CCL25/CCR9和CCL28/CCR10在仔猪胃肠道组织中的表达

【研究目的】旨在探讨CCL25/CCR9、CCL28/CCR10在仔猪胃肠道中的表达规律。【方法】通过常规RT-PCR检测CCL25/CCR9、CCL28/CCR10分别在15日龄和30日龄仔猪胃肠道不同部位的表达。【结果】 CCL25 mRNA主要在小肠表达,而CCR9 mRNA在小肠、大肠及胃中均表达,且表达量较高;CCL28 mRNA和CCR10 mRNA在小肠、大肠及胃中均表达,并以后段肠道的表达量较高。CCL25/CCR9、CCL28/CCR10在30日龄仔猪胃肠道中的表达高于15日龄仔猪。【结论】初步得出CCL25/CCR9、CCL28/CCR10 在仔猪胃肠道中的表达规律,并为进一步揭示在其它组织中的表达及它们的生物学作用奠定了基础。     

Galectin-13基因在仔猪断乳前、后胃肠道组织表达差异性分析

从仔猪的十二指肠组织中克隆Galectin-13基因,研究Galectin-13在仔猪不同组织中的分布情况,并采用实时荧光定量PCR检测Galectin-13基因在断乳前、后仔猪胃肠道组织中的表达差异情况。结果表明:成功克隆出了猪Galectin-13基因序列,并被GenBank收录(Accession.NM_001142841)。与断乳前相比,断乳后Galectin-13基因的mR-NA在十二指肠、回肠组织中的表达量显著上调(P0.05),而在胃、空肠、盲肠和结肠中的表达量与对照组相比差异不显著(P0.05)。     

不同淀粉来源日粮对断奶仔母猪内脏组织蛋白质合成的影响

为了研究玉米、糙米、糯米和抗性淀粉等不同谷物淀粉对断奶仔猪内脏组织蛋白质合成率(FSR)的影响,以16头28日龄断奶的杜×长×大三元杂交仔母猪(体重(8.0±0.4)kg)为试验对象,一次性大剂量腹腔注射L-[2H5]苯丙氨酸溶液后,测定了内脏组织蛋白质周转状况。结果表明,来源于玉米日粮组的淀粉促进了断奶仔猪内脏组织蛋白质的合成,其FSR高于糙米和抗性淀粉日粮组,显著高于糯米日粮组,且十二指肠、空肠、回肠、结肠、胰脏和肝脏的FSR分别比糯米日粮组高85.87%,47.47%,37.29%,56.29%,43.55%和17.63%。可见,日粮淀粉来源不同,对仔猪内脏组织FSR的影响也不同。     

不同基因型肉鸡肠道CAT1和CAT4 mRNA表达的发育性变化

选用遗传背景相同的1 d父母代雄性Arbor Acre(AA)和父母代雄性岭南黄肉雏鸡各160羽,采用相对定量RT-PCR方法,以AA肉鸡和岭南黄鸡十二指肠、空肠和回肠样品为模板,研究不同基因型肉鸡肠道CAT1和CAT4mRNA表达的发育性变化。结果显示:十二指肠和空肠CAT1和CAT4mRNA表达的发育性变化与回肠有着较大的差异;岭南黄肉鸡十二指肠和空肠CAT1和CAT4 mRNA表达的发育性变化与AA肉鸡分别有显著差别;岭南黄肉鸡十二指肠和空肠CAT1 mRNA表达从2~58d逐渐降低,AA肉鸡除在44d有所降低,在其他时间点的表达丰度基本一致;岭南黄肉鸡十二指肠和空肠CAT4 mRNA从2~44d有降低的趋势,58d有所回升,AA肉鸡在58d的丰度最低,其他时间点的表达丰度基本一致;岭南黄肉鸡回肠CAT1 mRNA的表达丰度在2~44d呈逐渐降低的趋势,58和44d接近,而AA肉鸡则在58d达到最高,其他时间点接近;2~44d岭南黄肉鸡回肠中CAT4 mRNA表达的发育性变化与AA肉鸡一致,但58d出现差异,AA肉鸡降到最低而岭南黄肉鸡显著上升。以上结果说明:十二指肠与空肠中CAT1和CAT4 mRNA表达的发育性变化与回肠有着较大的差异,这表明肠道近端和远端在碱性氨基酸吸收的功能上可能有所差异;不同基因型肉鸡十二指肠、空肠和回肠CAT1和CAT4 mRNA表达的发育模式不同,表明CAT1和CAT4 mRNA表达受到发育阶段、品种和肠段的调控。     

内标18S rRNA和β-actin mRNA比较:肉鸡十二指肠SGLT1 mRNA的发育规律

-βactinmRNA和18SrRNA因其在相同试验条件下的稳定表达,而被广泛用作内标基因来确定目的基因的表达量。试验分别使用这2种内标基因,用相对定量RT-PCR的方法对肉鸡(0~58 d)十二指肠钠葡萄糖共转运载体1(Sodium glucose cotransporter 1,SGLT1)的发育规律进行了分析研究,比较不同内标基因对SGLT1 mRNA表达水平检测结果的影响,以确定两者在一致试验条件下表达的相似度。结果表明,分别以-βactinmRNA和18SrRNA作为内标,SGLT1 mRNA表达发育规律完全一致,均表现为2~30 d不断升高,44 d下降,58 d回升;2 d和44 d的SGLT1 mRNA丰度显著低于16 d(P<0.05)和30 d(P<0.05),58 d的SGLT1 mRNA表达水平显著低于30 d(P<0.05)。提示这2种管家基因均可以作为内标用于肉鸡肠道转运载体基因mRNA发育规律的相对定量研究。     

siRNA干扰lZP3 mRNA表达的研究

【目的】为探索新疆草原兔尾鼠（Lagurus lagurus）卵透明带3（lZP3）在精卵结合中的机理，有效的控制草原兔尾鼠的生育；【方法】将RNA干扰载体pGenesil-ZP31和真核表达质粒p-ACLC一起通过尾静脉大容量快速注射法（Hydrodynamics-based transfection method, HD法）共注射小鼠。【结果】半定量RT-PCR和real-time PCR结果表明，2种质粒共注射时，pGenesil-ZP31的干涉作用至少发生在注射后的8 h到10 d之间；顺序性注射实验中，注射pGenesil-ZP31后间隔8 h和1 d再注射p-ACLC时，pGenesil-ZP31能在一定程度上干涉lZP3 mRNA的表达，间隔3 d以后lZP3 mRNA的表达几乎不受影响，未出现干涉现象。而注射p-ACLC后间隔1 h、2 h、4 h和8 h再注射pGenesil-ZP31，lZP3 mRNA的表达也受到了抑制，间隔24 h时抑制现象则消失；【结论】以载体为基础的体内RNAi过程具有时间依赖性，为在卵母细胞水平进一步研究siRNA对lZP3的干涉机制提供借鉴。     

陆地棉Pht1家族成员的全基因组鉴定及表达分析

【目的】磷是植物三大必需矿质元素之一,对植物的生长发育至关重要。Pht1家族的磷酸盐转运蛋白在植物磷吸收和转运方面具有重要作用,然而关于该基因的系统研究工作尚很少开展。本研究旨在进行Pht1家族成员全基因组鉴定和表达模式分析。【方法】通过生物信息学的方法对陆地棉Pht1家族成员的基因结构、编码蛋白质的结构、染色体定位、基因复制和表达情况等进行全面分析。【结果】(1)在陆地棉的基因组中共鉴定到17个磷酸盐转运蛋白基因(GhPT),其中A亚组包含8个GhPT,D亚组包含9个GhPT;(2)棉花GhPT蛋白之间序列相似性很高,并均具有12个疏水的跨膜区域;(3)进化分析表明这些GhPT蛋白主要聚为2大组(GroupⅠ和GroupⅡ),位于同一组的GhPT的编码基因大部分具有相似的内含子/外显子分布模式;(4)17个GhPT基因不均匀分布在A亚组和D亚组中的5条染色体上,串联复制和片段复制可能导致GhPT基因在陆地棉中的扩增;(5)表达模式分析表明,GhPT6和GhPT14在根中表达量最高,且同时响应低磷和低钾胁迫诱导并上调表达。【结论】这些结果将有助于深入了解Pht1家族基因的功能及离子信号途径相互作用的分子机制。     

陆地棉NF-YA基因家族的全基因组鉴定与功能分析

【目的】通过对陆地棉NF-YA基因家族进行全基因组鉴定,分析其表达特性,鉴定其中与棉花开花相关的基因。【方法】利用生物信息学方法系统分析了其理化性质、基因结构、共线性、Ka/Ks、顺式作用元件和表达模式,实时荧光定量聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)分析表达特征,采用病毒诱导基因沉默技术验证基因功能。【结果】陆地棉中鉴定到29个NF-YA基因家族成员,分为5个亚组,定位在18条染色体上;全基因组复制和片段复制是GhNF-YA基因家族扩张的主要动力;启动子区含有大量光反应的顺式作用元件。GhNF-YA基因家族基因在茎、叶中高表达;12个GhNF-YA基因在早熟品种鲁棉研19号和晚熟品种鲁棉研37号中均在第三至六叶时期表达量较高,并且大部分基因在品种间表达差异显著。沉默GhNF-YA18基因的鲁棉研37号植株比对照提前11 d现蕾,并且该基因在白化期和现蕾期的表达量均低于未沉默对照棉株。【结论】本研究对陆地棉NF-YA基因家族进行了鉴定和表达分析,为进一步研究棉花开花调控的分子机制奠定了基础。     

IBV抗体的银加强金标免疫技术检测

【研究目的】建立可在临床上检测鸡传染性支气管炎抗体的银加强金标免疫技术（SECGA）;【方法】将胶体金标记纯化的兔抗鸡IgG,然后将IBV纯化抗原包被于NCM上（0.4ug/片）,封闭后在膜片上滴加不同稀释度（10×2X）的血清,作用10分钟,洗涤后浸于1：4金标兔抗鸡IgG液中作用60分钟,再银染10分钟观察结果;【结果】SECGA能检出IB阳性血清的抗体＞10×27,而不与ND、EDS76、IBD阳性血清发生有意义的交叉反应（抗体滴度＜10×22）。对鸡IgG的最小检测量为0.88ng。用SECGA、气管环中和试验、ELISA试验检测IB抗体有明显的相关性;【结论】银加强金标免疫技术（SECGA）可用于IB抗体的检测,具有敏感、特异、简单、快速、适于现场诊断等优点,适宜于广大基层单位使用。     

比克氏棉色素腺体形态建成与棉酚代谢特性的研究

【目的】对比克氏棉(G.bickii Prokh)种子形成过程和种子萌发过程中的色素腺体形态建成特点、色素腺体与棉酚含量的动态关系及其分子机理进行探究。【方法】以比克氏棉为材料,进行组织切片观察、棉酚含量测定并分析对种子萌发期色素腺体形成及棉酚合成基因的表达谱。【结果】比克氏棉在种胚形成过程中,子叶上形成大量色素腺体原,并在种子萌发后12 h形成腔体结构,转换成成熟的色素腺体;比克氏棉种胚形成过程及种子萌发过程中均未检测到棉酚,但从种子萌发12 h开始可以检测到较低含量的棉酚。种子萌发期色素腺体形成及棉酚合成相关基因表达谱分析结果表明,GoPGF基因在比克氏棉种子萌发12 h的子叶上表达量较高,与比克氏棉色素腺体形成有关;法尼基焦磷酸合成酶(FPS)基因在种子萌发24 h的子叶上表达量较高,可能与棉酚向子叶色素腺体转运有关;CYP706B1基因在种子萌发0 h较高,HMG1基因在种子萌发0 h、36 h和48 h的子叶上表达量均较高,说明这两个基因与种子萌发后色素腺体腔的形成有关,并参与棉酚的贮运;杜松烯合酶基因(CAD1-A)和HMG2基因与比克氏棉色素腺体形成无密切关系。【结论】种子萌发后的12 h为比克氏棉子叶色素腺体形态建成的关键时期,且色素腺体的形态建成与棉酚出现的时间具有同步性。GoPGF、FPS、CYP706B1、HMG1参与色素腺体的形成及棉酚的转运。