茶树体细胞胚的形态分析

以茶树子叶为外植体,研究茶树体细胞胚产生方式及形态。结果表明：茶树体细胞胚在子叶柄处直接发生,或产生胚性愈伤组织间接发生。体细胞胚间接发生途径中,子叶表面隆起是发生脱分化的标志,随后细胞团膨大、颜色变绿转化成胚性愈伤组织,其表面分化出半透明的颗粒状突起即为体细胞胚。继代培养中,体细胞胚的发生、萌发以及次级胚性愈伤组织的产生同时进行。体细胞胚的石蜡切片表明,此处细胞小且排列紧密,细胞质浓,有若干个分生区域,具有分生能力。     

棉花组织培养中畸形胚的发生和转化

在棉花组织培养中，时常有畸形胚的发生。根据畸形胚的表型，可分为九类：联体胚、子叶畸形胚、胚轴畸形胚、单极胚、多极胚、无极胚、重新愈伤化胚、玻璃化胚和白化胚。畸形胚的发生频率很高，可达９４．０％。培养时间和培养基组成等均影响畸形胚的发生。通过调整培养基中激素含量可有效地使畸形胚萌发转化为正常苗。     

沙地云杉胚性愈伤组织诱导

沙地云杉(Picea mongolica)是内蒙古特有的珍稀树种,种子生产受到大小年、倒春寒及重齿小蠹等虫害的严重影响,有性繁殖受到阻碍。本研究以沙地云杉成熟胚为外植体进行胚性愈伤组织诱导,对影响胚性愈伤组织诱导的调控因子进行了研究。结果表明:(1)沙地云杉成熟胚接于培养基中培养,5 d后子叶和胚根部位膨大,10 d后胚根均明显愈伤化,40 d后愈伤呈水渍状,60 d后愈伤呈白色丝状;胚性愈伤的发生始于非胚性愈伤的表面,且长成的胚性愈伤呈细胞核大、细胞排列紧密的特点;研究结果明确了沙地云杉胚性愈伤形态学和细胞学的变化过程。(2)确定了沙地云杉胚性愈伤组织诱导的最适培养基和最佳激素组合。胚性愈伤诱导培养基为LM,激素组合为2,4-D 6 mg/L、6-BA 2 mg/L和KT 0.5 mg/L最佳培养条件为暗培养,且胚性愈伤诱导率46%。沙地云杉胚性愈伤诱导的成功可为沙地云杉资源的保护、开发、利用提供了理论依据和技术保障。     

mzhy@mail.hebau.edu.cn

 以陆地棉冀无2031无菌苗下胚轴为外植体，在MS中附加激素0.1mg/L IAA+0.1mg/L 2,4-D+0.1mg/L KT的培养基上诱导出愈伤组织。选择疏松愈伤组织继代到附加0.1mg/L ZT的培养基中，经2~3个月的继代培养诱导出颗粒状疏松胚性愈伤组织。胚性愈伤组织在无激素、每升加2g谷氨酰胺和0.5g天门冬酰胺的胚性愈伤增殖萌发培养基上培养2个月左右，可陆续形成不同时期的体胚苗。对冀无2031不同时期的体细胞萌发后的体胚苗进行观察，发现了真叶畸形苗、子叶节生根胚、胚轴侧生根胚、腋芽丛生苗和以腋     

Phenotype Variations in Plant Regeneration of Upland Cotton (Gossypium hirsutum L.)

以陆地棉冀无2031无菌苗下胚轴为外植体，在MS中附加激素0.1mg/L IAA+0.1mg/L 2,4-D+0.1mg/L KT的培养基上诱导出愈伤组织。选择疏松愈伤组织继代到附加0.1mg/L ZT的培养基中，经2~3个月的继代培养诱导出颗粒状疏松胚性愈伤组织。胚性愈伤组织在无激素、每升加2g谷氨酰胺和0.5g天门冬酰胺的胚性愈伤增殖萌发培养基上培养2个月左右，可陆续形成不同时期的体胚苗。对冀无2031不同时期的体细胞萌发后的体胚苗进行观察，发现了真叶畸形苗、子叶节生根胚、胚轴侧生根胚、腋芽丛生苗和以腋     

IAA、KT、GA_3和CH对棉花胚状体发育的影响

棉花组织培养中所产生的胚状体在不加任何激素及ＣＨ的ＭＳ基本培养基上，部分球形胚状体可发育成具子叶的胚状体，并进而形成相当数量的正常试管苗；外加０．１ｍｇ·Ｌ（－１）的ＧＡ＿３对球形胚状体及具子叶胚状体的正常发育均不利，导致大量胚状体重新形成愈伤组织；ＣＨ（５００ｍｇ·Ｌ（－１））可促进球形胚状体的正常发育，大大降低异常胚状体的发生，并可抑制具子叶胚状体次生愈伤组织化，同时可使试管苗生长健壮：ＫＴ明显的促进了胚状体的正常发育，大大提高了正常具子叶胚状体及试管苗的形成率，但若同时附加一定浓度的ＩＡＡ，刚抑制了ＫＴ的作用，表明ＩＡＡ对胚状体的发育有害。     

甘薯体细胞胚的发生和植株再生

利用含不同浓度2,4-D的修改的MS培养基对7个甘薯(Ipomoea batatas Lam.)品种进行茎尖脱毒培养,产生了形态和解剖特征明显不同的3种愈伤组织,胚性愈伤组织的诱导频率与品种和2,4-D浓度有关。将胚性愈伤组织转移到不含激素的修改的MS培养基上,有3个品种的胚性愈伤组织进一步发育成鱼雷胚和子叶胚。其中高淀粉品种苏薯2号的子叶     

农杆菌介导海岛棉转化体系优化的研究

为建立高效规模化棉花转基因技术体系,解决棉花转化率受基因型限制、转化效率低以及转化苗畸形率高等问题。以棉花胚性愈伤组织作为受体,用农杆菌介导法将Bt基因导入海岛棉棉花品种‘新海16号’,在提高海岛棉遗传转化效率的同时,建立了相对高效地转基因再生植株成苗技术体系。结果表明：分3次依次继代于具头孢霉素浓度梯度的抗性愈伤增殖培养基,较3次均继代于含500 mg/L头孢霉素(Cef)的抗性愈伤增殖培养基MS₂,抗性愈伤增殖速度较快。且60天添加1次50 mg/L Kan时,转化苗成苗率达到最大值。降低NH₄⁺/NO₃^-水平对提高体胚发生率具有有效促进作用。选择继代90天后的愈伤组织,胚状体诱导率可达到最大值;继代180天以上的愈伤组织可以摒弃。经转化后所获的子叶畸形胚,具有较强再生能力,其产生的次生胚经再次培育出正常转基因植株这一途径可有效缩短转化周期。     

金花茶两种体胚发育途径蛋白表达的双向电泳分析

本试验在已经建立的金花茶（Camellia nitidissima Chi.）花状多子叶形胚发育途径的体胚循环再生系统基础上,用双向电泳的方法按发育时间顺序分析了金花茶正常体胚和花状多子叶形胚两种体胚发育途径各自不同阶段离体培养材料的蛋白表达差异以及相同发育阶段两种发育途径的蛋白表达差异。结果表明：随着体胚发育的进程,蛋白种类和总数先增多,在子叶胚阶段蛋白种类和数量最多,之后又逐渐减弱甚至消失,在成苗阶段种类最少;金花茶两种体胚发育途径不同阶段蛋白表达存在明显差异,PD(14.9kD)是金花茶花状多子叶形胚发育途径的特有蛋白,在可分化花状多子叶胚的愈伤组织中,以及从球形胚到成熟胚的各个阶段中都有表达。     

珍稀濒危植物银鹊树胚性细胞悬浮系的建立和植株再生

以银鹊树未成熟种子为试材,对银鹊树胚性愈伤组织诱导和胚性细胞悬浮培养的最佳培养条件进行研究,初步建立了银鹊树胚性细胞悬浮系与植株再生体系。将银鹊树未成熟种子子叶胚接种在添加1.0 mg/L 2,4-D、0.5 g/L活性炭的MS基本培养基上,诱导胚性愈伤组织。将诱导得到的胚性愈伤组织置于添加0.2 mg/L 6-BA、0.05 mg/L NAA和3 g/L蔗糖的MS液体培养基上振荡培养,由此建立了增殖速度快、分散程度好、稳定性较强的胚性细胞悬浮体系。将悬浮培养获得的子叶胚转到不含任何植物生长调节物质的MS固体培养基中,可以长成正常植株。     

不同培养液对鹅胚胎体外培养的影响

为了探讨不同培养液对鹅胚胎体外培养的影响,本试验分别用鸡、鸭、鹅3种稀蛋白作培养液对90只鹅胚进行体外培养。结果表明：用鹅稀蛋白作培养液优于鸡稀蛋白和鸭稀蛋白。鹅稀蛋白组在第6、15天时鹅胚存活率显著高于鸭稀蛋白组(P<0.05),鹅胚存活率在第6、15天分别为33.33%、20.00%;在第31天时鹅稀蛋白组鹅胚存活率为3.33%,其他两组为0。综上所述,鹅胚体外培养效果因培养液的不同而不同,在鸡、鸭和鹅稀蛋白3种培养液中,以选用鹅稀蛋白为宜。     

茶树不同组织体细胞胚、不定芽分化的研究

根据茶树子叶柄、叶柄断面离腋芽的距离,将外植体依次分为C1, C2, C3和L1, L2, L3。通过上述外植体和不同培养基的研究结果表明:子叶柄外植体在MT1和MT3培养基上培养,其不定芽及总分化率是C1>C2>C3;体细胞胚的分化率是C3>C2>C1。叶柄外植体只有L1在MT3培养基上培养分化了芽,MT1培养基的胚性愈伤组织诱导率比MT,培养基高,     

向日葵未成熟胚培养中不定芽的发生

研究了向日葵未成熟胚培养中不定芽的发生情况,结果表明,向日葵子叶(?)未成熟胚再生不定芽的能力很强,下胚轴较子叶容易产生不定芽;基因型和培养基是影响不定芽再生频率的重要因子.基因型不同,其不定芽的再生频率差异很大.本实验中大多数基因型都能诱导出不定芽.再生频率在40%以上.最高的达91%.自交系、杂一代和保持系的再生频率高于普通品种.培养基中高含量蔗糖及适宜的6—BA含量有利于不定芽的发生.由不定芽培育出的绿苗在温室条件下,大部分可以正常开花结实.     

Plant regeneration from cotyledons and embryonic axes in apple: Sites of reaction and effect of pre-culture in the light

Summary Mature embryos of the cultivar Gloster were isolated from seeds of fruits stored at 1 °C. Embryonic axes and wounded cotyledons were pre-cultured in the light for 0 to 6 days on embryo growth medium (experiment 1) or for 0 to 24 hours on shoot induction medium (experiment 2). After a subsequent dark period of 3 weeks for induction of organogenesis, explants were cultured in the light on shoot elongation medium. Up to 95% of the embryos formed shoots, while the mean shoot number per embryo reached 6.4. Regeneration frequency was influenced by the type of explant: embryonic axes reacted better (75%) than the tops of the cotyledons (29%) or wounds on the cotyledons (9%). The mean total shoot number per embryo comprised means of 2.3 for embryonic axes, 1.8 for tops of cotyledons and 2.3 for wounds on cotyledons (experiment 1). Wounds on the proximal part of the cotyledon reacted much better than those on other parts. Shoot differentiation was highest when cotyledons were cultured with the adaxial side on the medium, suggesting that there exist gradations within the cotyledon for regeneration capacity (experiment 2). The number of shoots per reactive site was not normally distributed, while a high frequency of 6 or more shoots per reactive site was found (experiment 1). A pre-culture of more than 24 hours in the light seemed to have negative effect, but there was no clear evidence whether this was a light and/or a medium effect.     

糯玉米的成熟胚培养

以糯玉米成熟胚为外植体作离体培养,研究在培养基中添加植物激素,硝酸银及有机物等对玉米愈伤组织的诱导和胚性愈伤继代生长的影响。结果表明：在诱导培养阶段,N6+6-BA 0.2mg/L+2,4-D 2mg/L的培养基诱导率最高,愈伤质量好;在继代培养阶段,MS+6-BA 0.2mg/L+2,4-D 2mg/L +AgNO310mg/L或CW (Coconut Water) 10%的培养基可改善胚性愈伤的质量。     

太子参种子特性及种胚离体诱导培养技术研究

采用解剖学观察和无菌诱导培养技术研究太子参种子特性并离体诱导培养种胚。结果表明:太子参种子由外种皮、内种皮、外胚乳和胚构成,胚由子叶、胚芽、下胚轴和胚根组成,其中胚芽非常细小;种子具休眠特性,需要后熟过程才能自然萌发;种子的外胚乳对胚的萌发有抑制作用,剥去种皮和外胚乳的裸胚在培养基MS+6 BA 1.0 mg/L+NAA 0.2mg/L中能很快被诱导萌发生长,萌发率78.3%。说明太子参种胚通过离体诱导培养,可有效解决种子的休眠现象,这为实现太子参无病毒种苗的工厂化育苗提供新途径及技术支持。     

不结球白菜游离小孢子培养成胚影响因素的研究

以17个不同基因型的不结球白菜为供试材料,对影响小孢子胚胎发生频率的若干因素进行了研究。结果表明:在秋冬季日光温室内,供试植株主花序第一朵花开后第7~14天取样,即初花期是最佳取样时期;不同基因型间小孢子胚胎发生能力差异很大,在接种的17个基因型中,有12个诱导出胚,诱导成功率71%;其中102号产胚量最高,达到32.78个/蕾;在已产胚材料中,产胚量最高的基因型是产胚量最低的基因型的546倍;较易抽薹型材料的产胚能力大于易抽薹型和不易抽薹型。以B5有机成分代替NLN有机成分,能够提高产胚量,尤其是对难成胚基因型的小孢子胚胎发生有较好的促进作用,甘露醇对小孢子分裂无促进作用。     

离体胚培养途径探索东北刺人参种子的休眠原因

为深入探索东北刺人参（Oplopanaxelatus Nakai）种子休眠的原因,在WPM培养基上对经过不同处理的东北刺人参种子胚进行离体萌发试验.结果表明：由于胚乳的存在,即使种胚已经完成了形态后熟,胚仍然不能萌发;种子胚在尚未分化完全时处于休眠状态,在离体条件下不能萌发;当胚完成分化以后,胚本身不是休眠的,在适宜的离体条件下能正常萌发,而且胚发育越接近成熟其萌发力就越强.在一定的范围内,外源激素对离体胚萌发有促进作用.     

Osmoregulation in birdseed millet under conditions of water stress II. Variation in F3 lines of Setaria italica and its relationship to plant morphology and yield

We report, for the first time, there generation of four homozygous lines in sweet cherry (Prunus avium L.) byin situ parthenogenesis followed by embryo and cotyledon culture. The sweet cherry cultivar ‘Altenburger’ was pollinated with marked pollen irradiated by γ-rays at doses ranging from 250 to1200 Gy. Pollination with such irradiated pollen affected fruit set and the quality of the embryos, and induced the formation of parthenogenic embryos. The immature embryos extracted from the stones, 35 or 75days after pollination, were cultivatedin vitro in an embryo or cotyledon culture. Although flow cytometrical analysis demonstrated the diploid level for all regenerants, four lines could be characterized as homozygous using isoenzyme analysis. This revised version was published online in July 2006 with corrections to the Cover Date.