式生物反应器研究了阿魏菇液体制种技术,通过正交实验探讨了阿魏菇的最优发酵培养基配比。[结果]不同菌株在不同培养基配方中的菌丝生物量有明显差异,蔗糖(碳源)对菌丝生物量的影响最大,一定量的蛋白胨(氮源)能够促进菌丝生长,少量的K+和Mg2+有利于菌丝生长,但它们对阿魏菇菌丝生长速度影响较小且均未达到显著水平(P>0.05)。最优培养基为:3.00%蔗糖+0.50%蛋白胨+0.10%KH2PO4+0.05%MgSO4。用该培养基在自制气升式生物反应器中进行阿魏菇液体培养,10 d后菌丝生物量达到25 g/L。空气流速在0.08~0.12 m3/h有利于菌丝的迅速生长且形成的菌丝球大小均一。栽培实验表明,通过气升式反应器生产的液体菌种可以正常出菇。[结论]阿魏菇液体菌种具有菌丝生长快、制种和生产周期短等优点,是实现阿魏菇规模化、工厂化生产的必然选择。     

薰衣草高频植株再生系统的建立

以薰衣草叶片为外植体,建立了薰衣草高频植株再生系统,为薰衣草规模化快繁和遗传转化体系的建立奠定了基础。以6-BA,NAA,IBA,Ce(NO3)2,Na2MoO4及蔗糖为实验因子,芽分化率为测定指标,通过L18(61×36)正交实验,筛选了薰衣草芽分化的最佳组合:MS培养基中含有6-BA2.0mg/L,NAA0.5mg/L,IBA0.15mg/L,Ce(NO3)210mg/L,Na2MoO40.5mg/L及蔗糖15g/L。通过L9(34)正交实验,筛选了1种宜于薰衣草生根的理想培养基,即MS+IAA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖15g/L+活性炭1.0g/L。