健康家鱼肠道细菌中的嗜水气单胞菌及其胞外酶分布

从健康鲢、鲤、草鱼和团头鲂肠道食物和肠壁样品中分离出１８５株细菌菌株，利用糊精一品红培养基、氧化酶测定法和淀粉酶测定法对其中的嗜水气单胞菌颁作了调查，鉴别出１９株嗜水气单胞菌、对这批菌株进一步进行了蛋白酶、ＣＭＣ酶、滤纸酶和溶血毒素调查，发现肠道嗜水气单胞菌分别产蛋白酶和ＣＭＣ酶，但均不产滤纸酶和溶血毒素。本文结果证明了肠道嗜水气单胞是肠道正常微生物鲜落之一，对鱼体有一定的有利作用。     

江西地区嗜水气单胞菌流行株的生物学特性

从江西不同地区分离到多株嗜水气单胞菌(Ah)，选取有代表性的14株菌做生物学特性鉴定。发现这14株Ah培养特性一致，生化特性除糖类发酵存在差异外，其它均一致。均可产生强的毒素，对动物的致病性均很强。14株Ah菌对环丙沙星、痢特灵、阿米卡星、卡那霉素均高敏。     

鲤鱼嗜水气单胞菌的分离与鉴定

[目的]分离、鉴定鲤鱼嗜水气单胞菌。[方法]从具有典型细菌性败血症症状的病鱼或濒死鱼中分离到2株优势菌,经分离培养、人工感染试验、毒力因子和16S rRNA基因序列的测定,研究分离菌的形态、生理生化特征及致病性。[结果]分离到的2株优势菌的菌落形态特征基本一致,经鉴定,确认为嗜水气单胞菌。无菌滤液试验表明,鲤鱼细菌性败血症不是由病毒引起的。腹腔注射分离菌菌悬液的鱼在7 d内全部死亡,人工感染试验的症状与自然发病相似,且再次感染后又可分离到该菌株。分离提纯的致病菌株产生了β-溶血环,经蛋白酶试验为阳性。16S rRNA基因序列同源性分析发现同源性为98%。[结论]嗜水气单胞菌是鲤鱼细菌性败血症的致病菌。     

石龟嗜水气单孢菌的分离鉴定及药敏特性研究

从患病石龟上分离获得1株革兰氏阴性杆菌,菌体细长、无芽孢和荚膜,在山羊血琼脂平板上能形成明显的β-溶血圈。经小白鼠致病性试验、生理生化鉴定及16SrRNA序列分析,确定该分离株为致病性嗜水气单孢菌。经同源性及遗传进化分析发现,该菌株与嗜水气单孢菌B27、HSO2（Genbank登录号：FJ494900．1、FJ562211．1）同源性高达99．5％。而药敏试验表明,该分离株除了对赛福欣（复方恩诺沙星）、肠清（复方乳酸环丙沙星）2种药物高度敏感外,对大部分抗菌素均不敏感。     

辽宁地区养殖淡水鱼感染嗜水气单胞菌的流行病学调查

通过RS选择性培养基和针对16S rDNA与气溶素基因的双重PCR检测技术,对采集于辽宁省不同地区、不同鱼类、不同症状病鱼感染的嗜水气单胞菌进行了系统的流行病学调查,并对致病性嗜水气单胞菌进行了毒力验证试验及对抗菌药物的敏感性试验。结果发现,51株临床样本中有26株分离菌扩增得到685 bp大小的目的片段,证明为嗜水气单胞菌,占分离细菌总数的50.98%,占绝对的优势,其中以出血症状为主的病鱼分离的菌占23.99%,以肠炎为主症状的病鱼分离菌占17.99%,以烂鳃症状为主病鱼分离菌占9%。26株嗜水气单胞菌中有17株同时扩增出252 bp大小的气溶素基因(aerA),表明这17株分离菌为致病性嗜水气单胞菌。人工感染试验结果表明,致病性嗜水气单胞菌均有毒力且毒力大小差异明显。药敏实验结果显示,嗜水气单胞菌不同分离株对抗生素的敏感性差异很大,对先锋V耐药率高达90%,对新生霉素、红霉素、利福平、四环素耐药率也相对较高,分别为56.2%,42.7%,37.5%,31.1%,而对氟哌酸、链霉素、庆大霉素则较敏感。该结果对建立片区病原库,揭示辽宁地区淡水养殖鱼类感染的嗜水气单胞菌的地理分布、毒力大小、耐药性差异,进而弄清嗜水气单胞菌的表型、基因型差异具有重要理论参考意义。     

鳖的嗜水气单胞菌的分离及其特性鉴定

从杭州市某甲鱼养殖场发生的一种持续性慢性不明传染病病死甲鱼中，分离到多株细菌，用玻板凝集试验筛选出与嗜水气单胞菌抗血清发生强阳性反应的两株细菌，经形态、染色、生长特性研究及生化反应鉴定，确定这两株细菌均为嗜水气单胞菌，但其中一株具毒力，在血琼脂上呈β－溶血，能在４小时内致死小白鼠，而另一株无毒力，不溶血     

鳖的嗜水气单胞菌的分离及其特性鉴定

从杭州市某甲鱼养殖场发生后咱持续性慢性不明传染病病死甲鱼中，分离到多株细菌。用玻板凝集试验筛选出与嗜水气单胞菌抗血清发生强阳性反应的两株细菌，经形态、染色、生长特性研究及生化反应鉴定，确定这两株细菌均为嗜水气单胞菌，但其中一株具毒力，在血琼脂上呈β－溶血，能在４小时内致死小白鼠，而另一株无毒力，不溶血。     

东北三省致病性嗜水气单胞菌快速检测

从东北三省养殖鱼类体内分离到21株嗜水气单胞菌,通过生理生化方法对该菌进行初步鉴定,然后根据已发表的嗜水气单胞菌16S rDNA基因和气溶素基因(Aer)的保守序列,设计2对引物,利用PCR方法对所分离到的21株嗜水气单胞菌以及参考株进行PCR扩增.结果表明,相对于常规的微生物生理生化检测,PCR对嗜水气单胞菌的检出率为90.48%.本方法的建立为常规理化检测方法提供辅助手段,从而更加有效、快捷的检测致病性嗜水气单胞菌,对东北三省地区水产养殖动物的疾病防治、流行病学调查等具有重要意义.     

水产动物致病性嗜水气单胞菌的分离鉴定

从病鳖和鱼体内分离到7株细菌(BA1、BA3、BA5、BA6、BA7、XA5、XA13),经形态学观察、生理生化特性和血清学鉴定,确定为嗜水气单胞菌。动物感染试验结果表明,BA1和BA3株为致病性嗜水气单胞菌,对鲫鱼的致死率分别为66.7%、100%。免疫电泳分析结果表明,致病性嗜水气单胞菌BA3株与非致病性BA6株之间存在共同抗原。     

嗜水气单胞菌相关毒力基因的研究进展

嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）是人、畜和水生动物共患的条件致病菌。目前发现其致病性与多种毒力因子相关。主要对外毒素、外膜蛋白和信号相关蛋白等毒力因子相关基因的研究进展作一综述,为嗜水气单胞菌病的鉴定、预防和治疗提供参考。     

一株琼脂粉降解细菌的分离

用画线接种的方法把58株从堆肥中分离的细菌接种于只含琼脂粉和水分的平皿上,室温培养数天后发现有1株细菌(BR5-1)能明显长出菌落。用这株细菌接种于含琼脂粉(2、8g·L-1)的无菌水悬液以及对照生理盐水和LB中,摇床培养48h后稀释倒平皿测活菌数。结果表明,活菌浓度在含琼脂粉的液体中(6.5×103、6.0×103cfu·mL-1)明显比在对照处理生理盐水(6.1×102cfu·mL-1)中高,但是明显比在对照处理LB培养基(1.1×108cfu·mL-1)中低。试验表明这株菌能够降解琼脂粉。     

Isolation of a Bacterium Strain Degraded Agar

One in 58 strains of bacteria isolated from the compost showed clear colonies after a few days of growth on the plates containing medium made of only agar and water.Water suspension contained only agar (2 and 8g·L -1 ) with two controls (normal saline,LB medium) was inoculated with the bacterium BR5-1 to see whether there was an increasement of the alive bacteria concentration after 48 h of the growth.The results showed that there was a significant rising of the alive bacteria concentration in the agar suspension (6.5×10 3 and 6.0×10 3 cfu·mL -1 ) compared to that in the normal saline control (6.1×10 2 cfu·mL -1 ),and it was far lower than that in LB (Luria-Bertani) control (1.1×10 8 cfu·mL -1 ).In conclusion,the bacterium strain BR5-1 could degrade agar.     

鸡有益乳杆菌的分离鉴定

用乳杆菌选择培养基（ＬＳＣＭ）从鸡直肠内容物中分离出五株革兰氏阳性杆菌,分别是嗜酸乳杆菌２株（ＬＢ１、ＬＢ２）、唾液乳杆菌液亚种１株（ＬＢ３）、短乳杆菌１株（ＬＢ４）、发酵乳杆菌１株（ＬＢ５）。五株菌对雏鸡安全,对小白鼠无致病性。     

大肠杆菌质粒与喹诺酮耐药性关系的研究

为研究大肠杆菌质粒与喹诺酮耐药性的关系，临床分离32株耐喹诺酮药物的致病性大肠杆菌，经质粒消除剂溴化乙淀（EB）、硫酸黄连素（BS）分别处理24h和48h，其中4株对喹诺酮的耐药水平明显降低。经消除剂作用的菌株提取质粒进行电泳检测， 结果只有大肠杆菌CE01[其中氧 氟沙星（OFL）的最小抑菌浓度（MIC）＞50μg/mL]的质粒带发生变化，且该质粒的转移与喹诺酮抗性有关。经消除剂BS作用24h，在含OFL 20μg/mL的琼脂不能生长的CE01XC1菌株其质粒带浓度显著降低；作用48h后，在含OFL 20μg/mL琼脂不能生长的CE01XC2菌株其质粒带被消除；BS作用48h后在含OFL 20μg/mL琼脂仍然生长的CE01XC3菌株及质粒带几乎未改变。另外3株耐药水平降低的菌株质粒带无变化。结果表明：大肠杆菌CE01含有与喹诺酮药物抗性有关的质粒，这一质粒被消除剂消除后，CE01菌株的耐药性显著下降，对OFL的MIC由大于50μg/mL变为小于20μg/mL。其它3株经质粒消除剂作用耐药水平降低的菌株可能是细胞膜通透性改变导致耐药。     

我国淡水养殖动物主要致病性水霉菌病原的分析

应用ITS(internal transcribed spacer,ITS)区分子系统发育进化分析法和限制性片段长度多态性分析法(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP)相结合,对近年来分别采集于中国上海、江苏、江西、四川、河北、浙江、湖北等7个主要淡水养殖区的60株疑似致病性水霉菌(Saprolegnia)进行鉴定分类,并系统分析了我国已报道的致病性水霉菌的分类情况,比较了分别分离自鱼体和卵的多子水霉的生物学特性。研究结果表明,60株疑似水霉菌分为10个基因型,其ITSLPCR-LRFLP谱型一致属于典型多子水霉(Saprolegniales ferax)、寄生水霉(Saprolegniales parasitia)和澳大利亚水霉(S.australis)分组类型;ITS系统发育进化分析结果显示,我国致病性水霉菌以多子水霉和寄生水霉为主,二者为我国淡水养殖主要的致病性水霉菌病原。此外,对鱼体和卵来源的多子水霉生物学特征进行比对后发现,二者没有明显差异,同一致病菌株既可感染鱼体也可感染卵。此研究的开展丰富了我国致病性水霉菌分类统计的生物学资料,为水霉病预警和药物防治技术的开发提供了重要的参考价值。     

mtDNA A3243G 点突变小鼠模型的建立及其致病机制探讨

    利用显微注射线粒体技术建立转人线粒体小鼠模型,研究外源突变mtDNA在不同组织的分布及遗传规律,探讨mtDNA A3243G点突变对线粒体功能的影响.从健康成人及2型糖尿病患者(携带mtDNA 3243A-G突变)血液标本中分离有活性的线粒体,将其显微注射至小鼠受精卵,胚胎移植,产出仔鼠后利用分子生物学方法检测人mtDNA及mtDNA A3243G点突变.获得嵌合体小鼠后,对其空腹血糖和全血乳酸进行测定,并使用荧光法和比色法分析A3243G点突变小鼠重要脏器组织细胞活性氧生成量(ROS)、线粒体复合酶Ⅰ和Ⅳ活力及线粒体ATP合成活力的变化.研究结果显示:在1只雌性(转健康人线粒体)和2只雄性小鼠(转患者线粒体)中检测到人mtDNA,其中2只雄性小鼠携带mtDNA 3243A-G突变;将嵌和体雌鼠与野生型C57BL/6J 雄鼠交配后,在1只后代仔鼠中检测到人mtDNA;人mtDNA仅在嵌合小鼠的部分组织中表达.在含有mtDNA A3243G突变的组织中发现,线粒体复合酶Ⅰ、Ⅳ活力降低,ATP合成速率下降,ROS水平升高,说明A3243G点突变能损伤线粒体正常功能从而导致疾病的发生.综上所述,本研究利用显微注射法成功建立了嵌和小鼠,引入了致病性的点突变,为线粒体疾病的研究提供了良好的思路.     

降解秸秆的细菌和放线菌的分离与筛选

用秸秆粉部分代替LB、高氏培养基中的碳源,通过延长培养时间从土样中分别富集降解秸秆的细菌、放线菌,用稀释倒平皿挑取单菌落法通过菌落形态差异分离出细菌29株、放线菌29株。用秸秆粉培养基定性鉴别法鉴别出其中有8株细菌、10株放线菌能降解秸秆。测试了硝酸铵、酵母粉和土壤浸液等添加物对能降解秸秆的细菌和放线菌在秸秆粉培养基上生长的影响。结果表明,酵母粉对细菌的生长具有明显促进作用,其他添加物对供试菌的生长影响较小。     

耐受甲醛并能利用甲醇细菌的分离及其基因组文库的构建

从污水样品筛选出能利用甲醇的菌株A和B,经16S rDNA测序分析,鉴定为芽孢杆菌(Bacillussp.KM01)和肺炎克氏杆菌(Kleb-siella pneumoniae)。甲醛耐受能力的测试表明,这两种分离菌对甲醛具有较强的耐受能力,能在含8~15 mmol/L甲醛的LB培养基上生长。Southern杂交分析结果说明,这两株菌的基因组中有兼性甲基营养菌6-磷酸己酮糖合成酶(HPS)和6-磷酸果糖异构酶(PHI)基因的同源序列。以pUC118为载体构建了这两种分离菌的基因组文库,进一步的检测结果说明所构建的基因组文库质量符合要求。     

Fosfomycin Resistance in Avian Pathogenic Escherichia coli Isolates

Fosfomycin, a broad-spectrum antibiotic against both Gram-positive and Gram-negative bacteria, is very important in the clinic but many fosfomycin-resistant bacteria have been isolated from patients. In this study, the resistance mechanism of three fosfomycin-resistant avian pathogenic Escherichia coli (APEC) strains (JE1, IF7 and CD11) isolated from septicemic chickens were analyzed. The results showed that their fosfomycin-resistance mechanisms were different. An alteration in the glpT transport system was the main reason of the fosfomycin-resistance mechanisms of strain IF7. Compared with the control stain BL21, the capacity of fosfomycin-uptake was low in all these three stains (JE1>IF7>CD11). Sequence results of murA showed that there were more than 10 sites of nucleotide mutation, but only one amino acid mutation T116A showed in CD11. Real-time detection test showed that the expression level of the murA gene of the three stains was significantly increased (four times increase in strain CD11 and two times increase in strains JE1 and IF7). The transformation and recombinant test showed that the recombinant bacteria with the murA of JE1 and CD11 showed high minimal inhibitory concentration (MIC) against fosfomycin. From the results of this research, it showed that most of the fosfomycin-resistance mechanisms once showed in patient bacteria have appeared in the APEC strains and the fosfomycin-resistance mechanism of the three APEC isolates was different.     

草莓根腐病菌拮抗细菌的分离与筛选

为了筛选对草莓根腐病具有拮抗作用的细菌,本试验采用土壤稀释分离法、对峙培养法等方法。从昌平区兴寿镇草莓基地采集的16份土样中分离得到106株细菌。以草莓根腐病菌为靶标,筛选出7株具有明显拮抗作用的菌株,其中1-9和8-3菌株抑菌范围较广,对3种草莓根腐病菌具有抑制作用;2-4菌株对草莓根腐病菌的抑菌范围最窄,仅对1种草莓根腐病菌有抑制作用。对其他供试植物病原真菌抑菌谱测定得知,1-9,12-4,16-1等菌株抑菌范围较广,对供试的7种以上的植物病原真菌均有抑制作用。拮抗细菌生物膜和代谢产物检测结果表明,7株拮抗细菌都能产生生物膜和吲哚乙酸,推测这些菌株具有较强的定植能力和促生效果。