云南省4种蕨类植物提取液的抑菌活性

为了合理开发利用蕨类植物资源,本研究利用圆纸片法分析了云南省4种蕨类植物单芽狗脊蕨（Woodwardia unigemmata）、蜈蚣蕨（Pteris vittata）、鸡足山耳蕨（Polystichum jizhushanense）和灰绿耳蕨（Polystic-hum eximium）的提取液对金黄色葡萄球菌（Staphylococus aureus）、大肠杆菌（Escherichia coli）和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的抑菌活性。抑菌试验结果表明,当4种蕨类植物提取液浓度分别为10%、8%、6%和4%时,对照组无抑菌圈出现,单芽狗脊蕨提取液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌无抑菌活性,灰绿耳蕨提取液对金黄色葡萄球菌无抑菌活性,其它的蕨类植物提取液对供试微生物都表现出不同程度的抑菌活性;并且这4种蕨类植物提取液至少对一种供试细菌具有抑菌活性,抑菌活性范围为8～14mm,平均抑菌圈直径为11.2mm,4种提取液对枯草芽孢杆菌抗菌活性效果最明显。由此,我们推测本研究中的4种蕨类植物均有抗菌物质存在,并将有望成为筛选抗菌新型药物的种质资源。     

商陆不同极性、根和茎提取物的抑菌性能分析

为探究商陆不同极性、部位提取物的抑菌性能,本实验分别从商陆根和茎中提取石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相4种不同极性的提取物,再采用滤纸片法测量提取物对大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus）、巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）和副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyt-icus）4种细菌的抑制性能。结果表明,部分商陆的提取物有一定的抑菌活性,如根正丁醇相对巨大芽孢杆菌和副溶血弧菌,茎水相对副溶血弧菌的抑菌圈在10mm以上,但总体上商陆的提取物的抑菌性能远不及头孢氨苄好。实验还发现商陆抑菌活性最强的物质大都存在于根中,且抑菌活性最强的物质大都存在于水和正丁醇这种极性较高的溶剂的提取物中,不同提取物对不同细菌的抑菌活性情况不一致。因此本研究结果可以为商陆提取物抑菌性能的进一步探索提供参考。     

不同颜色蚕豆种皮酚类物质组成及抑菌活性研究

为了提高蚕豆加工副产物的综合利用率,筛选天然多酚抑菌剂的功能原料,本试验以5种不同颜色蚕豆种皮为研究对象,比较不同颜色蚕豆种皮中酚类物质的含量、组成及抑菌活性的差异,初步探讨蚕豆种皮中发挥抑菌活性的多酚物质种类。结果表明,5种不同颜色蚕豆种皮中总酚含量为165.94~8 487.62 mg·100g^-1,总黄酮含量为11.26~209.01 mg·100g^-1,花色苷含量为1.08~65.64 mg·100g^-1。紫红蚕豆种皮总酚、花色苷含量最高,黑蚕豆总黄酮含量最高。没食子酸和原儿茶酸为蚕豆种皮中的主要酚酸物质,儿茶素、杨梅素、根皮素及槲皮素为主要的黄酮类物质,矢车菊素、矢车菊素-3-葡萄糖苷、飞燕草素和飞燕草素-3-葡萄糖苷为主要花色苷类物质,且深色蚕豆种皮具有较的高酚类物质含量。抑菌活性结果表明,深色蚕豆种皮对大肠杆菌和沙门氏菌的抑制能力较强,且总酚、总黄酮含量与沙门氏菌抑菌活性呈显著正相关(P<0.05),而花色苷含量与大肠杆菌抑菌活性呈显著正相关(P<0.05),没食子酸及矢车菊素是发挥抑菌作用的主要物质。综上,深色蚕豆种皮含有丰富的酚类化合物,且具有较高的抑菌活性,本研究为蚕豆种皮综合加工利用提供了一定的理论基础。     

蓝莓果实黑斑病的病原鉴定及植物精油抑菌研究

为明确山东泰安产区蓝莓采后黑斑病病原菌,通过传统真菌形态学、rDNA-ITS 序列分析,结合构建系统进化发育树,鉴定该病原菌为链格孢菌(Alternaria alternata)。选用肉桂皮、百里香、丁香、柠檬草和玫瑰草5种植物精油对A. alternata进行熏蒸抑菌试验,通过体外抑菌活性筛选出最优的精油类别和作用浓度。体外抑菌结果表明, 5种植物精油对链格孢菌均有不同程度的抑菌活性。其中,肉桂皮精油对A. alternata的抑菌效果最好,其最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MFC) 分别为 0.03 μL·mL^-1和0.06 μL·mL^-1。体内接种抑菌试验发现,0.03 μL·mL^-1肉桂皮精油可有效降低蓝莓果实的发病率。扫描电子显微镜(SEM)结果表明,对照组菌丝光滑平整,而经肉桂皮精油处理组,菌丝表面形态受到严重破坏,出现粗糙、褶皱等变形现象。本研究可为山东产区蓝莓贮藏期黑斑病的预防和绿色控制提供一定的参考依据。     

核桃壳木醋液的制取、成分分析及抑菌试验

为了充分利用核桃壳资源,以核桃壳为原料,采用干馏的方法,分90～150℃、150～310℃、310～550℃ 3个温度段收集馏出液,经静置、木炭粉吸附焦油处理等过程,制得核桃壳木醋液.然后对所得木醋液的基本性质和抑菌活性进行了研究,并对抑菌活性最强的木醋液的化学成分进行了分析.结果表明:核桃壳木醋液产生的温度范围为90～550℃;各温度段所得木醋液精制后的得率随于馏温度的增加而降低,密度随温度增加而增加,pH值随温度升高呈增加趋势,有机酸含量则呈降低趋势;各温度段核桃壳木醋液对测试菌均有抑制作用,尤其是较高温度段(150～310℃、310～550℃)的抑菌效果较好.气相色谱-质谱(GC-MS)分析表明,温度段为150～310℃的木醋液中含有约43种化合物,其中主要成分为酸类、酚类、酮类、醛类和杂环化合物等.其中含量最多的是酚类化合物和有机酸,其含量占总检出成分的80.70%.初步分析其抑菌的有效成分为酚类物质.     

可食性葡甘聚糖复合抑菌膜及其应用研究

以研究可食性复合抑菌膜为目的，以多糖为基材，用增塑剂、补强剂、脂质、乳化剂和天然防腐剂作为辅料，研究了干燥温度、时间和不同的辅料等因素对可食性复合抑菌膜的物理和机械性能的影响，并进行了抑菌试验。结果表明：以魔芋葡甘聚糖为主料，在30～40℃条件下烘干1 h，可得到具有一定强度，阻湿阻气性良好的可食性复合抑菌膜，同时将其应用于食用菌和柑桔类等果蔬保鲜上。食用菌用复合抑菌膜保鲜贮藏4 d后失重率和褐变度分别为5.5%和0.11，柑桔类水果贮藏2周后腐烂率低于2%，保鲜效果明显优于对照，葡甘聚糖可用来制作可食性抑菌膜。     

超声波—酶法提取海带多糖及其抑菌活性

通过研究超声波—酶法提取海带多糖的最佳条件、海带多糖及其化学改性物对常见食源性病原菌的抑菌活性,为海带的深加工和海带多糖的应用提供理论依据。采用单因子分析和正交试验,得到最佳提取条件;应用化学改性法得到氧化降解多糖和乙酰化海带多糖;皿内抑菌试验研究海带多糖及其改性物对3种霉菌和5种食源性细菌的抑菌活性。结果表明：超声波—酶法提取海带多糖最佳条件为酶解温度50℃、pH值4.5、酶解时间75 min、加酶质量分数2.25%（纤维素酶∶中性蛋白酶=2︰1,m/m）,所得海带多糖提取率为8.64%。海带多糖对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和粪肠球菌均有一定的抑制作用,但不能抑制志贺氏菌;与海带多糖相比,改性后的多糖对几种供试细菌的抑制作用明显提高,且对志贺氏菌也有一定的抑制作用;海带多糖及其2种改性产物对青霉、根霉、黑曲霉3种霉菌无明显抑制作用。     

墨鱼缠卵腺糖蛋白的抗氧化及抑菌活性研究

为了探究墨鱼缠卵腺糖蛋白(CGG)的抗氧化活性及抑菌活性,本试验通过测定CGG的超氧阴离子自由基清除率、DPPH自由基清除率、羟基自由基清除能力、小鼠体内过氧化氢酶(CAT)活性及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性等研究CGG体内外抗氧化活性,并通过抑菌试验探讨了CGG的抑菌活性。结果表明,随着CGG浓度的增大,超氧阴离子自由基清除率从17.51%增加至55.84%,DPPH自由基清除率从5.7%增加至19.5%,羟基自由基清除能力从10.38%增加至57.94%;与对照组相比, 低、中、高剂量组小鼠体内的CAT 活性分别提高了21.91%、126.29%、135.63%,GSH-PX活性分别提高了2.04%、24.69%、28.13%。抑菌试验结果表明,当CGG浓度为14 mg·mL^-1时,大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、假单胞菌(Pseudomonadaceae)的抑菌圈分别为15.7、13.6、12.5 mm,MIC分别为1.25、7、7 mg·mL^-1,MBC分别为14、28、14 mg·mL^-1。综上表明,CGG具有一定的抗氧化和抑菌活性,但抑菌效果较弱。本研究结果为墨鱼缠卵腺的合理利用提供了一定的理论基础,同时对提高水产资源利用率有一定的参考价值。     

核桃壳木醋液的制取、成分分析及抑菌试验（简报）

为了充分利用核桃壳资源,以核桃壳为原料,采用干馏的方法,分90～150℃、150～310℃、310～550℃ 3个温度段收集馏出液,经静置、木炭粉吸附焦油处理等过程,制得核桃壳木醋液。然后对所得木醋液的基本性质和抑菌活性进行了研究,并对抑菌活性最强的木醋液的化学成分进行了分析。结果表明：核桃壳木醋液产生的温度范围为90～550℃;各温度段所得木醋液精制后的得率随干馏温度的增加而降低,密度随温度增加而增加,pH值随温度升高呈增加趋势,有机酸含量则呈降低趋势;各温度段核桃壳木醋液对测试菌均有抑制作用,尤其是较高温度段（150～310℃、310～550℃）的抑菌效果较好。气相色谱-质谱（GC-MS）分析表明,温度段为150～310℃的木醋液中含有约43种化合物,其中主要成分为酸类、酚类、酮类、醛类和杂环化合物等。其中含量最多的是酚类化合物和有机酸,其含量占总检出成分的80.70％。初步分析其抑菌的有效成分为酚类物质。     

家蝇防御素抗菌肽Des-hf突变体的抑菌活性

采用PCR定点突变技术,将家蝇(Musca domestica)防御素抗菌肽成熟肽段的基因(des-hf)第32位氨基酸残基由甘氨酸(G)突变为带正电荷的精氨酸(R),构成第一个突变体des-hf-MU1;采用同样的方法在des-hf基因的C端加上6个带有正电荷的赖氨酸(K),构成第2个突变体des-hf-MU2.采用毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统对上述2个突变体进行表达.抗菌特性表明,抗菌肽突变体对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)有较好的抑菌活性.琼脂孔扩散法检测des-hf-MU1和des-hf-MU2的抑菌效价比des-hf分别提高了2.4和8.0倍.酸稳定性试验显示,抗菌肽突变体在pH值为5～6时活性最高,热稳定性试验显示des-hf-MU1和des-hf-MU2 100℃加热10 min后仍具有抑菌活性.显示了两抗菌肽突变体具有良好的应用前景.     

丁香精油对甜樱桃采后优势致腐真菌的控制及其抑菌机理

为探明植物精油对甜樱桃采后优势致病菌的抑菌效力及抑菌机理,以山东泰安地区主栽品种红灯为试验材料,从自然腐烂的甜樱桃果实上分离纯化优势致病菌,采用形态学方法并结合ITS序列法进行鉴定,选用丁香精油从体外熏蒸和接触2种作用方式研究其对主要病原真菌的抑菌效果。结果表明,甜樱桃采后的3种主要致腐真菌分别为灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)、链格孢菌(Alternaria alternata)和胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides);体外抑菌试验表明,一定浓度的丁香精油能显著抑制3种致病菌的菌丝生长和孢子萌发,熏蒸处理较接触效果更好,对B. cinerea、 A. alternata和C. gloeosporioides的最小抑菌浓度(MIC)分别为120、100和100 μL·L^-1;试验还表明丁香精油破坏了菌丝形态,其抑菌机理可能与精油疏水性造成的微生物膜系统结构破坏、及胞内主要内容物流失有关。综上所述,丁香精油作为甜樱桃贮藏前的熏蒸剂具有较好的应用潜力。     

西藏"灵菇"乳的发酵与抑菌机制研究

根据发酵过程中菌粒中主要微生物数量与发酵乳中主要营养物和产物含量间的关系,分析探讨了西藏"灵菇"乳的发酵机制:考察了不同发酵时期所得发酵乳对人肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌的抑菌活性,结合化学物质模拟试验揭示了发酵乳的抑菌机制.结果显示,发酵前期,菌粒中的各微生物由于向乳中扩散及生长延滞,数量稍有减少;随着发酵的进行,菌粒中乳酸菌和酵母菌的数量一直处于相对稳定的水平,但醋酸菌含量呈明显的先升后降趋势;在整个发酵过程中,菌粒中的乳酸菌数量一直处于最高水平,其次为酵母菌,醋醋菌数量最少:乳酸是西藏"灵菇"发酵乳中的主要抑菌活性物质;乙酸和乙醇的存在对低浓度乳酸的抑菌活性有增效作用,但当乳酸浓度较高时,这种增效作用减弱.西藏"灵菇"发酵乳的总抑菌效果是微生物与其代谢产物的共同作用结果.     

石榴果皮中抑菌活性物质提取工艺优化(简报)

为了研究石榴果皮中抑菌活性物质的提取工艺,以金黄色葡萄球菌做指示菌,以抑菌圈直径为活性追踪指标,在单因素试验的基础上通过二次回归正交旋转组合设计进行工艺参数优化.结果表明,对石榴果皮抑菌活性物质提取效果的影响大小顺序为:乙醇浓度、提取温度、液固比,提取时间;其最佳提取工艺条件为乙醇浓度60%,液固比10:1,提取温度60℃,提取时间4h.在此优化条件下,石榴果皮提取液抑菌圈直径为16.30 mm.     

家蝇防御素抗菌肽Des-hf突变体的抑菌活性研究

采用PCR定点诱变技术,将家蝇防御素抗菌肽成熟肽段的基因（des-hf gene）倒数第九个氨基酸由甘氨酸（G）突变为带正电荷的精氨酸（R）,构成第一个突变体des-hf-MU1。采用同样的方法在des-hf 基因的C端加上六个带有正电荷的赖氨酸（K）,构成第二个突变体des-hf-MU2。采用毕赤酵母表达系统对上述两个突变体进行表达,抗菌特性表明表达产物对金黄色葡萄球菌有较好的抑菌活性,根据琼脂孔扩散法检测des-hf-MU1和des-hf-MU2的抑菌效价比des-hf分别提高了2.4倍和8.0倍,且在PH值为5～6时活性最高,热稳定性实验显示des-hf-MU1、des-hf-MU2 100 ℃加热10min 后仍具有抑菌活性,这些充分显示了良好的应用前景。     

植物精油海藻酸钠复合膜对双孢蘑菇的抑菌保鲜效果研究

为了研究植物精油对双孢蘑菇贮藏期主要腐败菌的抑制效果,该文以新鲜双孢蘑菇为试验材料,分离、纯化并鉴定引起双孢蘑菇贮藏期腐败的主要病原菌;通过体外抑菌活性试验,筛选出抑菌效果较好的植物精油,并将此精油应用于复合膜的保鲜试验中,验证其抑菌保鲜效果。通过对双孢蘑菇主要致腐微生物进行分离、纯化得到9株单菌落,经致病性试验得到主要病原真菌为3号菌,对该病原菌18S rDNA序列进行进化树分析,确定其为丰孢木霉菌(Trichoderma sp.)。选用姜黄、连翘、桉叶、当归4种精油对3号菌菌株进行抑菌活性试验,筛选出较优精油种类及浓度。结果表明,桉叶油对丰孢木霉菌的抑制效果最好,其次是连翘油,姜黄油和当归油无明显抑制作用。桉叶油最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC)为0.312 5μL/mL,最小杀菌浓度(minimum bactericidal concentration, MBC)为0.625μL/mL;连翘油MIC为0.625μL/mL,MBC为1.25μL/mL。通过对海藻酸钠/桉叶油复合膜和海藻酸钠单一膜的性能指标进行测定和对比发现,桉叶油的添加可显著提高膜的气体阻隔性能和机械性能。分别用海藻酸钠/桉叶油复合膜、海藻酸钠单一膜和普通PE膜对双孢蘑菇进行保鲜试验,结果表明,添加桉叶油的复合膜可有效降低双孢蘑菇子实体的衰老和致病腐烂,具有显著的抑菌保鲜效果。该研究结果可为双孢蘑菇贮藏期防腐和天然杀菌保鲜剂的选择提供一定的理论依据。     

酸马奶酒中一株粪肠球菌抑菌物质的粗提及特性研究

该文研究了分离自内蒙古锡林郭勒盟地区酸马奶酒样中一株粪肠球菌(H_1-1-2)的最佳培养条件和菌株的抑菌特性，从菌株的培养液中粗提了抑菌物质，并对抑菌物质的理化特性进行了初步鉴定。研究结果表明，粪肠球菌H_1-1-2最适生长温度37℃，发酵4 h后pH值开始下降，7 h后菌株进入对数生长期，抑菌物质的产生是在发酵8 h以后，12 h达到高峰；发酵液经超滤、凝胶柱分离、薄层层析、紫外吸收图谱的测定，抑菌活性物质是分子量大于50 ku的蛋白类物质；粗提物在pH 1.0～10.0范围内均有抑菌活性，在pH 4.0时可耐受60℃加热30 min，耐受一些表面活性剂，但对蛋白酶、过氧化氢酶敏感。     

植物浸提液对尖孢镰刀菌的抑菌效果

为给新型生物农药的研发提出依据,用黄连、黄芩、大蒜、金银花、柴胡和连翘6种植物的浸提液单剂及其复合剂对尖孢镰刀菌进行处理,探索浸提液单剂及复合剂对尖孢镰刀菌的影响。综合对尖孢镰刀菌菌落生长和产孢量两方面的影响,植物浸提液单剂的抑菌效果相对较好的处理分别是50%黄连、30%黄芩、20%金银花、60%柴胡、50%连翘、60%连翘以及10%大蒜、30%大蒜、60%大蒜。6种植物浸提液对尖孢镰刀菌均有抑菌作用,以黄连的抑菌效果最好,平均抑菌率为52.95%,平均抑产孢率为59.46%。     

解淀粉芽孢杆菌YN-1抑菌蛋白TasA基因的克隆及原核表达

本文以解淀粉芽孢杆菌YN-1菌株为研究对象,利用PCR方法从基因组DNA中扩增出编码TasA抑菌基因的全长DNA,并构建pGEX-4T2/TasA原核表达载体,获得TasA-GST融合表达的抑菌蛋白。测序结果表明,解淀粉芽孢杆菌YN-1TasA基因核苷酸序列全长为786bp(GenBank登录号:EU131674),编码261个氨基酸残基;同源性分析表明,它与解淀粉芽孢杆菌B.amyloliquefaciens FZB42(YP_001421886)序列的同源性最高,达98%,预测蛋白分子量为31kD。SDS-PAGE分析表明,TasA基因能在大肠杆菌BL21中表达,Western印迹分析pGEX-4T2/TasA原核表达载体,检测到约57kD的TasA-GST融合外源蛋白,与预测的融合蛋白分子量大小相符。表达产物细胞裂解液上清经Ni柱层析,表明浓度为500mmol/L咪唑洗脱缓冲液时获得较高浓度和纯度的纯化蛋白。进一步抑菌活性分析表明表达产物对黄瓜灰霉病病原菌检测平板上显示出较好的抑菌活性。本研究结果将为今后深入研究TasA抑菌蛋白基因以及抗病转基因工程提供了参考。     

西藏“灵菇”乳的发酵与抑菌机制研究（简报）

根据发酵过程中菌粒中主要微生物数量与发酵乳中主要营养物和产物含量间的关系,分析探讨了西藏"灵菇"乳的发酵机制;考察了不同发酵时期所得发酵乳对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌的抑菌活性,结合化学物质模拟试验揭示了发酵乳的抑菌机制。结果显示,发酵前期,菌粒中的各微生物由于向乳中扩散及生长延滞,数量稍有减少;随着发酵的进行,菌粒中乳酸菌和酵母菌的数量一直处于相对稳定的水平,但醋酸菌含量呈明显的先升后降趋势;在整个发酵过程中,菌粒中的乳酸菌数量一直处于最高水平,其次为酵母菌,醋醋菌数量最少;乳酸是西藏“灵菇”发酵乳中的主要抑菌活性物质;乙酸和乙醇的存在对低浓度乳酸的抑菌活性有增效作用,但当乳酸浓度较高时,这种增效作用减弱。西藏“灵菇”发酵乳的总抑菌效果是微生物与其代谢产物的共同作用结果。     

花生芽白藜芦醇大孔树脂纯化工艺及抑菌功效

为分离纯化花生芽中具有潜在抑菌活性的白藜芦醇化合物及研究其抑菌功效,提高花生的综合利用价值。该研究通过静态吸附-解吸试验,从16种不同型号大孔树脂中确定白藜芦醇较佳纯化树脂,并对其动态吸附-解吸条件优化,采用倍比稀释法、抑菌生长曲线及细胞膜通透性变化评价纯化物对鼠伤寒沙门氏菌的抑制作用。结果表明：LSA-40大孔树脂为花生芽白藜芦醇较佳纯化树脂,其吸附条件为：上样浓度120.00 μg/mL,速率1.00 mL/min,pH值4.2,上样量8.00 mL/g;解吸条件为：80%乙醇溶液,pH值6.6,流速1.00 mL/min,白藜芦醇纯度可达84.0%;利用紫外光谱、傅里叶红外光谱、超高效液相色谱串联质谱对纯化后样品进行鉴定分析,发现纯化物中主要成分为白藜芦醇及其衍生物;纯化物对鼠伤寒沙门氏菌抑制作用结果表明其最小抑菌浓度为250 μg/mL,在此浓度下可显著增加细胞膜通透性（P<0.01）,破坏细胞壁完整性,造成胞内蛋白质严重泄露,最终导致鼠伤寒沙门氏菌死亡。该研究可为花生资源综合深度利用及天然抑菌剂的开发提供一定理论参考。