柑橘胼胝质合成酶基因家族的表达分析

胼胝质由胼胝质合成酶合成,胼胝质沉积是植物对入侵病原的防御反应。为了探索胼胝质合成酶(Callose synthase,CalS)基因在柑橘中对黄龙病的应答情况,从甜橙基因组中筛选并利用生物信息学分析了柑橘胼胝质合成酶(CsCalS)家族的12个基因。这些基因编码的氨基酸序列与拟南芥中的胼胝质合成酶具有较高的同源性。荧光实时定量PCR结果显示,CsCalS5和CsCalS12在柑橘健康叶片中的表达量高于其他胼胝质合成酶基因。比较黄龙病感病材料和健康对照材料,发现CsCalS5、CsCalS7和CsCalS8在感病的‘砂糖橘’和‘强德勒’柚中均上调表达,可能参与柑橘对黄龙病病原的应答反应。     

柑橘CsMYB41和CsMYB63响应溃疡病菌侵染的表达

MYB转录因子不仅在植物生长发育中起着重要作用，且在植物抗病反应中承担着重要的调节功能。本研究中以溃疡病感病品种纽荷尔脐橙（Citrus sinensis Osbeck）和抗病品种四季橘（C. madurensis）为材料，基于前期构建的溃疡病诱导柑橘转录组数据库，筛选获得2个受柑橘溃疡病菌Xanthomonas citri subsp. citri(Xcc)显著诱导的MYB基因：CsMYB41(Cs1g06220)和CsMYB63(Cs4g12760)。利用PCR技术克隆了纽荷尔脐橙的CsMYB41和CsMYB63，并对其结构特征及表达特性进行分析。PCR克隆测序分析发现，这2个基因的全长分别为1 304 bp、1 398 bp，开放阅读框（ORF）为1 047 bp、1 170 bp，各编码349、390个氨基酸。蛋白质同源序列比对和结构分析表明，这2个基因属于MYB类转录因子家族中的R2R3-MYB亚家族；进化树分析表明，CsMYB41和CsMYB63蛋白分别与可可、蓖麻等MYB41和MYB63蛋白高度同源。亚细胞定位结果显示，CsMYB41和CsMYB63定位在细胞核中。实时荧...     

纽荷尔脐橙贮藏枯水相关ESTs分离与初步分析

 为分析柑橘果实贮藏过程中枯水相关特异基因的表达情况,以纽荷尔脐橙（Citrus Sinensis Osbeck）采摘后贮藏至略见枯水果实的果肉为测验方（Tester）,以刚采摘果实的果肉为驱动方（Driver）,采用抑制性差减杂交（Suppression Subtractive Hybridization,SSH）技术成功构建了贮藏果实差减cDNA文库,共获得656个阳性克隆。随机挑取克隆进行菌液PCR分析,插入片段长度主要集中在100 ~ 1 000 bp。成功对213个克隆进行测序,获得有效序列143条,经序列分析,共得到53条uniESTs序列。在NCBI基因库中对这53个uniESTs进行BLAST分析,比对结果参照MIPS的分类标准,按功能分为14类,其中参与代谢、能量及蛋白合成的ESTs最多,分别占到了全部ESTs的17%、11%和13%。     

CjFRO2在转基因枳中的整合与表达

三价铁螯合物还原酶（Ferric-chelator reductase,FCR）在植物对三价铁的吸收过程中起着关键作用,导入外源三价铁螯合物还原酶基因是改良植物耐缺铁能力的有效途径。香橙（Citrus junos Sieb.ex Tanaka）是目前表现最好的柑橘耐缺铁砧木之一,在铁胁迫时,香橙三价铁螯合物还原酶基因（...     

74-1矮化枳的离体快速繁殖

矮化密植集约化栽培,可以充分利田地力并促进果园早期丰产,而大量采用矮化砧木又是达到矮化密植的主要途径之一。枳是优良砧木,但不一定都表现矮化。我所品种资源室选出的74-1矮化枳,种子小,只有普通枳的1/3。为了提高发芽率,扩大繁殖系数、满足对良种矮化枳砧的需要,我们进行了本试验,旨在探讨74-1矮化枳的离体快速繁殖方法。     

贵州部分柑橘地方品种遗传背景的SSR分析

利用SSR分子标记技术对5个贵州柑橘地方品种的遗传背景进行分析.结果表明,24对SSR引物在5个地方品种和参与DNA指纹比对的14个栽培品种中共检测到92个等位基因,每个位点的等位基因数变幅为2~7个,平均为3.8个;多态性信息含量(PIC)变化范围在0.36~0.78之间,平均为0.49.经过DNA指纹比对,发现其中5对引物扩增的8条特征谱带可作为地方品种鉴别的参考性标记.利用NTSYS软件进行相似性系数计算,采用UPGMA法聚类,结果显示,相似性系数为0.80,可将5个地方品种划分在不同的亚组中;地方品种米柑和牛肉红金橘均单独成组,其遗传背景独特;土柑与皱皮柑的亲缘关系较近;大果型冰糖橙与冰糖橙的遗传背景相同;红香柚与强德勒柚的遗传背景基本一致.     

柳橙胚愈伤组织耐盐性研究

柳橙(Cirtus sinensis Osbeck)胚细胞无性系(L76-Ⅰ细胞系)的生长量随培养基中NaCl浓度的升高而降低。0.5％NaCl时,生长量约为对照的50％。耐盐临界浓度为2％。巨型细胞数量与NaCl浓度呈负相关。L76—Ⅰ细胞系外渗液电导率与NaCl浓度呈显著负相关。NaCl造成细胞内Na~+积累,K~+、Ca~(2+)、Mg~(2+)、Mn~(2+)、Zn~(2+)含量减少,并对过氧化物酶同工酶酶谱产生明显的影响;过氧化物酶活性受到抑制,且随NaCl浓度升高,活性相应下降。蛋白质氨基酸分析表明,NaCl对其种类几乎没有影响,8种主要蛋白质氨基酸含量与NaCl浓度呈负相关。过氧化物酶活性和几种主要的蛋白质氨基酸含量可作为抗盐细胞系筛选和评价的生理生化指标。试验所得L86—Ⅱ细胞系的耐盐性比L76—Ⅰ细胞系高。     

辐射诱育柑桔无核品系的细胞遗传学研究

 研究了#+(60)Co-γ射线辐照锦橙（Citrus sinensis Osbeck）干种子选育出的7号无核甜橙（9个株系）和8号无核甜橙（5个株系）的花粉育性和花粉母细胞（PMC）减数分裂行为。结果表明，两品系PMC减数分裂终变期和中期Ⅰ有高频率的单价体和多价体；后期到末期出现较高频率的落后染色体、染色体桥、不均等分裂以及低频率的多极分裂、染色体断片和微核等异常现象。这一结果说明，辐射诱发的染色体联会消失和结构变异（倒位、易位）引起PMC减数分裂行为异常，致使两品系花粉高度不育，表现出无核性状。研究结果还表明，两品系的无核性状已基本稳定。     

抗菌肽Shiva A基因在转基因柑橘无性繁殖后代中的遗传与表达分析

为进一步明确外源基因在转基因柑橘无性繁殖后代中的遗传稳定性及目标性状表现,本研究以转双价抗菌肽基因(ShivaA-cecropinB)纽荷尔脐橙(Citrus Sinensis Osbeck)无性繁殖后代植株为材料,通过PCR扩增,Southern杂交和实时定量PCR检测,以及温室抗病性评价分析等,对抗菌肽ShivaA基因在转基因柑橘后代株系中的遗传稳定性进行了研究.结果表明,外源抗菌肽Shiva A基因在转基因及其无性后代中能够稳定整合与表达.Southern杂交分析表明,ShivaA基因在无性繁殖后代基因组中为1个拷贝,而在T0代中为2个拷贝,由此推测T0代植株为混合嵌合体.定量PCR分析表明,ShivaA基因在To代中的表达水平低于其无性繁殖后代.本研究中外源基因的表达与拷贝数的多少成负相关.研究结果为开展转基因柑橘安全性评价提供了有用的实验材料,积累了有效的实验数据.