野生软枣猕猴桃组织培养及褐变处理

以野生软枣猕猴桃嫩芽、幼嫩叶片以及茎段作为外植体,研究野生软枣猕猴桃组织培养整个过程,以建立快速高效的野生软枣猕猴桃再生体系。结果表明：最适宜的诱导叶片、茎段愈伤组织的培养基分别为MS+0.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA和MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA;诱导出愈伤组织在MS+0.6 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA培养基上能很好地分化不定芽苗;诱导幼芽产生丛生芽的培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA;较适宜的生根培养基为1/2MS。愈伤组织继代中发现细胞生长素NAA可以防止愈伤褐化。在愈伤组织分化中,发现将分化出的芽苗再次愈伤化,可以提高分化率。     

紫花苜蓿愈伤组织诱导和分化研究

以紫花苜蓿SANDITI无菌苗下胚轴、茎、叶3种不同外植体,在附加不同激素浓度的MS培养基上诱导愈伤组织。结果表明,SANDIT最佳外植体为下胚轴,最佳下胚轴愈伤组织诱导培养基为MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 0.5mg/L。15 d继代1次,或适当降低2,4-D浓度,提高6-BA或KT浓度,可以降低愈伤组织褐化率。愈伤组织在6-BA0.5 mg/L,NAA 0.1 mg/L,GA31.0 mg/L,YE 250 mg/L,CH 250 mg/L的MS培养基上,可获得较高的分化率。     

新疆杨组培再生体系建立

以新疆杨叶片为外植体,研究新疆杨组织培养再生体系建立的主要影响因素。结果表明:诱导愈伤组织的最佳培养基组合为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L 2,4-D;愈伤组织分化的最佳培养基组合为MS+0.1 mg/L TDZ+0.3 mg/L IBA,不定芽增殖的最佳培养基组合为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L IBA,诱导生根的最佳培养基组合为1/2MS+0.5 mg/L IBA,新疆杨组培苗在生根培养基上形成的根条数多,苗体健壮,生根率达到100%。本研究成功建立了新疆杨组织培养再生体系,为其转基因研究工作奠定了基础。     

3种植物无菌苗增殖与生根一体化技术研究

在常规培养环境条件（温度(25±3)℃、湿度60%~70%、光强1500~2000 lx,10~12 h/d）下,以中华芦荟、驱蚊香草、三倍体毛白杨无菌芽或叶片为材料,研究不同培养基对其无菌苗增殖、生根的影响,探讨其一体化成苗技术。结果表明：中华芦荟无菌芽转接在MS+6-BA 2.0 mg/L +NAA 0.1 mg/L+AC 0.1%培养基中50天,分化芽数平均达3.4个;生根率达100%,单株根数达6.1条,单株总根长达52.0 cm,且根系粗长、黄白色。驱蚊香草无菌芽在MS+6-BA 3.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L +AC 0.05%培养基中增殖速度最快,转接后45天分化芽数平均为10.2个;生根率为100%,生根苗叶片呈深绿色,生根质量好。三倍体毛白杨无菌叶片接种在MS+6-BA 0.5 mg/L +KT 0.4 mg/L +NAA 0.2 mg/L +Ad 25.0 mg/L +AC 0.05%培养基中55天,分化芽数平均达8.6个;生根率达92%,且根系较粗长、浅白色。     

降香黄檀愈伤组织培养与植株再生研究

为了实现降香黄檀工厂化快速繁殖和扩大栽培,并为降香黄檀抗寒基因导入打下一定的基础,以降香黄檀无菌实生苗茎段、叶片、根尖为外植体,MS为基本培养基,对各器官愈伤组织诱导与分化的最适培养基成分进行了研究。结果表明,可从降香黄檀无菌实生苗茎段、叶片、根尖成功地进行愈伤组织培养和植株再生。茎段、叶片、根尖诱导愈伤组织的最适培养基分别为1/2MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.10 mg/L、1/2MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.10 mg/L和1/4MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L;茎段、叶片、根尖的愈伤组织诱导丛生芽最适培养基分别为1/2MS+6-BA 1.5 mg/L+2,4-D 4.0 mg/L、1/2MS+6-BA 1.5 mg/L+2,4-D 3.5 mg/L和1/2MS+6-BA 1.5 mg/L+2,4-D 3.5 mg/L;茎段、叶片、根尖来源的单芽,其最佳生根培养基分别为MS+NAA 1.5 mg/L、MS+NAA 1.0 mg/L和MS+NAA 2.0 mg/L。比较茎段、叶片与根尖的愈伤组织诱导率、丛生芽诱导率和单芽生根率,得出以无菌实生苗根尖作为外植体是降香黄檀愈伤组织培养和植株再生的最佳选择。     

大蒜花梗组织培养再生植株

取生殖期大蒜花梗,在N_6+2,4-D 2mg/L+KT 1mg/L培养基上暗培养30天后,得到微黄色愈伤组织。将愈伤组织转到N_6+2,4-D 0.5mg/L+KT 0.5mg/L培养基上继代二次,然后于N_6+BA 5mg/L+KT 1mg/L+IAA 0.01mg/L,MS(1/2大量元素)+BA 5mg/L+KT 1mg/L+IAA 0.01mg/L和MS+BA 5mg/L+KT 1mg+IAA 0.01mg/L培养基上光照培养。3周后愈伤组织上出现绿色丛生芽,将小芽转到MS(1/2大量元素)+NAA 0.01mg/L培养基上,一周后发生白色根并形成完整植株。2,4-D和KT对大蒜花梗愈伤组织发生是必要的,高浓度的细胞分裂素和低浓度的生长素有利于芽分化,高浓度NH_4~+有利于根分化,低浓度NH_4~+有利于芽分化。愈伤组织低温处理对芽的分化是必要的。另外,对花梗愈伤组织发生进行了细胞学观察。     

苦豆子愈伤组织培养及其药用成分含量测定

本研究利用组织培养技术考察外植体种类、激素水平、水解酪蛋白浓度等不同因子对愈伤组织的生长状态的影响;同时采用分光光度法和HPLC测定不同继代次数愈伤组织中总黄酮和槐定碱的含量。结果表明,苦豆子愈伤组织诱导的最适外植体是子叶;愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,最佳继代培养基为MS+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 4.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L;总黄酮和槐定碱在第5次继代培养的愈伤组织中含量最高,分别为0.53%和0.0112%。因此,可选择第5次继代培养的愈伤组织作为苦豆子细胞悬浮培养的材料。     

萝卜花药愈伤组织诱导及褐变因素初探

以萝卜为试材,研究了不同激素配比、供体基因型、光照与温度以及蔗糖浓度对花药愈伤组织诱导的影响,同时比较研究了花药愈伤组织褐变过程中几种抗氧化酶活性变化。结果如下：P403在2.0mg/L 2,4-D+1.0mg/L 6-BA+2.0mg/L KT的MS培养基中愈伤组织的诱导率最高,愈伤组织开始褐化的时间晚,抗氧化酶的活性较高;同时进行低温预处理、高温预培养和初期暗培养的协同效果较任何一种单独处理好;6%的蔗糖浓度有利于愈伤组织的诱导。     

高羊茅高效组织培养再生体系的建立

植物分子育种与基因功能鉴定是建立在高效的组织培养再生体系基础上的。本研究以高羊茅(Festuca arundinacea Schreb)为材料,探讨了不同外植体状态、基本培养基类型、外源激素组合与固化剂种类与浓度对愈伤组织诱导的影响,并进行了愈伤组织分化长芽与生根研究。结果表明:愈伤组织诱导过程中,离体成熟胚比完整种子作外植体愈伤组织出现早、质量优、诱导率高;基本培养基的选择上以N6诱导率最高,MS最低;激素组合研究中高羊茅三个品种(SAFari, FirewarⅡ, Barleduc)在无6-BA培养基中,生长激素选择上都是2,4-D优于IAA,2~2.5 mg/L 2,4-D在三个品种中诱导率都在50%以上,而在添加0.5 mg/L 6-BA时诱导率都偏低;固化剂选择上则以Phytagel与Agarose二都最优,Phytagel固化剂最佳诱导浓度为2~4 g/L。分化长芽最佳培养基为MS+0.1 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+20 mg/L AgNO3+2%蔗糖+0.6%琼脂,生根壮苗最佳培养基为1/2MS+0.5 mg/L NAA+3%蔗糖+0.3%Phytagel。本研究为高羊茅的高效转基因体系建立与CRISPR基因功能研究提供准备。     

4个新品种玉簪愈伤组织的诱导及组培扩繁研究

为建立4个玉簪新品种的组培再生体系,以MS为基本培养基,添加不同质量浓度6-BA和2,4-D,研究其外植体组培苗的愈伤组织诱导以及继代扩繁的最适生长培养基。愈伤组织的诱导中,高浓度的6-BA(≥3.0mg/L)与低浓度的2,4-D(≤0.1mg/L)配比有利于愈伤组织的生成。MS+1.0mg/L6-BA+0.3mg/LNAA+35g/L蔗糖+12g/L琼脂的培养基可以使HostaBigDaddy（编号H1）和‘金鹰’（编号H2）的增殖倍数分别达2.54和2.78,而MS+1.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+30g/L蔗糖+11g/L琼脂可以使‘小黄金叶’（编号H6）的增殖倍数达3.01,而最适宜H15增殖的培养基则是MS+3.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+30g/L蔗糖+12g/L琼脂。研究结果为4个新品种玉簪愈伤组织的诱导及组培扩繁研究提供了有利数据依据,在此方法下愈伤组织诱导率最大,并且扩繁增殖倍数最大。     

白术叶片再生植株和丛生芽快繁的研究

白术是菊科的一种重要药用植物。为满足白术的药用需求，扩大其资源供应，避免传统开荒育苗种植模式对生态环境的破坏，为白术的大规模工厂化育苗及获取药用次生代谢产物提供有效的途径和方法，笔者以白术叶片为外植体经愈伤组织再生植株和丛生芽增殖两种方式建立了白术无菌苗的快速繁殖技术，分析了不同植物激素种类和浓度对白术叶片再生植株及丛生芽增殖的影响，研究了温度和光照条件对白术叶片愈伤组织褐变的影响。研究结果显示在培养基MS+ 6-BA1 mg/L+NAA0.2 mg/L上白术丛生芽增殖倍数最高，可达4.45倍；以白术的叶片愈伤组织诱导及再生植株的最佳培养基为MS +KT 1mg/L+NAA0.2 mg/L，愈伤组织诱导率可达96.7%；芽分化率为90%。不同的细胞分裂素种类与浓度处理差异显著，在白术叶片的愈伤组织诱导中，KT的效果要优于6-BA，但在丛生芽增殖中则表现出高浓度的6-BA要优于KT。白术叶片愈伤组织继代培养中褐变程度与温度、光照条件有关，1000 lx光照强度，20±0.5℃的温度条件下继代培养能有效控制褐变。     

大叶黄杨幼茎愈伤组织诱导的研究初报

以大叶黄杨的幼茎段为外植体,在添加BA和NAA、IBA、2,4-D不同激素组合的MS培养基上培养,对其愈伤组织进行诱导试验。结果表明：①生长素对愈伤组织诱导的效应为2,4-D >NAA>IBA;②在不同激素组合培养基上均可诱导出愈伤组织,其中MS+BA1.0~2.0 mg/L+NAA 1.0~1.5 mg/L、MS+BA1.5~2.0 mg/L+IBA1.0~1.5 mg/L、MS+BA0.5~1.0 mg/L+2,4-D 0.5~1.5 mg/L等对愈伤组织的诱导效果最好,其诱导率分别为74.3%、65.3%、81.1%。因此,通过科学配制不同激素组合的MS培养基,就能有效地诱导出大叶黄杨幼茎的愈伤组织。     

小盐芥下胚轴再生体系的建立

以小盐芥下胚轴为外植体,研究了不同激素与不同浓度组合对愈伤诱导和不定芽分化的影响。结果表明,MS 6-BA 2,4-D组合能诱导出愈伤,诱导率为100%。MS 6-BA NAA组合既能诱导出愈伤又能分化不定芽,愈伤诱导率为100%,激素不同浓度不定芽分化率不同,最佳分化培养基为MS 2.5mg/L 6-BA 0.1mg/L NAA,不定芽分化率为43%。生根培养基为1/2MS,生根率为74%。     

薄荷离体培养及植株再生的研究

以薄荷茎段为外植体,研究了不同植物激素对薄荷愈伤组织的诱导及其增殖、不定芽分化和诱导生根的影响。结果表明,愈伤诱导最适培养基为MS 6-BA1.5mg/L 2,4-D0.5mg/L NAA0.5mg/L,其愈伤组织生长良好;最佳愈伤增殖培养基为MS NAA1.0mg/L或MS IAA2.0mg/L,其褐化率均较低;最佳诱导分化培养基为MS 6-BA2.0mg/L NAA0.1mg/L,分化率达77%;生根培养基为1/2MS NAA2.0mg/L,且根较为粗壮。     

植物生长物质诱导芦荟叶片愈伤组织效果的研究

采用正交设计的方法，考察了6-BA、NAA、2.4-D、IBA这四种常用生长调节物质对中华芦荟叶片愈伤组织的诱导效果。结果表明：在MS基本培养基中，这四种生长物质对芦荟叶片愈伤组织的诱导均具极显著效果，其诱导效果大小表现为6-BA>IBA>2.4-D>NAA；在多种不同的生长物质配比中，以6-BA4.0mg/L+NAA0.25mg/L+2.4-D3.0mg/L+IBA0.5mg/L对愈伤组织的诱导效果最好。     

三个大果型番茄花药愈伤组织诱导分析

本研究以3个大果型番茄杂交种F1代(‘1401’,‘1403’,‘卡莱’)的花药为试验材料,对其花药愈伤组织诱导的影响因素进行初步研究。结果表明:大果型番茄花药小孢子发育时期与花蕾长度以及花药长度呈正相关。较适番茄花蕾消毒方法为用70%酒精对番茄花蕾进行表面消毒30 s,然后再用加了0.1%吐温20的15%NaClO消毒7 min。3个供试番茄品种均能诱导产生愈伤组织,但不同番茄品种的愈伤组织诱导率不同。其中,‘1401’番茄的愈伤组织诱导率最高,为19.67%。诱导培养基中添加30 g/L蔗糖能促进愈伤组织的产生,生长素与细胞分裂素浓度比为1:2有利于愈伤组织的产生。较适愈伤组织诱导培养基为(murashige and skoog medium,MS)+0.5 mg/L IAA+1 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂粉。该研究为获得大果型番茄多倍体材料提供了技术支撑。     

黄花矶松组织培养及培养基筛选研究

试验选用种子培养的黄花矶松无菌苗的子叶、茎段、下胚轴作为外植体材料,研究不同外植体的离体培养技术及其适宜的培养基。结果表明,生长素2,4-D对不定芽诱导具有明显的促进作用,在其浓度为1.5 mg/L时诱导率最高,子叶是诱导不定芽的良好外植体,最适培养基为MS+ 2,4-D 1.5 mg/L+ 6-BA 2.0 mg/L+ NAA 1.0 mg/L。黄花矶松的最适增殖培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+ NAA 1.0 mg/L,而且是以丛生芽的方式进行增殖的;最适生根培养基是1/2 MS+ KT 1.0 mg/L+ IBA 1.0 mg/L。     

宁夏枣树花药离体培养再生体系的建立

采用宁夏3个特色枣树品种的花药为外植体,探索MS培养基中不同激素、激素的不同浓度配比对愈伤组织诱导、不定芽分化的影响,建立其愈伤组织诱导及不定芽再生体系。结果表明,细胞分裂素6-BA对宁夏枣树胚性愈伤组织诱导起重要作用,AgNO3对愈伤组织分化不定芽影响显著。经过正交试验分析得出,最佳诱导培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+2,4-D1.0 mg/L+IBA 0.4 mg/L;最佳分化培养基是：MS+6-BA 1.5 mg/L +IBA 0.6 mg/L +AgNO3 0.5 mg/L。在最佳诱导培养基中灵武长枣诱导率最高,达89.0%,在最佳分化培养基中同心圆枣分化率最高,达88.0%。     

降低魔芋球茎组培褐变的技术研究

以魔芋球茎为外植体,研究组织培养过程中有效降低外植体褐变的方法。采用MS+6-BA 1 mg/L+NAA 1 mg/L为基本培养基,用正交实验方法研究不同琼脂浓度、吸附剂及光、暗2种不同培养条件下,对魔芋组织培养过程中褐变的影响。在MS+6-BA 1 mg/L+NAA 1 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂 6 g/L+AC 0.5 g/L+PVP 0.05 g/L及暗培养条件下,魔芋外植体的褐变率减低为38.3%,愈伤组织诱导率提高到78.3%。在培养基中加入一定量的活性炭(AC)和聚乙烯吡咯烷酮(PVP),并进行暗培养,可在一定程度上控制魔芋外植体的褐变,促进愈伤组织形成。     

天蓝苜蓿花药愈伤组织诱导及再生体系的建立

为获得天蓝苜蓿单倍体再生植株,本研究以野生天蓝苜蓿花药为外植体,采用正交设计L₁₆(4⁴)筛选适宜天蓝苜蓿愈伤组织诱导培养基,比较不同基本培养基及生长调节剂组合筛选适宜的分化培养基,并用1/3MS、1/2MS和MS添加不同浓度的NAA研究不定生根。结果表明:天蓝苜蓿现蕾15~25 d的花药其愈伤组织诱导效果最好,高达60.5%。4℃低温预处理2~4 d有利于愈伤组织诱导,诱导率达77.2%。适宜花药愈伤组织诱导的培养基为NB+2,4-D 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+TDZ 1.0 mg/L,诱导率达78.5%。比较不同基本培养及生长调节剂的不同组合发现,NB培养基愈伤组织分化效果优于B₅和MS,NB+NAA0.5 mg/L+6-BA 2.0 mg/L适宜愈伤组织的分化,分化率为66.3%。不定芽在1/3MS+NAA 0.5 mg/L中培养,生根率最高,为86.55%。本研究建立了天蓝苜蓿花药培养再生体系,获得了单倍体植株,为天蓝苜蓿的育种实践及基因组学研究提供基础材料。