胡萝卜高效再生体系的建立

以胡萝卜下胚轴为外植体,研究其愈伤组织诱导及植株再生各个时期的影响因素。试验结果表明：0．1mg／L2,4-D或0．1mg／L2,4-D 0．2mg／L KT的激素组合有利于胡萝卜下胚轴的愈伤组织诱导;在0．1mg／L2,4-D的培养基上形成的愈伤组织主要以胚状体的形式再生,而在含0．1mg／L2,4-D 0．2mg／L KT激素组合的培养基上形成的愈伤组织主要以发生不定芽的方式再生;再生过程中,B5基本培养基上的苗子不易生根,需要附加0．1mg／L的IBA,而在MS培养基上苗子可直接形成根。     

野生软枣猕猴桃组织培养及褐变处理

以野生软枣猕猴桃嫩芽、幼嫩叶片以及茎段作为外植体,研究野生软枣猕猴桃组织培养整个过程,以建立快速高效的野生软枣猕猴桃再生体系。结果表明：最适宜的诱导叶片、茎段愈伤组织的培养基分别为MS+0.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA和MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA;诱导出愈伤组织在MS+0.6 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA培养基上能很好地分化不定芽苗;诱导幼芽产生丛生芽的培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA;较适宜的生根培养基为1/2MS。愈伤组织继代中发现细胞生长素NAA可以防止愈伤褐化。在愈伤组织分化中,发现将分化出的芽苗再次愈伤化,可以提高分化率。     

二乔刺槐愈伤组织诱导及植株再生研究

以二乔刺槐的幼嫩茎段为外植体进行愈伤组织诱导及植株再生研究。结果表明：二乔刺槐茎段诱导愈伤组织的最适培养基为MS+IBA0.2mg/L+BA3.0mg/L,愈伤组织芽诱导的最适培养基为MS+IBA 0.1 mg/L+BA 5.0 mg/L,根诱导培养基为1/2MS+ IBA 0.4mg/L。     

大花绣球‘无尽夏’组培苗叶片再生植株的研究

为建立大花绣球‘无尽夏’规模化无性繁殖和高效遗传转化体系,以‘无尽夏’组培苗叶片为外植体,研究叶位、暗培养时间及不同激素组合等因素对叶片诱导形成愈伤及分化不定芽的影响。结果表明,‘无尽夏’组培苗植株中上部叶片的愈伤诱导效果好,适宜的外植体取样叶位为第3~6位叶片。初始暗培养有利于叶片形成愈伤,暗培养15~25天的效果最佳。诱导‘无尽夏’组培苗叶片形成愈伤的适宜培养基为MS+CPPU 3.0 mg/L+IBA 0.1 mg/L,其愈伤诱导率达到98%以上;愈伤增殖与不定芽分化培养基为MS+6-BA 1.0~2.25 mg/L+IBA 0.1 mg/L。     

国槐离体培养及高效再生体系的优化

以国槐枝条为材料,研究了国槐离体培养及再生体系,探讨了不同激素组合对国槐无菌芽的产生、愈伤组织的形成、分化、增殖以及生根的影响,筛选出适合国槐枝条无菌芽诱导、无菌芽各部分形成愈伤组织、分化和增殖的培养基为MS+ BA1.0mg/L +NAA 0.1mg/L;有利于生根的培养基为1/2MS+ NAA0.3mg/L。     

4个新品种玉簪愈伤组织的诱导及组培扩繁研究

为建立4个玉簪新品种的组培再生体系,以MS为基本培养基,添加不同质量浓度6-BA和2,4-D,研究其外植体组培苗的愈伤组织诱导以及继代扩繁的最适生长培养基。愈伤组织的诱导中,高浓度的6-BA(≥3.0mg/L)与低浓度的2,4-D(≤0.1mg/L)配比有利于愈伤组织的生成。MS+1.0mg/L6-BA+0.3mg/LNAA+35g/L蔗糖+12g/L琼脂的培养基可以使HostaBigDaddy（编号H1）和‘金鹰’（编号H2）的增殖倍数分别达2.54和2.78,而MS+1.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+30g/L蔗糖+11g/L琼脂可以使‘小黄金叶’（编号H6）的增殖倍数达3.01,而最适宜H15增殖的培养基则是MS+3.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+30g/L蔗糖+12g/L琼脂。研究结果为4个新品种玉簪愈伤组织的诱导及组培扩繁研究提供了有利数据依据,在此方法下愈伤组织诱导率最大,并且扩繁增殖倍数最大。     

桃儿七愈伤组织培养体系的建立及鬼臼毒素含量测定

本研究利用组织培养技术研究桃儿七不同外植体、不同生长调节剂浓度配比和不同蔗糖浓度对桃儿七愈伤组织生长的影响,建立桃儿七愈伤组织增殖培养技术体系,同时采用高效液相色谱法测定桃儿七愈伤组织中鬼臼毒素含量。结果表明,桃儿七愈伤组织诱导的最佳外植体是叶柄;愈伤组织的最佳增殖培养基为Ms+ NAA0.5 mg/L + TDZ0.1mg/L + 6-BA1.0mg/L,碳源蔗糖浓度为40.0 g/L,获得疏松颗粒状生长旺盛的愈伤组织,愈伤组织中鬼臼毒素含量为1.56%,为野生桃儿七根茎中鬼臼素素含量的68.4%。因此,可通过对桃儿七愈伤组织的培养获取鬼臼毒素。     

两种南瓜再生体系建立的方法

为建立不同途径的南瓜再生体系,以‘大果蜜本’南瓜种子子叶节和授粉后2天的子房为外植体,对南瓜愈伤组织和胚状体发育两种再生途径进行研究。结果表明：愈伤组织发育途径中,3%的次氯酸钠溶液消毒15 min是最佳灭菌方式,MS+3.0 mg/L6-BA+ 0.1 mg/L NAA是诱导南瓜子叶节丛生芽形成的最佳培养基,MS+0.2 mg/L NAA是诱导单芽成苗的最佳培养基;胚状体发育途径中MS+4.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA和MS+0.06 mg/L TDZ均能有效诱导南瓜胚状体形成,MS培养基是诱导胚状体成苗最佳培养基。本研究成功建立了南瓜愈伤组织和胚状体发育两种途径形成再生植株的体系。     

高羊茅高效组织培养再生体系的建立

植物分子育种与基因功能鉴定是建立在高效的组织培养再生体系基础上的。本研究以高羊茅(Festuca arundinacea Schreb)为材料,探讨了不同外植体状态、基本培养基类型、外源激素组合与固化剂种类与浓度对愈伤组织诱导的影响,并进行了愈伤组织分化长芽与生根研究。结果表明:愈伤组织诱导过程中,离体成熟胚比完整种子作外植体愈伤组织出现早、质量优、诱导率高;基本培养基的选择上以N6诱导率最高,MS最低;激素组合研究中高羊茅三个品种(SAFari, FirewarⅡ, Barleduc)在无6-BA培养基中,生长激素选择上都是2,4-D优于IAA,2~2.5 mg/L 2,4-D在三个品种中诱导率都在50%以上,而在添加0.5 mg/L 6-BA时诱导率都偏低;固化剂选择上则以Phytagel与Agarose二都最优,Phytagel固化剂最佳诱导浓度为2~4 g/L。分化长芽最佳培养基为MS+0.1 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+20 mg/L AgNO3+2%蔗糖+0.6%琼脂,生根壮苗最佳培养基为1/2MS+0.5 mg/L NAA+3%蔗糖+0.3%Phytagel。本研究为高羊茅的高效转基因体系建立与CRISPR基因功能研究提供准备。     

中国水仙花药培养及植株再生体系建立

本研究以中国水仙花药为外植体,通过器官发生途径建立其植株再生体系,并通过染色体计数鉴定筛选变异个体。结果显示:在4℃下预处理3d有利于花药愈伤组织的形成;愈伤组织诱导培养基最适配比为:MS+2,4-D1.0mg/L+BA0.5mg/L+CH500mg/L+AC500mg/L;愈伤组织分化小鳞茎的最适培养基为:MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+CH500mg/L+AC1000mg/L。通过染色体计数对38个再生植株进行倍性鉴定,结果显示其中30个为三倍体(2n=30),8个为非整倍体(2n=10,11,12,14,17,26)。以这些再生苗为外植体,经器官发生途径,建立了不同倍性的再生体系。     

马铃薯耐热无性系离体筛选的初步研究

为了获得耐热性较高的马铃薯品种,本研究以马铃薯试管苗的愈伤组织为供试材料,采用羟脯氨酸(HYP)和热胁迫相结合的方法来进行马铃薯耐热无性系的离体筛选研究.研究结果表明,MS+1.5～3.0 mg/L6-BA+0.1 mg/L NAA的培养基均能够诱导全部供试马铃薯茎段产生愈伤组织,说明细胞分裂素6-BA对愈伤组织的形成有着非常重要的作用;同时确定了马铃薯愈伤组织耐羟脯氨酸筛选的适宜浓度为0.2～0.4 mg/mL.MS+1.0～5.0mg/L BA+0.1 mg/LNAA+5 mg/LGA的分化培养基能够诱导愈伤组织进行植株再生,但分化率较低,只有8%～25%.结果表明不同浓度的分化培养基均能诱导马铃薯愈伤组织分化成苗,本实验还筛选出热胁迫的适宜条件为42℃24 h,且经过羟脯氨酸与高温胁迫结合多次筛选获得了两个耐热无性系NKY1和NKY2.初步表明本筛选方法可以用于马岭铃薯耐热无性系的筛选.     

冬枣花药愈伤组织的诱导及原生质体分离

【研究目的】研究冬枣花药愈伤组织的诱导,悬浮系的建立和培养及愈伤悬浮系原生质体的分离。【方法】以冬枣花药为试材,通过选择愈伤诱导培养基和原生质体分离所用酶的浓度找到最佳诱导和分离条件。【结论】使用1/2MS基本培养基附加TDZ0.2mg/L、NAA0.5 mg/L和 PVP2.0g/L,对诱导冬枣花药愈伤组织有较好效果;愈伤组织增殖采用培养基1/2MS+TDZ0.4 mg/L +NAA0.2 mg/L;悬浮细胞系培养采用1/2MS+TDZ0.4 mg/L +NAA0.2mg/L液体培养基;冬枣花药愈伤组织悬浮系原生质体分离时以0.6M甘露醇+0.1%MES+20~25 g/L纤维素酶,酶解时间为16h时得到的原生质体产量和活力较高。     

新疆杨组培再生体系建立

以新疆杨叶片为外植体,研究新疆杨组织培养再生体系建立的主要影响因素。结果表明:诱导愈伤组织的最佳培养基组合为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L 2,4-D;愈伤组织分化的最佳培养基组合为MS+0.1 mg/L TDZ+0.3 mg/L IBA,不定芽增殖的最佳培养基组合为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L IBA,诱导生根的最佳培养基组合为1/2MS+0.5 mg/L IBA,新疆杨组培苗在生根培养基上形成的根条数多,苗体健壮,生根率达到100%。本研究成功建立了新疆杨组织培养再生体系,为其转基因研究工作奠定了基础。     

务川几种野生百合的组织培养

采用正交试验的方法,在MS固体培养基上研究不同浓度蔗糖、6-BA及NAA对淡黄花百合、文山百合及野百合等3种务川野生百合芽增殖的影响,结果表明:淡黄花百合芽增殖的最佳培养基应为:MS +0.5 mg/L 6-BA +0.5 mg/L NAA+4％蔗糖,文山百合的最佳培养基应为:MS +0.5～1.0 mg/L 6-BA +0.5 mg/L NAA +3％蔗糖;野百合芽增殖的最佳培养基应为:MS+ 0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+(2％ ～3％)蔗糖.     

超旱生常绿灌木沙冬青的组织培养技术研究

沙冬青是濒危的第三纪孑遗植物,也是中国北方干旱半荒漠地区惟一的常绿阔叶灌木,具有很好的抗逆基因资源。为了探索在不影响沙冬青正常生长的情况下,开展其组织培养技术研究,首先将消毒的沙冬青种子在含有1/2MS固体培养基的培养皿中发芽和培育无菌苗;然后将无菌苗部分侧根附着在培养基表面,发现培养基表面生长的侧根能被诱导形成大量带有根毛的短侧根;相比传统的外植体组织培养技术,主要利用毛状侧根作为幼嫩外植体,结果在CDB1(MS 1.0 mg/L 2,4-D 0.1 mg/L 6-BA,pH 5.8)培养基上能诱导愈伤组织形成,并在CDB6（MS 0.2 mg/L IBA 0.1 mg/L KT 0.5 mg/L GA3,pH 5.8)培养基上能对愈伤组织进行继代与扩繁。与此同时,研究发现沙冬青具有腋芽生长特性,以及沙冬青幼苗在RA(1/2MS 0.5 mg/L IBA,pH 5.8)培养基可以诱导大量不定根的形成。以上研究发现将有利于在保护沙冬青有限种质资源的前提下,开展沙冬青的无性繁殖和组织培养研究,以及沙冬青种质保护与生态应用。     

花曲柳愈伤组织悬浮培养及秦皮甲素积累研究

为建立花曲柳的愈伤组织诱导、增殖与悬浮培养体系,采用WPM为基本培养基,选取休眠芽刚萌发的叶片及叶柄为外植体,采用均匀试验设计研究不同浓度及配比的生长调节剂对花曲柳愈伤组织的形成和增殖的影响。1.8 mg/L NAA和0.1 mg/L TDZ的生长调节剂组合适合形成绿色、松散的愈伤组织,1.2 mg/L NAA和0.07 mg/L TDZ的组合适合形成增殖迅速的悬浮愈伤组织团。花曲柳愈伤组织诱导的最佳培养基为WPM+1.5 mg/L NAA+ 0.1 mg/L TDZ;增殖的最佳培养基为WPM+ 1.874 mg/L NAA+ 0.127 mg/L TDZ;愈伤组织悬浮培养基为1/2WPM+ 1.2 mg/L NAA+ 0.07 mg/L TDZ,秦皮甲素最大积累量出现在悬浮培养的第9天,最高可达0.800 mg/g。     

紫花苜蓿愈伤组织诱导和分化研究

以紫花苜蓿SANDITI无菌苗下胚轴、茎、叶3种不同外植体,在附加不同激素浓度的MS培养基上诱导愈伤组织。结果表明,SANDIT最佳外植体为下胚轴,最佳下胚轴愈伤组织诱导培养基为MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 0.5mg/L。15 d继代1次,或适当降低2,4-D浓度,提高6-BA或KT浓度,可以降低愈伤组织褐化率。愈伤组织在6-BA0.5 mg/L,NAA 0.1 mg/L,GA31.0 mg/L,YE 250 mg/L,CH 250 mg/L的MS培养基上,可获得较高的分化率。     

宁前胡愈伤组织诱导初探

以野生宁前胡根、茎、叶为外植体对其愈伤组织诱导进行了初步研究,以期为野生宁前胡高效快速繁殖和种质资源保护提供依据.结果表明:叶片愈伤组织诱导最佳条件为NAA 0.5 mg/L+TDZ 0.05 mg/L,最高诱导率为95.56％,黑暗或低光照度以及叶片远轴面接触培养基有利于叶片愈伤组织的形成,出愈最早时间为8d;茎段愈伤组织诱导最佳条件为NAA 0.5 mg/L+6-BA 2.0 mg/L,最高诱导率达80.00％;根愈伤组织诱导最佳条件为NAA0.5 mg/L+6-BA2.0mg/L或2,4-D 2.0 mg/L+KT 0.5 mg/L,最高诱导率达78.89％.     

苦豆子愈伤组织培养及其药用成分含量测定

本研究利用组织培养技术考察外植体种类、激素水平、水解酪蛋白浓度等不同因子对愈伤组织的生长状态的影响;同时采用分光光度法和HPLC测定不同继代次数愈伤组织中总黄酮和槐定碱的含量。结果表明,苦豆子愈伤组织诱导的最适外植体是子叶;愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,最佳继代培养基为MS+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 4.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L;总黄酮和槐定碱在第5次继代培养的愈伤组织中含量最高,分别为0.53%和0.0112%。因此,可选择第5次继代培养的愈伤组织作为苦豆子细胞悬浮培养的材料。     

秤锤树愈伤组织诱导和生长的初步研究

为了研究秤锤树外植体的最佳采集时间和愈伤组织的诱导及生长状况,以秤锤树的叶片为外植体,选择WPM+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂8 g/L作为培养基,研究不同月份取材和不同灭菌时间的处理对秤锤树愈伤组织诱导的影响,以及比较不同灭菌时间和盐胁迫条件下秤锤树愈伤组织的生理生化指标和生长情况。结果表明：秤锤树愈伤组织诱导的最佳取材月份是4月,该时期外植体的污染率最低;最佳灭菌方式为无菌水3次+75%酒精30 s+0.1%升汞1~5 min+无菌水3次。不同灭菌时间处理对愈伤组织生化指标影响明显,其中用升汞进行1 min、3 min表面消毒处理诱导产生的愈伤组织中可溶性糖显著高于5 min表面消毒处理诱导的愈伤组织中可溶性糖的含量,用升汞进行1 min、3 min表面消毒处理诱导产生的愈伤组织中可溶性蛋白显著低于5 min表面消毒处理诱导的愈伤组织中可溶性蛋白的含量,不同灭菌时间对SOD和POD的活性影响不显著;而用升汞进行3 min和5 min表面消毒诱导产生的愈伤组织表现出更好的耐盐性。