用SRAP标记分析黄瓜品种遗传多样性及鉴定品种

利用相关序列扩增多态性（SRAP）分子标记技术对35份不同类型的黄瓜品种进行了指纹图谱遗传多态性分析，从38对引物组合中筛选出3个多态性高的引物组合，此3对引物扩增得到的图谱可将35份黄瓜品种完全区分开来。依据SRAP指纹图谱聚类分析结果确定了品种之间的遗传距离以及鉴别的难易程度。用SRAP分子标记技术得到了两个黄瓜品种杂交组合F1与亲本的指纹图谱中的鉴别条带，可以用于黄瓜杂交种的纯度检测。     

利用SSR标记鉴定柚和杂柑品种

采用SSR技术,从105对柑桔SSR引物中,筛选出10对在柑桔大类品种间多态性位点丰富、带型清晰、重复性好的SSR引物.利用其中5对SSR引物对5个柚和7个杂柑品种DNA进行PCR分析,共扩增出35条谱带,其中27条谱带呈现多态性,引物多态性带纹比例均在60%以上.扩增片断的大小集中在100 bp～500 bp之间.分别针对柚和杂柑品种筛选出两个高效的引物组合(SSR17、SSR15、SSR16、SSR12与SSR17、SSR18、SSR16),利用这两组引物成功构建出了我国主推的5个柚和7个杂柑品种的特征指纹图谱.并应用指纹图谱自动识别软件Gel 2.0对各品种指纹图谱进行识别,建立了相应品种的指纹模式图谱库.     

国产糖甜菜品种SSR指纹图谱的构建

为了构建14份国产甜菜品种的指纹图谱,利用6个差异较大的甜菜品系对50对SSR引物进行筛选,共选出7对多态性高、带型清晰、重复性好的SSR引物。利用这7对SSR引物对国产14份糖甜菜品种进行扩增,共获得40条谱带,其中多态性位点28个,多态性比率达75%;每对引物产生的等位基因数为5-8个,平均6.6个。利用其中三对引物S6,S13和BVGTT6构建了14份国产甜菜品种的DNA指纹图谱,结果表明,每个甜菜品种有唯一的数字指纹区别于其它品种,说明SSR标记适用于甜菜品种纯度和真实性的鉴定,同时甜菜品种指纹图谱库的构建也为将来可能出现的甜菜品种纠纷打下坚实的技术基础。     

适合甜菜品种鉴定的SRAP核心引物的筛选

为筛选适合甜菜品种纯度鉴定的SRAP核心引物,以12个进口国外甜菜品种为材料,对546对SRAP引物组合进行扩增,利用8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离,选择适合甜菜品种纯度鉴定的SRAP核心引物组合。结果从546对SRAP引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富、重复性好的引物组合23对,这23对引物组合共扩增出177条多态性条带,引物的PIC值均大于0.6。平均每对引物扩增7.7条多态性条带,从理论上讲,这些核心引物完全可以实现对现有甜菜品种的鉴定。     

主要番茄品种的分子鉴别研究

采用了RAPD、RGA和SRAP分子标记技术对22个番茄品种进行了分子鉴别的研究。通过引物筛选,选用了7个RAPD随机引物,扩增后共产生了17个多态性位点;2对RGA引物,产生了12个多态性位点;1对SRAP引物,产生了8个多态性位点。分析单引物的品种鉴别能力发现,RGA和SRAP标记具有较高的鉴别效率。为了鉴别22个番茄品种,分析了双引物组合和三引物组合的鉴别能力,双引物组合不能完全区分22个番茄品种,利用引物BI26和PK1 PK2再加上S91或S92中的任一个就可将22个番茄品种区分开来,并获得各品种独特的核酸指纹。另外,通过聚类分析发现,现代番茄品种之间存在着较为复杂的亲缘关系,用有限的标记位点很难取得理想的聚类结果。     

SRAP标记技术在花生种子纯度鉴定中的应用

研究了分属3个市场型的10个中国花生栽培种的序列相关扩增多态性(SRAP)。结果表明, SARP技术可以揭示花生栽培种的遗传差异。在所试验的74对SRAP引物中,2对只获得了单态性条 带,其余72对总共产生了1,812条带,其中1035条(57．12％)为多态性带,每对引物组合平均获得25．16 条带、14．38条多态性带。在这73对引物组合中,总带数和多态性条带的数目分别为7-63和2-44 条。10个花生栽培种的简单匹配相似系数为0．6967-0．9171不等,根据SRAP指纹图谱进行聚类分析 可将这10个品种分为5类。用64对引物筛选作图亲本24-3与B4,获得329条多态性条带。此项研究 为花生品种鉴定和遗传研究提供了新的DNA分子标记技术手段。     

32个甜菜品种指纹图谱构建与遗传多样性分析

为了对国外引进的甜菜品种进行鉴别以及分析不同甜菜品种之间的亲缘关系,利用SSR标记构建了32份引进甜菜品种的指纹图谱并进行了遗传多样性分析。从101对SSR引物中筛选出了21对谱带清晰、易于识别的引物,这21对引物共检测出127个等位位点,其中多态性位点为107个,多态性比率为83.6%,每对SSR引物扩增出的等位位点数为2~11个,平均每对引物扩增出6.1个基因型,扩增的条带大小在90~500 bp之间。利用3对引物SB04,S6和S7的引物组合构建的指纹图谱就能够区分32个品种。聚类分析结果表明,在遗传距离0.17处,所有的供试品种被分为3类,从分子水平上说明甜菜品种之间的遗传基础比较狭窄。聚类分析结果与甜菜品种的来源具有很好的一致性,基本上是同一公司或者同一国别的品种被聚在了一起。     

适合于甜菜品种鉴定的ISSR核心引物的筛选

探寻适合甜菜品种鉴定的ISSR引物,用以构建甜菜品种的指纹图谱。利用一个品种对全部100条ISSR引物进行退火梯度实验,然后利用16个进口甜菜品种在每个引物的最佳退火温度下对全部引物进行扩增,筛选适合甜菜品种纯度鉴定的ISSR引物。结果从100条ISSR引物中筛选出多态性高、扩增条带清晰、重复性好的引物16条,这16条ISSR引物总共扩增100条多态性条带,引物的PIC值均大于0.6,从理论上讲,这些核心引物完全可以实现对现有甜菜品种的鉴定。     

主要番茄品种的分子鉴别

采用了RAPD、RGA和SRAP分子标记技术对22个番茄品种进行了分子鉴别的研究。通过引物筛选,选用了7个RAPD随机引物,扩增后共产生了17个多态性位点;2对RGA引物,产生了12个多态性位点;1对SRAP引物,产生了8个多态性位点。分析单引物的品种鉴别能力发现,RGA和SRAP标记具有较高的鉴别效率。为了鉴别22个番茄品种,分析了双引物组合和三引物组合的鉴别能力,双引物组合不能完全区分22个番茄品种,利用引物BI26和PK1+PK2再加上S91或S92中的任一个就可将22个番茄品种区分开来, 并获得各品种独特的核酸指纹。另外,通过聚类分析发现,现代番茄品种之间存在着较为复杂的亲缘关系,用有限的标记位点很难取得理想的聚类结果。     

高丹草种质资源SRAP指纹图谱构建及遗传多样性分析

利用SRAP分子标记技术构建了22份高丹草品种的指纹图谱。该指纹图谱可以准确区分供试的所有22个高丹草品种,置信概率达到99.9 999%,为高丹草品种划分提供了基础。利用筛选出的19个多态性较好的SRAP引物组合对22个高丹草品种进行遗传多样性分析鉴定,共扩增出450个位点,其中多态性位点369个;平均每个引物组合产生23.6个位点和19.4个多态性位点,平均多态性水平为82.2%。通过采用UPGMA方法进行聚类分析,遗传相似系数在0.66～0.94之间,以遗传相似系数0.674为阈值,可将供试材料分为2个类群。     

甘蓝抽薹性状基因的分子标记定位

选用耐未熟抽薹性状差异较大的甘蓝亲本材料2002-45和2002-49配制杂交组合,并构建F2分离群体.用60个SRAP引物组合对F2代分离群体进行PCR分析,共筛选到19个有多态性的引物组合,得到91条多态性条带.其中ME7EM2c和ME8EM2d两个标记与抽薹性状较紧密连锁,遗传距离分别为27.5 cM和31.7 cM.这两个标记可用于甘蓝耐未熟抽薹的分子标记辅助选择育种.     

主要樱桃番茄品种的分子鉴别

采用RAPD、RGA和SRAP分子标记技术对10个主要樱桃番茄品种进行了分子鉴别的研究。14个RAPD随机引物扩增后共产生了29个多态性位点;1对RGA引物产生了10个多态性位点;1对SRAP引物产生了5个多态性位点。分析单引物的品种鉴别能力发现,RGA和SRAP标记具有较高的鉴别效率。通过双引物组合分析发现,利用RAPD引物S311和RGA引物组PK1＋PK2可以将10个樱桃番茄品种区分开来,获得了各品种独特的核酸指纹。另外,在标记位点较多的情况下聚类结果基本上可以反映各品种之间生物学性状的相似性及亲缘关系的远近,但当标记位点数过少情况下,在一定程度上将使聚类结果失去本意。     

贵州核桃农家品种种质资源遗传多样性的SRAP分析

采用SRAP分子标记技术对采自贵州省盘州市、普安县、贵阳市、兴义市、毕节市、威宁县、沿河县种源地的168份核桃农家种样品进行遗传多样性分析。结果表明,从132对引物组合中筛选出了19对图谱带型清晰、丰富、重复性好的引物组合;168份样品用这些引物组合共扩增出309条清晰可重复的条带,其中多态性条带281条,多态性比率为90.94%;聚类分析结果表明,在相似系数0.62处,所有核桃样品聚类为2个类群,在相似系数0.72处,所有核桃样品聚类10个类群,表明这些农家品种具有亲缘关系;在所研究的种源中,兴义市的遗传多样性水平最高。     

大白菜紫色性状的SRAP连锁标记的筛选

以紫色大白菜BC1回交群体的120个单株为材料,采用混合集群分析法构建大白菜的紫色与非紫色池,应用SRAP分子标记技术筛选两池间的多态性,并对与紫色性状相关的QTL和对应的连锁关系进行了初步分析.结果表明,在144对SRAP引物组合中,仅有8对引物组合可以在两池间扩增出较稳定的多态性产物.应用获得的8对引物组合对120个单株的DNA进行SRAP分析,初步获得3个与紫色性状相关的QTL:qp-c1-1、qp-c1-2和qp-c1-3,同时获得6个与这3个QTL连锁的标记,其中m7e11-490、m6e8-210、m7e11-900n和m6e8-100n 4个标记与其最近QTL位点的连锁距离分别为0.1 cM、0.1 cM、0.2 cM和2.2 cM.这为紫色白菜的分子辅助育种提供了科学依据.