桃儿七体细胞胚胎发生的初步探究

以桃儿七种子胚培养获得7 d生的无菌苗,切取无菌苗的下胚轴、子叶做为外植体,通过调控不同生长调节剂浓度配比,诱导培养获得愈伤组织,利用愈伤组织进行体细胞胚胎发生研究,观察体细胞胚胎的发育过程,分析不同激素配比对桃儿七体细胞胚发生的影响,从而建立桃儿七体细胞胚胎发生技术体系。本研究结果表明最适宜桃儿七愈伤组织诱导的培养基是MS+0.2 mg/L NAA+0.1 mg/L GA3+1.0 mg/L 6-BA,有利于胚性愈伤组织转化和增殖的培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.1 mg/L GA3+300 mg/L CH+40.0 g/L蔗糖,培养基MS+6-BA 0.5 mg/L+GA30.1 mg/L+NAA 0.01 mg/L有利于体细胞胚的增殖和萌发。     

北川花魔芋愈伤组织与试管微球茎离体诱导研究

为解决我国地理标志性农产品北川花魔芋良种繁育体系的缺乏、种芋带病等难题,促进产业的发展,研究了不同外植体、不同激素及浓度配比对花魔芋愈伤组织诱导、试管微球茎形成的影响.结果表明:诱导愈伤组织的最佳外植体为幼嫩叶柄,在MS+ 1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA培养基上,愈伤组织诱导率可达48.3％;经继代培养可获得3种不同愈伤组织类型,其中Ⅲ型愈伤组织具有最佳增殖频率,增殖频率为90.8％;以Ⅲ型愈伤组织诱导产生试管微球茎时,最适培养基为MS+2mg/L 6-BA+-0.5 mg/L NAA+-5％蔗糖,培养4周后,可获得大量生长良好且带芽点的试管微球茎.     

苦豆子愈伤组织培养及其药用成分含量测定

本研究利用组织培养技术考察外植体种类、激素水平、水解酪蛋白浓度等不同因子对愈伤组织的生长状态的影响;同时采用分光光度法和HPLC测定不同继代次数愈伤组织中总黄酮和槐定碱的含量。结果表明,苦豆子愈伤组织诱导的最适外植体是子叶;愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,最佳继代培养基为MS+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 4.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L;总黄酮和槐定碱在第5次继代培养的愈伤组织中含量最高,分别为0.53%和0.0112%。因此,可选择第5次继代培养的愈伤组织作为苦豆子细胞悬浮培养的材料。     

桃儿七不同外植体愈伤组织诱导研究

旨在建立一种桃儿七愈伤组织诱导培养体系,筛选出最佳诱导培养基和最适外植体。以MS为基本培养基,采用正交试验法研究6-BA、2,4-D和TDZ 3个因素及其组合对桃儿七成熟叶片、叶柄和茎段愈伤组织诱导率的影响。研究结果表明：3种外植体均可诱导出愈伤组织,叶片愈伤组织诱导率最高,达44.3%,其次是叶柄,达24.7%,茎的愈伤组织诱导率为18.1%,最佳愈伤组织诱导培养基为MS+ 6-BA 1.0 mg/L+TDZ 0.1 mg/L+2,4-D 1.5mg/L,细胞分裂素6-BA和TDZ联合使用有利于提高愈伤组织诱导率并改善愈伤组织质地。与茎段和叶片所得愈伤组织相比,以叶柄为外植体获得的愈伤组织质地较疏松,呈明显的黄绿色颗粒状,更适合进一步细胞培养和诱导分化。本研究建立了一种高效的桃儿七愈伤组织诱导培养体系,为桃儿七体细胞胚的培养提供了材料。     

西部沙樱枝条愈伤组织诱导、增殖及分化培养

以西部沙樱一年生枝条为材料,研究不同激素配比条件下外植体愈伤组织的诱导、增殖及分化诱导。结果表明:西部沙樱茎段在2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+3%蔗糖+0.6%琼脂(pH 5.75)的MS培养基上可诱导出愈伤组织;愈伤组织增殖的最佳培养基为MS+2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+3%蔗糖+0.6%琼脂(pH 5.75);愈伤组织分化的最佳培养基为MS+NAA 0.3 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+3%蔗糖+0.6%琼脂(pH 5.75),经分化可获得无性系芽,继而产生丛生苗。西部沙樱愈伤诱导及分化的成功为西部沙樱资源的保护、开发和利用提供了理论依据和技术保障。     

蜈蚣珊瑚愈伤诱导及其分化正交试验设计

本研究以蜈蚣珊瑚茎段为外植体,采用正交试验设计,进行愈伤组织诱导及分化研究,并建立植株再生体系。研究表明:愈伤组织诱导的最佳外植体为带叶茎段,最佳灭菌时间为0.1%的升汞6 min;愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+4.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA+0.1 mg/L NAA;不定芽增殖最佳培养基为MS+3.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/LNAA,最佳继代次数为4次;愈伤组织不定芽诱导最佳碳源为蔗糖;生根培养最佳培养基为1/2 MS+0.4 mg/L IBA。本研究通过对蜈蚣珊瑚进行离体培养,初步获得组织培养各阶段最佳培养基配方,从而实现蜈蚣珊瑚离体快繁的目的,为蜈蚣珊瑚工厂化育苗提供理论基础及技术指导。     

麻黄茎段的愈伤组织诱导和增殖培养

以一二年生麻黄草质茎为外植体,采用不同的灭菌组合、添加不同浓度的激素,最佳外植体处理方法及愈伤组织诱导和增殖的最佳培养基组合。结果表明,外植体灭菌的最佳处理组合是75%酒精灭菌20 s后0.1%HgCl_2灭菌4 min,此灭菌组合的成活率高达100%,并无污染发生;麻黄草质茎愈伤组织诱导的培养基以MS+6-BA 0.25 mg/L+NAA 0.05 mg/L为最佳;麻黄愈伤组织增殖的培养基以MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA0.5 mg/L为最佳;一年生麻黄草质茎明显优于二年生麻黄草质茎。本研究可以为麻黄的工厂化育苗、次生代谢物生产等提供理论和技术依据。     

不同外源激素对油棕愈伤组织诱导的影响

以油棕幼胚为外植体,以N6培养基上添加不同浓度的生长素与细胞分裂素进行愈伤组织诱导研究。结果表明,无激素的培养基上不能诱导出愈伤组织,单独加入2,4-D、IAAIBA、6-BA中N6+2,4-D110mg/L的浓度愈伤组织形成率最高,为83.75%,诱导过程中褐化现象少。N6+2,4-D110mg/L+PVP5g/L+蔗糖6%+AC0.3%培养基促进愈伤组织的诱导和生长,适合进一步继代培养。     

水曲柳松散愈伤组织的悬浮培养和超低温保存

以成熟水曲柳胚的三个不同部位作为外植体,利用四种不同类型培养基研究对水曲柳松散愈伤组织诱导产生的不同影响,选出适合诱导松散型和胚性愈伤组织的外植体与培养基组合,进一步探讨悬浮培养以及超低温保存的适宜条件,为水曲柳高效微繁打下基础。主要结果如下:(1)选出较为适宜诱导松散型愈伤组织培养基是WPM+1 mg/L NAA+0.8 mg/L 6-BA+1 g/L CH+20 g/L蔗糖+5.3 g/L琼脂。(2)水曲柳悬浮培养体系的建立确定悬浮培养的培养条件为:接种量为25 mL液体培养基中加入1.5 g愈伤组织,转速120 r/min、蔗糖浓度2%,细胞15 d后增殖1.41倍;悬浮组织直径在约2 mm时易于保持松散型细胞悬浮状态。(3)超低温冷冻保存,在-196℃条件下进行愈伤组织冷冻保存,保护剂采用30%甘油+15%乙二醇+15%DMSO+0.4 mol/L蔗糖时,解冻条件为40℃、暗培养,细胞生命力最高保持在83.3%,其中愈伤组织恢复生长率为3.0%。     

汾阳核桃叶片愈伤组织的诱导、增殖及分化培养

试验中采取汾阳核桃一年生实生苗作为外植体材料,其中叶片愈伤组织的诱导、增殖及分化的基本培养基均为改良DKW。试验结果显示：诱导核桃叶片形成愈伤组织的最佳激素配比为：6-BA0.01mg/L+2,4-D0.01mg/L;促使核桃愈伤组织增殖的最佳激素配比为：BA0.01mg/L+2,4-D0.8mg/L;诱导核桃愈伤组织芽分化的最佳激素配比为：KT 0.8 mg/L +NAA0.4mg/L。     

油菜不同类型外植体组织培养及再生研究

为建立高效的组织培养体系，以甘蓝型油菜杂交品种恢复系627R、621R和616R材料田间种植植株的侧芽、花托和无菌种子实生苗下胚轴为外植体，探索不同苗龄、预培养时间、预培养基、愈伤分化培养基、诱导出芽培养基以及成苗壮苗培养基中激素配比对芽再生、成苗植株生长势的影响。结果表明：无菌苗快速繁殖体系中，发芽6 天的无菌苗下胚轴或者子叶在预培养（MS+ 2.0 mg/L 2,4-D+ 1.0 mg/L 6-BA+ 30 g/L 蔗糖+ 8 g/L 琼脂，pH 5.85）3 天后转移到分化培养基MS+ 3 mg/L 6-BA+ 1.0 mg/L NAA+5 mg/L AgNO3+ 30 g/L 蔗糖+8 g/L 琼脂(pH 5.85)，或者MS+ 3 mg/L 6-BA+ 1.0 mg/L IAA+ 5 mg/LAgNO3+ 30 g/L 蔗糖+8 g/L 琼脂(pH 5.85)生长，可以获得较高的芽再生频率，对于田间生长到抽薹开花期植株取样的外植体，腋芽的出芽频率高于花托培养的出芽频率，但是这2 类外植体在分化培养基（MS+ 10 mg/L 6-BA+ 1 mg/L NAA+ 30 g/L 蔗糖+8 g/L 琼脂，pH 5.85）生长30 天后都有成苗的潜力，上 述外植体经过组织培养出芽后转移到添加矮壮素的培养基（MS+15 mg/L CCC+15~20 g/L 蔗糖+8 g/L 琼脂，pH 5.85）上继续生长30 天，能够得到根系发达、生长势强的植株。甘蓝型油菜优良恢复系建立的组织培养体系能够快速获得生长势优的油菜植株，加速油菜良种的繁殖与评价。     

金线莲外植体的筛选及不定芽诱导的研究

以金线莲(Anoectochilus roxburghii)试管苗的叶、茎段和茎片(厚约2mm)为外植体,对金线莲组织培养快繁技术进行研究.结果表明,茎片是其快繁的最佳外植体,诱导其产生愈伤组织的适宜培养基是:MS(大量元素减半,微量元素加倍)+6-BA4.0mg/L+ZT0.2mg/L+NAA0.5mg/L+0.7%琼脂+3%蔗糖;适合不定芽分化的培养基是:MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.3 mg/L+0.7%Agar+3%蔗糖.     

油梨愈伤组织诱导及分化研究

摘要：[目的]研究不同激素及外植体类型对‘哈斯’油梨（Persea Americana Mill.cv.Hass）愈伤组织诱导及分化的影响,筛选最佳诱导条件和外植体。[方法]通过间接器官发生途径。主要探讨（1）单一激素萘乙酸（1-Naphthylacetic acid,NAA）、2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-dichlorophenoxy acetic acid,2,4-D）;6-苄氨基腺嘌呤（6-Benzylaminopurine,6-BA）分别与2,4-D和NAA 结合时对‘哈斯’油梨叶片愈伤组织的诱导效应。（2）不同外植体（叶片、叶柄、茎尖、茎段）在相同条件下（基本培养基：MS+1 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+0.1NAA mg/L）的愈伤组织诱导效应。（3）单一激素 6-BA（或与NAA结合）对油梨愈伤组织芽分化的效应。[结果]结果表明：以MS为基本培养基,（1）添加1.0 mg/L 2,4-D/NAA,其诱导效果最佳,诱导率分别为45.3%和20.2%;但NAA诱导的愈伤质地较佳。（2）1 mg/L NAA与1.0 mg/L 6-BA结合,诱导效果较好,其诱导率最高可达84%。（3）诱导愈伤组织的最适外植体为茎段,其诱导率≥72.8%。叶柄次之,叶片和茎尖较差。[结论]综上,不同激素种类及其浓度和外植体类型对‘哈斯’油梨愈伤组织诱导影响显著。最佳诱导培养基为MS+1.0 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖+7g/L琼脂。愈伤组织诱导最佳外植体为茎段,但诱导形成的愈伤组织难以分化出芽。     

秤锤树愈伤组织诱导和生长的初步研究

为了研究秤锤树外植体的最佳采集时间和愈伤组织的诱导及生长状况,以秤锤树的叶片为外植体,选择WPM+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂8 g/L作为培养基,研究不同月份取材和不同灭菌时间的处理对秤锤树愈伤组织诱导的影响,以及比较不同灭菌时间和盐胁迫条件下秤锤树愈伤组织的生理生化指标和生长情况。结果表明：秤锤树愈伤组织诱导的最佳取材月份是4月,该时期外植体的污染率最低;最佳灭菌方式为无菌水3次+75%酒精30 s+0.1%升汞1~5 min+无菌水3次。不同灭菌时间处理对愈伤组织生化指标影响明显,其中用升汞进行1 min、3 min表面消毒处理诱导产生的愈伤组织中可溶性糖显著高于5 min表面消毒处理诱导的愈伤组织中可溶性糖的含量,用升汞进行1 min、3 min表面消毒处理诱导产生的愈伤组织中可溶性蛋白显著低于5 min表面消毒处理诱导的愈伤组织中可溶性蛋白的含量,不同灭菌时间对SOD和POD的活性影响不显著;而用升汞进行3 min和5 min表面消毒诱导产生的愈伤组织表现出更好的耐盐性。     

天蓝苜蓿花药愈伤组织诱导及再生体系的建立

为获得天蓝苜蓿单倍体再生植株,本研究以野生天蓝苜蓿花药为外植体,采用正交设计L₁₆(4⁴)筛选适宜天蓝苜蓿愈伤组织诱导培养基,比较不同基本培养基及生长调节剂组合筛选适宜的分化培养基,并用1/3MS、1/2MS和MS添加不同浓度的NAA研究不定生根。结果表明:天蓝苜蓿现蕾15~25 d的花药其愈伤组织诱导效果最好,高达60.5%。4℃低温预处理2~4 d有利于愈伤组织诱导,诱导率达77.2%。适宜花药愈伤组织诱导的培养基为NB+2,4-D 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+TDZ 1.0 mg/L,诱导率达78.5%。比较不同基本培养及生长调节剂的不同组合发现,NB培养基愈伤组织分化效果优于B₅和MS,NB+NAA0.5 mg/L+6-BA 2.0 mg/L适宜愈伤组织的分化,分化率为66.3%。不定芽在1/3MS+NAA 0.5 mg/L中培养,生根率最高,为86.55%。本研究建立了天蓝苜蓿花药培养再生体系,获得了单倍体植株,为天蓝苜蓿的育种实践及基因组学研究提供基础材料。     

务川几种野生百合的组织培养

采用正交试验的方法,在MS固体培养基上研究不同浓度蔗糖、6-BA及NAA对淡黄花百合、文山百合及野百合等3种务川野生百合芽增殖的影响,结果表明:淡黄花百合芽增殖的最佳培养基应为:MS +0.5 mg/L 6-BA +0.5 mg/L NAA+4％蔗糖,文山百合的最佳培养基应为:MS +0.5～1.0 mg/L 6-BA +0.5 mg/L NAA +3％蔗糖;野百合芽增殖的最佳培养基应为:MS+ 0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+(2％ ～3％)蔗糖.     

钩藤愈伤组织的诱导与植株再生

为了建立钩藤愈伤组织诱导与植株再生体系。以药用植物钩藤[Uncaria rhynchophyllai (Mip.)Jack]嫩茎、嫩枝、嫩叶为外植体,通过优化激素组合,进行愈伤组织诱导和分化、幼苗生根和移栽,初步建立了钩藤愈伤组织诱导和植株再生体系。结果表明,以钩藤嫩枝作为外植体出愈情况较好,污染率低,继代后愈伤组织生长快。培养基成分为WPM+2.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA较适宜愈伤组织的诱导和增殖,诱导率可达83.3%。培养基成分为WPM+2.0 mg/L KT+0.2 mg/L NAA能分化出芽,愈伤组织率分化率达到82.3%;而1/2WPM+1.0 mg/L IBA适宜于试管苗生根,生根率达92.0%。以钩藤嫩枝为外植体诱导获得了质量良好的愈伤组织,并成功再生成植株,结果的获得可为解决钩藤人工栽培过程的资源和品质问题以及进行细胞培养和分子遗传改良奠定基础。     

迷迭香叶片愈伤组织诱导及再分化培养

本研究以迷迭香叶片为外植体,探索愈伤组织形成及再分化条件。结果表明:蔗糖含量较高的培养基可促进愈伤组织形成,其中以MS+蔗糖50g/L+6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L效果最好,诱导率可达88%;愈伤组织再分化形成不定芽时,以MS+6-BA1.5mg/L+KT0.5mg/L+NAA0.5mg/L效果较好,再分化率达50%;MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.5mg/L诱导不定芽增殖,增殖率可达到300%多;不定芽生根时,MS+NAA0.1mg/L效果较好,生根率可达65%。同时,研究发现,尽管外植体被消毒至无菌,但75%乙醇复合其它灭菌剂共同灭菌时,会导致外植体大量死亡。