青虾泛素特异性蛋白酶9基因Usp9全长cDNA序列的克隆及表达分析

本研究首次克隆了青虾的Usp9 (ubiquitin-specific protease 9)基因全长 cDNA序列，并在青虾中使用荧光定量 PCR 技术首次检测了 Usp9 基因在不同组织和发育阶段中的表达变化。青虾 Usp9 基因cDNA全长 1259 bp，包括 162 bp的 5’ UTR， 978 bp的开放阅读框以及 116 bp的 3’ UTR。氨基酸序列比对分析显示，青虾 Usp9蛋白与太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)、凤仙花熊蜂(Bombus impatiens)及灰短尾负鼠(Monodelphis domestica)的蛋白相似度分别为 99%、 97%和 95%。应用 MEGA5.1软件对青虾与其他物种的 Usp9氨基酸进行系统进化树分析，结果表明，青虾 Usp9与同为甲壳纲的钩额型蚤状溞聚为一支，具有最近的亲缘关系。采用荧光定量 PCR技术检测了 Usp9基因的时空表达，水温 28℃时， Usp9基因在青虾发育的后幼体发育期第 5天 PL5出现表达高峰。Usp9基因在 6种成体组织中均有表达，表达水平依次为：脑＞腹神经＞精巢＞卵巢＞肌肉＞肠。而在雌雄组织差异表达分析表明，精巢中Usp9基因表达量比卵巢的比值为 2.86，脑组织中雄虾的表达量比雌虾为 2.27，差异均为极其显著(P＜0.01)。这表明Usp9基因的表达和雄性偏向基因趋势是一致的（雄性表达：雌性表达≥1.5）。本研究为进一步开展青虾Usp9基因功能等相关研究奠定了基础，并可为青虾性别的遗传调控机制研究提供参考。