鱼类精子遗传失活的X射线诱导

利用X射线对鲤鱼精子进行不同照射时间的处理,然后将处理后的精子与正常鲤鱼卵进行授精试验,以检测X射线对鲤鱼精子遗传物质的灭活效果。X射线强度为100kV,5mA,源距10cm,照射时间为0、20、30、40、50、60、70和80min。随着照射时间的增加,在0～50min之间,总出苗率呈逐步下降趋势,而在50～60min之间,总出苗率又呈升高趋势,超过60min,总出苗率又呈逐步下降趋势,表现出明显的“Hertwig效应”;另一方面,随照射时间的增加,正常苗率逐步下降,而鱼苗畸形率逐步升高,照射50min以上,鱼苗畸形率均为100%。结果表明,在强度为100kV,5mAX射线管照射下,照射时间为60min时,鱼苗畸形率为100%且出苗率最高,是灭活鲤鱼精子和获得雌核发育单倍体的最佳照射时间。本文填补了近年来定量研究X射线灭活精子遗传物质的空白,为应用X射线诱导鱼类雌核发育的进一步深入研究奠定基础。     

酶解制备日本沼虾游离精子方法的研究

为了获得数量多且存活的游离青虾精子,首次采用胰蛋白酶消化日本沼虾精荚的方法,获得了游离日本沼虾的精子。通过观察游离精子形态,并经台盼蓝染色,以每克精荚所获得形态正常、结构完整且不被染色的存活精子数为依据,探究胰蛋白酶处理的最佳条件。在p H 7.1的条件下,设计三因素四水平正交试验,设置不同酶浓度(0.2%、0.4%、0.6%、0.8%)、处理时间(5 min、10 min、15 min、20 min)和处理温度(30℃、35℃、40℃、45℃),根据正交试验结果确定酶处理最佳反应条件。结果表明,酶浓度对获得游离精子影响最大,其次是处理温度和处理时间。酶处理的最适条件为:酶浓度0.8%,处理时间10 min,处理温度40℃。经优化验证试验,表明上述理论组合确为最佳组合。本研究通过酶解法获得较多数量的存活游离精子,为进一步研究日本沼虾精子提供了获得游离精子的方法。     

日本沼虾对碱性湖泊水含盐量的适应性研究

采用室内急性毒性实验法,研究日本沼虾对东北地区碱性湖泊水含盐量的适应能力,探讨碱性湖泊增殖与养殖日本沼虾的可能性。结果表明,在pH 为7.72~7.81、碱度7.87~14.49 mmol/L时,含盐量对幼虾毒性作用的24 h半数有效浓度为3.17 g/L,95%置信限3.02~3.32 g/L。在pH为 7.85~8.07、碱度16.97~26.96 mmol/L时,含盐量对幼虾毒性作用的24 h、48 h、96 h半数致死浓度分别为7.95、6.84、5.77 g/L,95%置信限分别为7.74~8.11、6.69~6.99、5.59~5.93 g/L。日本沼虾对东北地区碱性湖泊水含盐量的适应上限为3.69 g/L,耐受限8.65 g/L,耐受范围4.25~8.19 g/L,长期生存所适应的含盐量为1.52 g/L。碱性水环境下日本沼虾对含盐量的适应能力将下降。东北地区含盐量在4.0 g/L以下、碱度在10~30 mmol/L的碱性湖泊可以增殖与养殖日本沼虾。     

亚硝酸盐胁迫下丁酸梭状芽孢杆菌对日本沼虾应激代偿的调节

以日本沼虾（Macrobrachium nipponense）为试验材料,研究了在亚硝酸盐的污染胁迫下,饲料中添加一定量的丁酸梭状芽孢杆菌（Clostridium butyricum）对试验沼虾的生长及肌肉组织中超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性的影响。研究结果表明,经21d的试验,添加1%和5%的丁酸梭状芽孢杆菌可显著提高沼虾的生长率、SOD和CAT的活性（P<0.01）,但2个添加组之间的差异不明显（P>0.05）。当养殖水环境中的亚硝酸钠浓度在0~0.50 mg?L-1范围内,试验组沼虾肌肉的SOD和CAT活性随着亚硝酸钠质量浓度和丁酸梭状芽孢杆菌添加量的上升而升高,在试验的第6~9d时达到峰值,随后又开始下降。至试验21d时,沼虾肌肉组织中SOD和CAT活性取决于水环境中亚硝酸钠的质量浓度和饲料中丁酸梭状芽孢杆菌的添加量。研究表明饲料中添加丁酸梭状芽孢杆菌不仅可促进日本沼虾的生长,而且还可以增加日本沼虾对亚硝酸盐污染胁迫的耐受和抵抗能力,其适宜的添加量为106个活菌数/克饲料。     

红螯螯虾繁殖生物学以及孵化方式研究进展

红螯螯虾人工育苗批量生产技术尚未成熟，未能大范围推广，仅靠半自然状态下繁殖的虾苗远远不能满足市场的需求，导致红螯螯虾市场的开拓速度缓慢，大大限制了螯虾的快速高质量发展。本文综述了红螯螯虾生物学特性、影响其繁殖的内外部因素以及孵化模式，并探讨了未来红螯螯虾在不同季节、不同时间均能抱卵的可能性。为提高红螯螯虾抱卵率、产卵量以及孵化率等相关工作提供参考，为红螯螯虾的规模化、产业化养殖提供支撑。     

肝素浓度和作用时间对绵羊精子体外获能和体外受精的影响

摘 要：通过研究添加不同的肝素浓度(0、5、10、20、50μg/ml)及不同作用时间（0、30、45、60、90、120min）对绵羊精子体外获能、存活时间和相应体外受精的影响,为改善绵羊精子体外获能效果及研究获能的机理提供一定的参考。在获能液中添加10μg/ml肝素作用45min时,其获能率最高,顶体反应率最低（40.92％和16.59％）（P<0.05）,存活时间18h,能够提高受精卵的囊胚发育;单独使用咖啡因或与10μg/ml肝素联合使用,其获能效果均不如单独使用10μg/ml肝素。说明绵羊精子获能时肝素的适宜浓度是10μg/ml,作用时间是45min,咖啡因无协同肝素促进获能的作用。     

“太湖1号”良种青虾繁育技术总结

青虾,又名河虾,学名日本沼虾,它具有食性杂、生长快、繁殖力强、适应性广等特点,是淡水养殖的名优品种之一。由于养殖户多采用放养抱卵虾方式自繁自养,导致青虾种质退化严重,性成熟提前,疾病增多。盐城市御品大闸蟹养殖有限公司2012年在江苏省水产三新工程——"‘太湖1号’青虾养殖技术示范与推广"重大推广项目的支持下,在大纵湖镇胥仇村"太湖1号"青虾苗种     

离心除精浆对提高冷冻精液品质的作用

采用离心洗涤法去除精浆后,对精液进行冷冻处理。发现:1、除精浆精子冻后的活率、Ⅰ类顶体率和精子畸形率与未除精浆组存在显著差异(P<0．05);2、除精浆使稀释后精液精浆中GOT和LDH活性明显升高(P<0．05)。从平衡后到解冻后各组GOT和LDH活性都呈上升趋势。但除精浆试验组比未除精浆试验组上升缓慢;3、除精浆试验组精子的穿卵率、卵内平均精子数都显著高于未除精浆试验组(P<0．05);4除精浆离心洗涤液用生理盐水和脱脂乳-卵柠液．两者之间无显著差异(P>0．05)。     

日本沼虾不同地理种群的遗传多样性研究

本文采用随机扩增多态DNA（RAPD）技术对6个地理种群（微山湖、洪泽湖、太湖、龙感湖、洪湖、珠江）的日本沼虾各30个个体进行了遗传多样性分析。在筛选出的18个引物中共检测到201个位点,大小在100～2000bp之间。多态位点141个,多态位点比例70.15％;各种群的多态位点数为30～99不等,多态位点比例为21.13%～55.93%。日本沼虾中国不同地理种群的平均遗传杂合度为0.2446,各种群内平均遗传杂合度为0.1132～0.2071。Shannon信息指数（I）为0.1695～0.2950。日本沼虾6个地理种群的两两地理种群间遗传分化指数Gst值在0.2116～0.4442之间,种群间总的遗传分化指数Gst0值为0.4858,Nm值在0.6257～1.8628之间,表明日本沼虾种群间已经发生显著或重要分化。同时发现OPX－830bp、OPI－360bp为珠江种群区别于其他种群的特征标记。聚类分析结果表明,洪湖种群与龙感湖种群,洪泽湖种群与微山湖种群分别先聚在一起,再与太湖种群聚类,最后与珠江种群聚合在一起。     

犬精液冷冻方法的优化试验

摘要：本试验为提高犬的精液冷冻效果,冷冻保存液配方中添加不同浓度糖（葡萄糖,果糖）,平衡时间以及熏蒸时间做系统对比。经系列分组试验发现,含0.5 %果糖组中精子活力显著高于其它组别（P<0.05）;平衡时间120 min（P<0.05）;熏蒸时间20 min冷冻效果较好。结果表明犬精子冷冻液添加低浓度果糖优于葡萄糖,而且平衡时间为120 min,熏蒸时间为20 min可得到稳定的冷冻效果。关键词：犬;:精子;葡萄糖;果糖;:冷冻保存     

日本沼虾捕捞后保活试验初报

对影响日本沼虾存活的几大因素,包括存养密度、水温、水中溶解氧、氨氮、呼吸强度等进行了探讨.从多个方面深入了解各个因素对日本沼虾存活的影响程度并总结出相对合理的保活条件.     

海南沼虾ITS-1序列分析

为了了解海南沼虾遗传方面的信息,本文利用ITS-1分子标记技术对珠江海南沼虾群体作了研究。研究结果表明:①其ITS-1片段在1700bp～1800bp之间,较日本沼虾短;②其碱基含量变化范围为：27%～30%（A）、27%～31%（G）、14～16%（C）、43%～46%( G+ C);③在海南沼虾ITS-1序列中,包含着非常丰富的SSR序列信息,具体为(AG)n、(GA)n、(AGT)n、(AGC)n、(GCA)n等重复,在个体中出现的比例分别为100%、100%、25%、12.5%、12.5%。同时(AG)n、(GA)n重复出现了较高多态性; ④BLAST比对结果表明,海南沼虾同日本沼虾和刀额新对虾都有较高的同源性。本研究结果在一定程度上填补了海南沼虾ITS-1方面研究的空白,同时也为海南沼虾后续研究提供了理论参考。     

青虾transformer-2基因RNA干扰规律的研究

通过对青虾性别调控相关基因transformer-2（tra-2）的RNA干扰规律进行研究,探讨了tra-2 基因RNA干扰的最适注射部位、注射剂量、干扰效果以及干扰规律等。通过对青虾肌肉、心脏、围心腔和眼柄基部注射比较发现,围心腔注射死亡率最低,适宜RNA干扰研究。采用4 μg/g 的dsRNA剂量进行时间依赖性干扰试验,RT-PCR检验注射后第1,7,14 天的卵巢tra-2 表达量,结果显示第7 天基因表达量出现显著降低（P<0.05）。不同剂量水平（0.4 μg/g、4 μg/g 以及12 μg/g）干扰研究发现,0.4 μg/g dsRNA没有干扰结果,4 μg/g 和12 μg/g 剂量的干扰效果均显著。与4 μg/g 的剂量相比,12 μg/g 的dsRNA能在较短时间内起到明显的干扰效果,且能持续较长的时间,表明干扰规律会随着剂量的改变而变化。但两组tra-2的最低表达量分别为正常水平的23%和21%,无显著差异（P>0.05）。     

不同温度和时间处理对茶多酚损失率的影响

本试验采用两因素四水平完全交叉试验设计研究实际生产过程加热温度和时间对茶多酚损失的影响,不同温度处理为80℃、100℃、120℃、140℃和不同加热时间处理为60min、90min、120min、150min。试验结果表明,加热时间控制在60min以内,加热温度100℃至140℃,茶多酚的损失率可控制在15%以内。     

丁香酚对降低罗非鱼捕捉应激的作用

摘 要：【研究目的】为了了解麻醉剂丁香酚对鱼类养殖的影响，适量麻醉是否可以降低操作带来的应激反应。【方法】通过对罗非鱼进行适量麻醉和无麻醉直接处理后，检测不同时间捕捉处理后罗非鱼血浆中皮质醇和乳酸动态变化，研究鱼用麻醉剂丁香酚对罗非鱼捕捉应激的影响。【结果】结果显示：在10~120 mg/L范围内，随着丁香酚药浴浓度的增加，罗非鱼麻醉时间逐渐缩短，苏醒时间逐渐增长，实验选取的最适麻醉浓度为45 mg/L。捕捉后0、30、60 min三个取样点，丁香酚处理组罗非鱼血浆中皮质醇浓度降低，但各时间点无显著性差异(P>0.05)，直接捕捉处理组皮质醇浓度显著增加(P<0.05)。0 min时处理组皮质醇浓度显著低于对照组，30、60 min时处理组极显著低于对照组(P<0.01)。捕捉后两个处理组0 min血浆中乳酸浓度无显著差异；直接捕捉处理组30 min和60 min血浆中乳酸浓度显著高于0 min(P<0.05)，且显著高于丁香酚处理组0 min、30、60 min三个取样点 (P<0.05)，丁香酚处理组血浆中乳酸浓度差异不大。【结论】结果表明：在理想麻醉剂量下，将罗非鱼使用丁香酚进行麻醉后捕捞、运输等操作，可避免捕捉后鱼体皮质醇和乳酸浓度的激增，有效降低罗非鱼的捕捉应激。     

青虾泛素特异性蛋白酶9基因Usp9全长cDNA序列的克隆及表达分析

本研究首次克隆了青虾的Usp9 (ubiquitin-specific protease 9)基因全长 cDNA序列,并在青虾中使用荧光定量 PCR 技术首次检测了 Usp9 基因在不同组织和发育阶段中的表达变化。青虾 Usp9 基因cDNA全长 1259 bp,包括 162 bp的 5’ UTR, 978 bp的开放阅读框以及 116 bp的 3’ UTR。氨基酸序列比对分析显示,青虾 Usp9蛋白与太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)、凤仙花熊蜂(Bombus impatiens)及灰短尾负鼠(Monodelphis domestica)的蛋白相似度分别为 99%、 97%和 95%。应用 MEGA5.1软件对青虾与其他物种的 Usp9氨基酸进行系统进化树分析,结果表明,青虾 Usp9与同为甲壳纲的钩额型蚤状溞聚为一支,具有最近的亲缘关系。采用荧光定量 PCR技术检测了 Usp9基因的时空表达,水温 28℃时, Usp9基因在青虾发育的后幼体发育期第 5天 PL5出现表达高峰。Usp9基因在 6种成体组织中均有表达,表达水平依次为：脑＞腹神经＞精巢＞卵巢＞肌肉＞肠。而在雌雄组织差异表达分析表明,精巢中Usp9基因表达量比卵巢的比值为 2.86,脑组织中雄虾的表达量比雌虾为 2.27,差异均为极其显著(P＜0.01)。这表明Usp9基因的表达和雄性偏向基因趋势是一致的（雄性表达：雌性表达≥1.5）。本研究为进一步开展青虾Usp9基因功能等相关研究奠定了基础,并可为青虾性别的遗传调控机制研究提供参考。     

Gamma-irradiation of cacao (Theobroma cacao L.) pollen: Effect on pollen grain viability,germination and mitosis and on fruit set

Summary Theobroma cacao pollen fertilization capability was studied after 0, 50, 100, 200, 500 and 1000 Gy gamma-irradiation. For all irradiation doses, no alteration of pollen grain viability and in vitro germination was observed. In situ, for all doses, pollen tubes penetrated into the styles and reached the ovules 20 hours after pollination. In vitro observations of the pollen grain nuclei after 20 hours incubation showed that pollen irradiation causes inhibition of the division of the generative nucleus. Fruit survival rate 30 days after pollination decreased as irradiation doses increased from 0 to 100 Gy, and over 100 Gy no fruit set was obtained. The possibility of using irradiated pollen as a method for obtaining haploid cacao plantlets is discussed.     

红花羟基黄色素A动态积累规律及热稳定性研究

研究红花花丝羟基黄素色A (HSYA)动态积累规律和HSYA的热稳定性,为红花生产和应用提供了技术支持和理论支撑。以‘延津’红花和‘原阳’红花为研究材料,采用高效液相色谱技术分析红花花丝不同发育时期的HSYA含量以及不同温度和时间对HSYA制剂和花丝HSYA含量的影响。结果表明：HSYA在花蕾形成时期就开始产生并积累,在开花后第3 天,其含量到达平台期。HSYA制剂含量随着保存温度(50~100℃)增加而呈直线下降;在保存温度一定的条件下,随着保存时间(30~120 min)的增加也呈现直线下降的趋势。红花花丝在50℃烘干条件下,以烘干时间为240 min 时花丝HSYA含量最高;在70℃烘干条件下,以烘干时间为90 min 时花丝HSYA含量最高。红花花丝在100~140℃的烘干条 件下,HSYA含量呈直线下降;在烘干温度一定的条件下,HSYA含量随着烘干时间(30~240 min)的增加均呈现直线下降的趋势。因此,红花采摘以花后第3 天为最好,花丝烘干可以采用40~50℃烘干,而红花制剂在生产过程中尽量避免采用高温浓缩技术。     

Response of Rice Varieties Grown in Semi-deepwater Ecosystem to Foliage Pruning and Nitrogen Fertilization

Field experiments were conducted at Cuttack, India, in 1992 and 1993 using two semi-tall (Panidhan and CR 580-5 of 180 days duration) and two tall (Amulya and CR 626-26-2-3 of 170 days duration), elongating and photosensitive rice varieties to study their response to foliage pruning at varying levels of nasally applied N fertilizer (0, 30, 60 and 90 kg N ha^?1). Pruning at the collar level of the topmost leaf was done either once at 90 or 120 days of growth, or twice at both the stages. The crop was sown during the end of May in dry soil and subsequently grown under a semi-deepwater regime (0–80 cm water depth). The dry weight of pruned foliage was more in the tall than in the semi-tall varieties and it increased with an increase in the level of N fertilization and delay in pruning. Two prunings produced greater foliage yield than one pruning. Foliage pruning once at 90 days of growth had no effect on the grain yield of all varieties. However, pruning at 120 days of growth decreased the yield of Amulya and CR 626-26-2-3, particularly in 1992, possibly because of less time (25–30 days) available for the crop recovery before flowering. Further, pruning twice at 90 and 120 days of growth reduced the grain yield of all the varieties significantly due to a reduction in their panicle weight. Application of N fertilizer beyond 30 kg N ha^?1 did not increase the grain yield under no pruning treatment, but the crop responded significantly up to 60 kg N ha^?1 under one pruning and up to 90 kg N ha^?1 under two prunings, despite its adverse effect on crop performance. The crop lodging in response to increased N application was delayed by about a fortnight due to foliage pruning but its beneficial effect was not reflected in the grain yield. The results indicated that the green leafy foliage of the tall elongating rice varieties could be harvested 40–50 days before flowering for feeding the cattle without impairing their productivity under semi-deepwater ecosystem.