苏云金芽胞杆菌新菌株S184 cry1Ab基因的克隆

通过对ＧｅｎＢａｎｋ中ｃｒｙ１类基因序列的保守区进行分析,设计一对针对其保守区的引物Ｙ５－１（ＡＧＧＡＣＣＡＧＧＡＴＴＴＡＣＡＧＧＡＧＧ）和Ｙ３－１（ＧＣＴＧＴＧＡＣＡＣ ＧＡＡＧＧＡＴＡＴＡＧＣＣＡＣ）,对苏云金芽胞杆菌（Ｂａｘｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ,Ｂｔ）新菌株Ｓ１８４质粒ＤＮＡ进行扩增,得到一大小为１．５ｋｂ的ＤＮＡ片段,序列分析显示该片段与ｃｒｙ１因基因高度同源。以此片段为     

RAPD技术在基因组指纹图谱构建研究中的应用

遗传图谱的建立，是遗传学研究中一个很重要的领域，是对基因组进行系统性研究的基础，也是遗传育种的依据。９０年代发展起了一种ＤＮＡ多态性分析的新方法－ＲＡＰＤ技术，克服了以往ＲＦＬＰ和ＰＣＲ技术的很多缺陷，已被广泛应用于基因组研究的各个方面。文中介绍了ＲＡＰＤ技术的原理，研究成果，以及未来展望。     

大豆花叶病毒分子生物学研究进展

大豆花叶病毒基因组结构与其它马铃薯Ｙ病毒组成员一样，是一条单链天意ＲＮＡ，全长约１００００个核苷酸，整个基因组按一个阅读框架翻译，产生一个多聚蛋白前体，并通过蛋白酶切加工，形成不同功能的成熟蛋白：３５Ｋ（Ｐ１），ＨＣ，４２（Ｐ３），ＣＩＰ，６Ｋ，２１Ｋ（Ｖｐｇ），２７Ｋ（ＮＩａ），Ｎｉｂ，ＣＰ。基因组翻译产物的加工由三种病毒蛋白酶的参与，即：Ｐ１（３５Ｋ），ＨＣ和２７Ｋ（ＮＩａ），酶切加工产生的各     

肉鸡IFN-alpha基因的克隆、序列分析以及在大肠杆菌中的表达

干扰素（ＩＦＮ）是一种具有广谱抗病毒、抗肿瘤以及免疫调节等活性的细胞因子。本研究通过ＰＣＲ从ＡＡ肉鸡基因组ＤＮＡ中克隆了ＩＦＮ－α（ＣｈＩＦＮ－α）基因,测序分析,并将该基因与表达载体ｐＱＥ３０相连,构建重组表达质粒ｐＱＥ３０／ＣｈＩＦＮ－α,以ＩＰＴＧ诱导在Ｍ１５中进行表达。测序结果表明ＣｈＩＦＮ－α的开放阅读框（ＯＲＦ）是由４８６个核苷酸编码的,成熟蛋白为１６２个氨基酸,有４个糖基化位点,推测     

桃叶片伤诱导ACC氧化酶基因cDNA的克隆,序列分析其在大肠杆？…

以桃ＡＣＣ氧化酶基因和ＤＮＡ为探针,与伤处理诱导后桃叶片总ＲＮＡ进行点杂交,结果表明,未经伤处理的样品示能检测杂杂交信号,伤处理后２－４ｈ左右信号达到最强,将其样品ｍＲＮＡ反转录成ｃＤＮＡ,通过反转录聚合酶链式反应得到一条０．９５ｋｂ的特异性扩增产物,该扩增产物能与桃ＡＣＣ氧化酶基因组探针杂交。     

马铃薯Y病毒HC-Pro基因的克隆、序列分析以及原核表达

本研究以马铃薯Ｙ病毒中国株系（ＰＶＹ－Ｃ） ＲＮＡ为模板,通过ＲＴ－ＰＣＲ克隆了ＰＶＹ－Ｃ ＨＣ－Ｐｒｏ基因,并对其进行了序列分析,测序结果表明ＰＶＹ－ＣＨＣ－Ｐｒｏ基因全长为１３６８ｎｔ,编码一个含４５６个氨基酸的蛋白。它与ＰＶＹ其它株系的同源性高于与马铃薯Ｙ病毒属其它种病毒的同源性,与所报道的ＰＶＹｎ株系的碱基及氨基酸序列同源性均为９６％,推测ＰＶＹ－Ｃ可能是ＰＶＹｎ株系或它的一个近缘株系。Ｓ     

番茄中反义ACC合成酶基因的导入与乙烯生物合成的控制

利用农杆菌ＬＢＡ４４０４携带反义ＡＣＣ合成酶基因和卡那霉素抗性基因，采用叶盘法转化番茄栽培品种“丽春”子叶，通过组织培养获得了能在卡那霉素培养基上生长的再生植株并进一步培养获得了延缓成熟和衰老的番茄果实。经过ＤＮＡ杂交和ＲＮＡ杂交检测，证明反义ＡＣＣ合成酶基因已插入番茄基因组中，并顺利地表达。     

有机南和游离铁对湘南红壤表面电荷性质的影响

用以氧水破坏土壤有机质和用ＤＣＢ（连二亚硫酸钠／柠檬酸钠／重碳酸钠）脱铁等方法研究湘南第四纪红粘土及其发育的土壤的表面电荷性质，结果表明：去除土壤有机质，使红壤胶体表面的 子交换量（ＡＥＣ）增加，可变负电荷量（ＣＥＣＶ）降低，在多数情况下共永久负电荷量（ＣＥＣＰ）增加；脱游离化铁使红壤ＡＥＣ减少，ＣＥＣＰ增加，ＣＥＣＹ增减不一，笔者认为，这与土壤胶体组分之间的相互作用有关。     

固氮粪产碱菌基因文库的构建及ntrC的克隆

采用广泛寄主范围的粘粒载体ｐＬＡ２９１７构建粪产碱菌Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｆａｅｃａｌｉｓ的基因文库。以巴西固氮螺科菌Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ｂｒａｓｉｌｅｎｓｅ ｎｔｒＣ ＤＮＡ为探针，经菌落杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交筛选获得含ｎｔｒＣ－ｌｉｋｅ基因的阳性克隆ｐＬＡＦ５８，建立了含ｎｔｒＣ同源序列的９．５ｋｂ ＳａｃＩ片段的物理图谱，采用巴西固氮螺菌ｎｔｒＢ ＤＮＡ探针杂交证明粪产碱菌ｎｔｒ     

固氮粪产碱菌（Alcaligenes faecalis）exoC基因的克隆及其特性

应用Ａ．ｂｒａｓｉｌｅｎｓｅ ｓｐ７的ｅｘｏＣ基因为探针，发现Ａ．ｆａｅｃａｌｉｓ Ａ１５０１具有与Ａ．ｂｒａｓｉｌｅｎｓｅ Ｓｐ７ ｅｘｏＣ基因同源的基因。Ａ．ｂｒａｓｉｌｅｎｓｅ ｅｘｏＣ基因能恢复Ａ．ｆａｅｃａｌｉｓ ＥＰＳ缺陷型（ＥＰＳ＾－）突变，表明粪产碱菌ＥＰＳ的产量为ｅｘｏＣ基因产物所调控。本工作已获得类似Ａ．ｂｒａｓｉｌｅｎｓｅ Ｓｐ７的ｅｘｏＣ－ｌｉｋｅ基因的克隆     

激光与^60Coγ射线对花生当代的生物学效应

露白花生种子经Ｈｅ－Ｎｅ，Ｎ２，ＹＡＧ，Ｃｏ２４种激光和＾６０Ｃｏγ射线辐照，其当代根尖细胞染色体均能产生畸变，畸经随辐照剂量的增大而上升，但激光诱发的畸变类型与＾６０Ｃｏγ射线处理有差异；不同辐照处理对当代生长发育的影响亦有差异，只有Ｃ恨植株矮化以及总果数和饱果数增加等有益的农艺性状变异。     

联合固氮遗传工程菌的田间释放与风险评价

应用遗传工程技术分别将含有ｎｉｆＡ＾ｃＤＮＡ片段的质粒及含有Ｔｎ５：：ｎｉｆＡ的广泛宿主自杀性质粒ｐＳＺ３６转入了三个联合固氮菌，即粪产碱菌，阴沟肠杆菌及催娩克氏菌中；把Ｔｎ５：：ｎｉｆＡ－ｎｔｒＣ转入了粪产碱菌野生型菌株Ａ１５０１。这些转化结合子在高铵下表现出固氮活性，并能集聚在水稻根表，而野生型菌在相同条件下远离水稻根表。这些菌株的田间释放实验在严格控制条件下进行，应用＾１５Ｎ稀释技术测定其固     

马铃薯Y病毒小鼠中和抗体轻链基因的克隆及序列分析

从大量繁殖的Ｄ７３杂交瘤细胞中，提取制备其基因ｍＲＮＡ，并以此为模版，经反转录途径获得基因组ｃＤＮＡ，随后将其插入到λｇｔｌｌ中，构建了马铃薯Ｙ病毒小鼠单克隆抗体ｃＤＮＡ基因文库。通过免疫原位杂交，从该基因文库中筛选出含有抗体轻链基因的阳性克隆，进一步将其插入到ｐＧＥＭ－７Ｚｆ（＋）质粒中，经酶谱和ＤＮＡ序列分析确定，完整的轻链基因被获得。该基因含有９５６个核苷酸碱基［不包括Ｐｏｌｙ（Ａ）尾巴］，     

桑蚕转基因技术研究进展

人工授精、细胞融合、核移植、注射外源核酸及重组ＤＮＡ技术，均有可能将外源基因导入桑蚕，其中ＤＮＡ重组导入法可以有针对性地导入目的基因。利用ＹＡＣ载体及天蚕丝腺染色质作介导，已将天蚕丝蛋白基因导入桑蚕并获得表达。桑蚕转基因的最佳受体是产后３－８小时的发生初期卵，利用微量注射法及基因枪喷射法均可将外源基因导入卵内，但导入卵内的外源基因一般只在短时间内表达，大部分在３天后分解消失。今后应重点在基因转移载     

固氮粪产碱菌中nif,ntr和gln基因鉴定及nifA克隆

本工作采用＾３２Ｐ标记的与固氮（ｎｉｆ）和一般氮代谢（ｎｔｒ和ｇｌｎ）系统有关的基因探讨，对不同限制性内切酶完全酶解的粪产碱菌Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｆａｅｃａｌｉｓ总ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析，证明在粪产碱菌中存在与ｎｉｆＨ、ｎｉｆＤＫ、ｎｔｒＡ，ｎｔｒＣ、ｇｌｎＢ、ｇｌｎＤ同源的ＤＮＡ序列。以Ａｚｏｓｐｉｒｌｌｕｍ ｂｒａｓｉｌｅｎｓｅ Ｓｐ７ ｎｉｆＡ ＤＮＡ为探针，经三轮杂交筛选。     

土壤宏病毒组的研究方法与进展

土壤是病毒遗传多样性的储存库,但由于土壤自身特性及技术手段的限制,基于传统培养方法对土壤病毒的研究及功能认知存在局限性。宏病毒组学技术能直接从土壤环境样品中获取病毒基因组,随后通过高通量测序、拼接组装、ORF预测,最终可对病毒基因进行功能注释,极大地丰富了对土壤病毒功能的认识。本文在阐释土壤病毒DNA提取、测序与病毒判别、功能基因注释等研究方法的基础上,重点探讨了单株噬菌体基因组,及近年来国内外土壤与极端陆地环境中宏病毒组研究进展。并对土壤宏病毒基因组研究的前沿和发展趋势进行了总结,强调了土壤病毒研究的整体化、技术流程规范化以及病毒资源库完善化的重要性。     

液压检测中流量测量的探讨

该文阐述了国内外流量检测的现状，介绍了一种新颖、独特的流量测试装置，并对该电感插入式流量传感器的原理、电路、标定方法和ＹＣ－Ａ型液压测试仪的流量测定电路进行了综合分析。     

小麦花后剑叶光合产物输出动态研究

本试验以铁杆小麦为材料，利用活体多探头测量仪，分析、测定花后剑叶光合产物的运转动态。结果表明，剑叶光合产物的输出、向穗部及向剑叶以下营养器官的输送动态可分别用指数方程Ｙ＝ａｅ￣（－ｂｘ）、Ｙ＝ａ（ｘ－ｃ）ｅ￣（－ｂ（ｘ－ｅ））进行拟合。生长调节物质（ＩＡＡ、ＡＢＡ）处理显著影响光合产物的输出率、输送达率及有效输这时间。ＩＡＡ处理呈正效应，ＡＢＡ处理呈负效应     

巴西橡胶树第9染色体的显微分离及微克隆文库的构建

橡胶是我国的重要的战略物资,深入研究橡胶树基因组具有重要意义。本实验以巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)热研7-33-97幼叶为材料,采用酶解去壁低渗法制片,玻璃针显微分离法成功分离出橡胶树单染色体。单染色体经蛋白酶消化、Sau3A核酸内切酶酶切和两轮LA-PCR(接头连接PCR)扩增。得到250~2000bp之间的DNA片段,通过Southernblot对单染色体产物进行验证,结果表明扩增片段与巴西橡胶树基因组DNA之间有同源性。从而说明单染色体DNA已被成功的扩增。采用荧光原位杂交技术(fluorescence insitu hybridization,FISH)验证分离出的是第9号染色体,构建了橡胶树第9号染色体微克隆文库。克隆片段长度在300~1200bp,平均为650bp左右,文库包含48000个克隆,空载率为1%。本研究从巴西橡胶树单染色体入手,运用单染色体微分离、微克隆技术,构建了巴西橡胶树单染色微克隆文库,为橡胶树基因组研究提供了新的思路与方法,为更好地开展橡胶树分子辅助育种提供技术方法。     

酿酒酵母耐铜基因CUP1的克隆及其植物表达载体的构建

酿酒酵母铜金属硫蛋白（ｃｏｐｐｅｒ ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ,Ｃｕ－ＭＴ）,属于第Ⅱ型金属硫蛋白,Ｃｕ－ＭＴ由酿酒酵母耐铜基因ＣＵＰ１编码,由６１个氨基酸残基组成,其中半胱氨酸残基１３个,占Ｃｕ－ＭＴ总氨基酸数的２１．３％,Ｃｕ－ＭＴ与铜离子有较强的结合力,在酵母细胞中主要参与过量铜的解毒作用。本研究通过ＰＣＲ方法,从酵母基因组ＤＮＡ中扩增出了ＣＵＰ１基因,克隆于ｐＵＣ１９的多克隆拉点。扩增