快速检测鸡新城疫病毒的聚乙二醇单抗夹心ELISA试验的建立和应用

以抗鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）单抗夹心ＥＬＩＳＡ试验为基础，在６０００，建立了ＰＥＧ－ＥＬＩＳＡ法，使用此法检测临诊样品，与单抗夹心ＥＬＩＳＡ相比，时间缩短７０分钟且提高了ＯＤ４９０值，易于识别。结果表明，ＰＥＧ－ＥＬＩＳＡＩ法具有实际应用价值。ＰＥＧ能加强抗原－抗体反应的速率和强度，这种效应在固相夹心ＥＬＩＳＡ第二步表现尤其明显。ＰＥＧ的这种非特异性效应对于检测其它抗原或抗体的ＥＬＩＳＡ试验可能具有     

异源抗原在建立ELISA检测传染性法氏囊病毒抗体中的应用

本文报告采用ｖｅｒｏ细胞增殖的ＩＢＤＶ抗原建立了间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），用于定量检测鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）抗体。该法快速、敏感性高、特异性强、重复性好。同时，通过３０份血清样品ＥＬＩＳＡ效价（ＥＴ）的对数值（ｌｏｇＥＴ）与血清Ｐ／Ｎ值（待检血清ＯＤ值与阴性血清ＯＤ值之比）的线性回归分析，得直线方程ｙ＝３．０５８９＋０．０７３９ｘ（ｒ＝０．９１７４），从而血清样品的ＥＴ可通过血清单一稀释度的Ｐ／Ｎ值来计算。用不同来源抗原作ＥＬＩＳＡ表明，从ｖｅｒｏ细胞增殖的抗原比从鸡胚成纤维（ＣＥＦ）细胞增殖的抗原可提高检测血清ＯＤ值近２０％，表现出异源抗原具有更高的特异性     

用ELISA检测牛血清中的牛病毒性腹泻病毒抗体

一般均用血清中和（ＳＮ）试验和间接免疫荧光（１１Ｆ）试验检测牛血清中的抗牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）抗体，本文用ＳＮ和１１Ｆ敏感性相当的ＥＬＩＳＡ检测ＢＶＤＶ抗体，共测定４７２份牛血清，有７９．２％为阳性。ＥＳＩＳＡ与ＳＮ呈正相关，表明ＥＬＩＳＡ可用于ＢＶＤＶ的常规诊断。     

二种方法检测猪传染性胃肠炎病毒抗体的比较

分别用血清中和（ＳＮ）试验和单克隆抗体（ＴＧＥｍＡｂ和ＴＧＥ／ＰＲＣＶｍＡｂ）阻断酶联免疫吸附试验（Ｂ－ＥＬＩＳＡ）对８１头美国进口猪血清作猪传染性胃肠炎（ＴＧＥ）抗体检测。ＳＮ试验检出７份阳性血清，检出率为８．６４％；Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清，检出率为８．６４％，无ＴＧＥ阳性。ＳＮ试验检出７份ＴＧＥ抗体阳性血清与Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出的７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清完全重合。结果证明，应用单克隆抗体进行的Ｂ－ＥＬＩＳＡ可鉴别诊断ＴＧＥ与ＰＲＣＶ感染，优于ＳＮ试验     

RT—PCR与夹心ELISA检测粪便及饲料中IBDV的研究

将ＩＢＤ病鸡粪便及饲料经ＰＥＧ浓缩处理后用ＲＴＰＣＲ与单克隆抗体夹心ＥＬＩＳＡ进行ＩＢＤＶ检测。在ＲＴＰＣＲ试验中，粪便和饲料的阳性检出率均为１００％（８／８）；在夹心ＥＬＩＳＡ试验中，粪便的阳性检出率为１００％（８／８），而在饲料中末检出ＩＢＤＶ（８／８％。试验结果证明，ＲＴＰＣＲ是ＩＢＤＶ流行病学特别是传播途径研究的首选方法。     

夹心ELISA和斑点杂交试验检测鸭血清中鸭乙型肝炎病毒的比较

用单克隆抗体夹心ＥＬＩＳＡ和斑点杂交试验分别对４６例鸭血清样品中的鸭乙型肝炎病毒表面抗原（ＤＨＢｓＡｇ）和鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）ＤＮＡ进行平行检测，并根据夹心ＥＬＩＳＡ测定的Ｐ／Ｎ值和斑点杂交试验的反应斑点进行薄层扫描所测定的峰面积值，比较了１９例带毒鸭血清中ＤＨＢｓＡｇ和ＤＨＢＶＤＮＡ的相对含量。结果表明，两种试验的结果判定具有高度一致性。ＤＨＢｓＡｇ与ＤＨＢＶＤＮＡ在带毒鸭血清中呈并存关系，但其含量相关不显著（Ｐ＞０．０５）。     

鸡传染性法氏囊病ELISA快速诊断盒的研制及应用

用ＩＢＤ－ＥＬＩＳＡ快速诊断盒对ＩＢＤＶ阳性法氏囊囊毒及ＩＢＤ阳性出血清，ＩＢＤＶ阴性法氏囊及ＩＢＤ阴性血清和ＩＢ，ＩＬＴ，ＥＳＤ－７６，ＲＥＯ，ＮＤ，ＭＤ等６种鸡传染病的抗原及阳性血清检测，只有ＩＢＤＶ阳性法氏囊囊毒及阳性血清呈阳性反应，证明快速诊断盒对ＩＢＤＶ法氏囊囊毒抗原及其抗体的检测是特异的，与其它６种传染病的抗原和抗体无效叉反应。与ＡＧＰ对比试验结果表明，检测ＩＢＤＶ阳性法氏囊囊毒时，快     

分泌抗IBDV独特型抗体细胞株的建立

应用提取纯化的抗ＩＢＤＶ ＩｇＧ免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，其脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞在ＰＥＧ作用下融合，应用ＥＬＩＳＡ法检测筛选，经有限稀释法克隆２次，获得了２株（２Ｂ６株、５Ｆ４株）分泌抗ＩＢＤＶ独特型抗体的杂交瘤细胞株，并能诱生Ｂａｌｂ／ｃ小鼠产生高效价的含抗ＩＢＤＶ独型抗体腹水。     

抗IBDV独特型抗体疫苗的制备与应用

应用提取纯化的抗ＩＢＤＶＩｇＧ免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与ＳＰ２／０细胞在ＰＥＧ作用下融合，应用ＥＬＩＳＡ法检测筛选，经有限稀释法克隆２次，获得２株（２Ｂ６株，５Ｆ４株）分泌抗ＩＢＤＶ独特型抗体的杂交瘤细胞株，其能诱生ＢＡＬＢ／ｃ小鼠产生高效价的含抗ＩＢＤＶ独特型抗体的腹水。用此独特型抗体分别与福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂按１∶１比例乳化制备成抗ＩＢＤＶ独特型抗体疫苗，免疫接种ＳＰＦ鸡和普通京白公鸡，然后用ＩＢＤＶ野毒株经点眼和滴鼻方式攻毒，保护率分别为８／８、１４／１４，从而证实抗独特型抗体疫苗有潜在的研究和应用价值。     

应用ELISA双抗体夹心法检测传染性法氏囊病免疫器官病毒抗原…

利用ＩＢＤＶ高免血清ＩｇＧ作为包被抗体，成功地建立了双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ，对人工感染雏鸡免疫器官抗原动态分布进行了检测。结果表明，不同毒株感染雏鸡免疫器官病毒抗原含量不一致，持续时间也有差异。采用本方法共检测ＩＢＤ阳性样品２７５份，检出率为１００％，检测对照阴性样品２５份，结果均为阴性，比ＡＧＰ法检测率高４０％左右，灵敏度高１００￣２００倍。试验证明双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ可用于组织抗原分布的检测     

应用双抗体夹心法ELISA检测IBDV的研究

从抗ＩＢＤＶ高免蛋黄液中提取ＩｇＧ，用作包被抗体和酶标记，建立了检测ＩＢＤＶ的双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ。经抗原阻断，无关病毒对照、取代、验证等项试验，并与常规ＡＧＰ法比较，对来源不同的１００多个样品进行检测，结果表明：该法对患鸡腔上囊、脾脏的检出率均为１００％，比ＡＧＰ法敏感１００倍以上，用肉眼观察阳性与阴性之间颜色差异显著，不存在非特异性反应。试验证明该法具有满意的待异性、敏感性、快速性和稳定性，是ＩＢＤ早期病原学诊断和流行病学调查的有效手段。     

单抗介导的斑点ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒的研究

用群特异性的单克隆抗体作第一抗体,用酶标兔抗体ＩＢＶＩｇＧ作第二抗体,建立夹心法Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ程序检测鸡传染性支气管炎病毒抗原。试验表明,本程序检测ＩＢＶ抗原高度敏感性和特异性。最低抗原检出量为０．５μｇ,约１００个气管环半数感染量（１００ＴＯＣＩＤ５０）,阳性检出率为９６％。     

抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立

将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）组织毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，用ＥＬＩＳＡ，病毒中和试验检测分泌抗体，获得了６株稳定分泌抗ＩＢＤＶ单隆抗体的杂交瘤细胞，命名为ＮＩＢ－１，ＮＩＢ－２，ＮＩＢ－３，ＮＩＢ－４，ＮＩＢ－５，ＮＩＢ－６；６株ＭＣＡｂ均具ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性，亚类鉴定表明，前４株属于ＩｇＧ２ａ，后２株属于ＩｇＧ１。杂交瘤细胞冻存６个月后复苏，均     

检测鸡慢性呼吸道病抗体ELISA方法的建立

用败血支原体（ＭＧ）Ａ５９６９株制备ＥＬＩＳＡ抗原,与抗鸡ＩＧ单抗ＩＢ７酶结合物建立了检测鸡血清抗体水平的间接ＥＬＩＳＡ方法,交叉试验、阻断试验、重复性试验等表明该方法重复性好、特异性强、灵敏度高。确立了将鸡血清６４倍稀释监测ＥＬＩＳＡ效价（ＥＴ）的回收方程ｙ＝１．３８３＋０．２２４ｘ,可用于定量测定,血凝抑制试验（ＨＩ）与ＥＬＩＳＡ比较试验表明,ＥＬＩＳＡ法比ＨＩ试验敏感性高４倍以上。     

用ELISA法检测犬细小病毒抗体

本文采用吸附豚鼠犬细小病毒（ＣＰＶ）多克隆抗体的微量板，进行间接酶免疫测定（ＥＬＩＳＡ）检测犬血清中的ＣＰＶ抗体。结果，ＥＬＩＳＡ抗体效价比血凝抑制抗体（ＨＩ）效价高，与ＨＩ效价的相关系数ｒ＝０．７８。     

斑点免疫金银染色法检测鸡传染性支气管炎病毒抗原的研究

用建立的斑点免疫金银染色（Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ）法检测鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）抗原,确定兔抗ＩＢＶ血清工作浓度为１：４００,ＳＰＡ－胶体金探针的工作浓度为１：８０,该法对纯化ＩＢＶ抗原的最低检出量为０．４３１４ｎｇ／点,用Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ与斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）同时检测１５只人工感染ＩＢＶ鸡的气管,肺,肾病科,ＩＢＶ阳性检出率均为１００％,对３２份疑似ＩＢＶ感染鸡病料检测,Ｉ     

鉴别新城疫病毒弱毒株的抗多肽抗体制备

针对鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）弱毒株Ｆ蛋白前体（Ｆ０）Ｆ２片段的特异结构,人工合成特异性多肽,将多肽与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）化学偶联制和轩成全抗原后免疫小鼠,制备抗多肽血清。经ＥＬＩＳＡ检测,该抗体与ＭＤＶ弱毒株呈阳性反应,而与鸡痘病毒（ＦＰＶ）,鸡传染性腔上囊病病毒（ＩＢＤＶ）,ＭＤＶ强毒Ｆ４８Ｅ８株和四平析呈阴性反应,试验结果证明该抗体可以用于鉴别ＮＤＶ弱毒株。     

二种方法检测猪传染性胃肠炎病毒抗体的比较

分别用血清中和试验和单克隆抗体阻断酶联免疫吸附试验对８１头美国进口猪轿清作猪传染性胃肠炎抗体检测。ＳＮ试验同７份阳性血清，检出率为８．６４％，Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清，检出率为８．６４％，无ＴＧＥ阳性。ＳＮ试验检出７份ＴＧＥ抗体阳性血清与Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出的７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清完全重合。结果证明，应用单克隆抗体进行的Ｂ－ＥＬＩＳＡ可鉴别诊断ＴＧＥ与ＰＲＣＶ感染，优于Ｓ     

间接夹心ELISA检测新城疫病毒抗原

以ＳＰＦ鸡抗新城疫病毒ＩｇＧ为包被抗体，兔抗ＮＤＶ ｖｅｒｏ细胞培养纯化毒ＩｇＧ为第二抗体，酶标记羊抗兔ＩｇＧ为指示抗体，建立了检测ＮＤＶ的间接夹心ＥＬＩＳＡ，并分别以兔抗ＮＤＶ鸡胚毒纯化ＨＮ糖蛋白，Ｆ糖蛋白ＩｇＧ为第二抗体进行了比较试验，并对攻毒鸡外分泌物样品进行了病原检测。     

热应激对鸡免疫应答的影响

用ＩＳＡ蛋雏研究２７～３８℃昼夜节律高温对新城疫（ＮＤ）疫苗和传染性法氏囊病（ＩＢＤ）疫苗活苗免疫后体液免疫反应的影响，结果表明：ＮＤ苗或ＩＢＤ苗免疫后立即产生热应激，不论ＮＤ的ＨＩ抗体水平还是ＥＬＩＳＡ抗ＩＢＤ抗体滴度在整个实验过程中均受到显著抑制（Ｐ＜０．０５）；应激后立即免疫ＮＤ疫苗或ＩＢＤ疫苗的鸡，ＨＩ抗体水平在免疫后第５和１４天和ＥＬＩＳＡ抗体滴度在免疫后第９天和１６天与对照组相比显著降低（Ｐ＜０．０５）；应激后２４小时免疫，或免疫后２４小时至若干天遭受高温应激的鸡，抗ＮＤ和ＩＢＤ抗体水平分别在免疫后第１４天和１６天均受到显著抑制（Ｐ＜０．０５）。试验组免疫器官与体重之比与对照组间无显著性差异，但免疫器官的组织学结构都有明显的坏死和萎缩性变化