胶乳凝集试验在鸡传染性法氏囊病诊断中的应用（摘要）

本文应用鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体（ＩＢＤＶ—ＭｃＡｂ）致敏的聚苯乙烯胶乳，建立了检测ＩＢＤＶ抗原和抗体的胶乳凝集（ＬＰＡ）和胶乳凝集抑制（ＬＰＡＩ）试验。ＬＰＡ可检测出６μｇ／ｍｌＩＢＤＶ蛋白。作者比较了ＬＰＡ、直接荧光抗体试验（ＤＦＡ）和琼脂扩散沉淀试验（ＡＧＰ）三种方法检测ＩＢＤＶ抗原的特异性、敏感性和相关性，明确了ＬＰＡ和ＤＦＡ试验的检出率高于ＡＧＰ。ＬＰＡ和ＤＦＡ试验结果的符合率为８６％。     

雏番鸭细小病毒病诊断技术和试剂的研究

根据番鸭细小病毒单克隆抗体（ＭＰＶ－ＭｃＡｂ）致敏的胶乳可与ＭＰＶ产生特异性凝集反应，而这种特异性凝集反应可被ＭＰＶ抗体所抑制的原理，建立了胶乳凝集试验（ＬＰＡ）和胶乳凝集抑制试验（ＬＰＡＩ）。致敏抗体蛋白浓度为０．５ｇ／Ｌ时，ＬＰＡ可检测出ＭＰＶ最小蛋白量为２μｇ／Ｌ。对ＬＰＡ与ＦＡ、ＬＰＡＩ与ＡＧＰ作了比较，结果：ＬＰＡ阳性率９０．５％，ＦＡ阳性率９２．４％，两者的符合率９２．４％；鸭血清ＬＰＡＩ抗体效价在Ｌｏｇ２５以下时，ＡＧＰ试验均阴性，前者比后者敏感性高３２～６４倍。ＬＰＡＩ抗体效价与保护力相关性试验结果表明，当鸭血清中ＬＰＡＩ抗体效价在Ｌｏｇ２１以上时，雏番鸭均能耐受强毒的攻击，两者呈正相关。致敏胶乳和抗原保存时间在４～８℃时，分别为５个月和６个月；在２２～２８℃时，分别为７ｄ和１５ｄ。     

用单克隆抗体连接聚苯乙烯胶乳微球快速定量检测抗IBDV…

将具有病毒中和活性的抗ＩＢＤＶ单克隆抗体连接于聚苯乙烯胶乳微球上，微球与ＩＢＤＶ感染鸡的法氏囊提取物发生凝集，这种凝集可通过加入阳性血清以一种竞争的方式被抑制，凝集抑制的水平取决于抗ＩＢＤＶ的血清抗体效价。反应可在５分钟内完成，此检测方法的效价与病毒中和试验的滴度有密切的相关性。     

鸡传染性法氏囊病ELISA快速诊断盒的研制及应用

用ＩＢＤ－ＥＬＩＳＡ快速诊断盒对ＩＢＤＶ阳性法氏囊囊毒及ＩＢＤ阳性出血清，ＩＢＤＶ阴性法氏囊及ＩＢＤ阴性血清和ＩＢ，ＩＬＴ，ＥＳＤ－７６，ＲＥＯ，ＮＤ，ＭＤ等６种鸡传染病的抗原及阳性血清检测，只有ＩＢＤＶ阳性法氏囊囊毒及阳性血清呈阳性反应，证明快速诊断盒对ＩＢＤＶ法氏囊囊毒抗原及其抗体的检测是特异的，与其它６种传染病的抗原和抗体无效叉反应。与ＡＧＰ对比试验结果表明，检测ＩＢＤＶ阳性法氏囊囊毒时，快     

马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B抗原Ⅰ型特异性和群共同性决定簇的单克隆抗体

用能表达马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｂ（ｇＢ）的重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞免疫小鼠，制备针对ＭＤＶｇＢ的单克隆抗体。以Ⅰ型马立克氏病病毒ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞作为检测抗原，同时以免疫荧光试验（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）来筛选杂交瘤细胞，结果获得了ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ均为阳性的２株单克隆抗体细胞株，定名为ＢＡ４和ＢＤ８。在ＩＦＡ和免疫沉淀试验中，单抗ＢＤ８与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ＭＤＶ均呈阳性反应；单抗ＢＡ４只对Ⅰ型ＭＤＶ（包括ＣＶＩ９８８疫苗株）呈阳性反应。免疫沉淀反应进一步确证２株单抗识别的是ＭＤＶ糖蛋白Ｂ抗原。     

马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B抗原I型特异性和群共同性决定簇的…

用能表达马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｂ（ｇＢ）的重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞免疫小鼠，制备针对ＭＤＶｇＢ的单克隆抗体，以Ｉ型马立克氏病病毒ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞作为检测抗原，同时以免疫荧光试验（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）来筛选杂交瘤细胞，结果获得了ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ均为阳性的１株单克隆抗体细胞株，定义名ＢＡ４和ＢＤ８。在ＩＦＡ和免疫沉淀试验中，单抗ＢＤ８与Ｉ，ⅡⅢ型ＭＤＶ均呈阳     

用间接荧光抗体试验检测鸡肾型传染性支气管炎抗原的研究

建立检测鸡肾型传染性支气管炎抗原的间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）其抗体感染作时间Ｉ抗以５０～６０ｍｉｎ，Ⅱ抗以３０～４０ｍｉｎ最佳。该法具有良好的特异性，可检测出人工感染鸡肾型传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ａｕｓｔ－Ｔ，ＨＮ９３０１，ＴＪ９３０１，ＢＪ９３０１毒株后的抗原；对自然发病病例检测结果，阳性符合率高于Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和气管环中和试验法。     

应用间接免疫荧光法检测禽网状内皮组织增生病病毒抗体的研究

用禽网状内皮组织增生病病毒（ＲＥＶ）感染ＳＰＦ鸡胚次代成纤维细胞涂片为抗原,建立了检测ＲＥＶ抗体的间接免疫荧光法（ＩＦＡ）。确定了待检血清稀释度１∶６４和兔抗鸡ＩｇＧ荧光抗体的稀释度１∶３２的工作浓度。应用该ＩＦＡ方法对人工感染ＲＥＶ的２０只３０日龄ＳＰＦ鸡进行了检测,接种后４天时均呈阴性反应,７天时８只鸡呈阳性反应,１４天２０只全部呈阳性的反应。通过对ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＡＬＶ、ＭＤＶ、ＣＩＡＶ、ＡＩＶ等标准阳性血清的交叉试验,证明该方法特异性强。应用该ＩＦＡ方法对我国辽宁、山东、黑龙江省部分鸡群进行ＲＥＶ抗体检测,证明该方法特异性强、敏感性高,适于在生产中推广应用。     

用ELISA检测牛血清中的牛病毒性腹泻病毒抗体

一般均用血清中和（ＳＮ）试验和间接免疫荧光（１１Ｆ）试验检测牛血清中的抗牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）抗体，本文用ＳＮ和１１Ｆ敏感性相当的ＥＬＩＳＡ检测ＢＶＤＶ抗体，共测定４７２份牛血清，有７９．２％为阳性。ＥＳＩＳＡ与ＳＮ呈正相关，表明ＥＬＩＳＡ可用于ＢＶＤＶ的常规诊断。     

应用间接免疫荧光法检测禽网状内皮组织增生病病毒抗体的研究

用禽网状内皮组织增生病病毒（ＲＥＶ）感染ＳＰＦ鸡胚次代成纤维细胞涂片为抗原，建立了检测ＲＥＶ抗体的间接免疫荧光法（ＩＦＡ）。确定了待检血清稀释度１：６４和兔抗鸡ＩｇＧ荧光抗体的稀释度１：３２的工作浓度。应用该ＩＦＡ方法对人工感染ＲＥＶ的２０只３０日龄ＳＰＦ鸡进行了检测，接种后４天时均呈阴性反应，７天时８只鸡呈阳性反应，１４天２０只全部呈阳性的反应。通过对ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＡＬＶ、ＭＤＶ、ＣＩＡＶ、     

间接免疫荧光检测禽脑脊髓炎病毒抗体

ＡＥＶ Ｖａｎ Ｒｏｅｋｅｌ鸡胚适应株在鸡胚成纤维细胞和鸡胚神经胶质细胞传代，用盲传至第６代的ＣＥＦ，ＣＥＢ制成荧光标本。建立了ＡＥＶ荧光抗体检测方法，确定了待检血清稀释度１：１０和荧光抗体ＦＩＴＣ羊抗鸡ＩｇＧ的稀释率１：１０的工作浓度。通过对ＮＤＶ，ＭＤＶ，ＩＢＤＶ，ＡＩＶ，Ｒｅｏ等标准阳性血清的交叉试验，证实该法特性强且简单，方便经济，适合于鸡群ＡＥＶ抗体的检测。     

鉴别新城疫病毒弱毒株的抗多肽抗体制备

针对鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）弱毒株Ｆ蛋白前体（Ｆ０）Ｆ２片段的特异结构,人工合成特异性多肽,将多肽与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）化学偶联制和轩成全抗原后免疫小鼠,制备抗多肽血清。经ＥＬＩＳＡ检测,该抗体与ＭＤＶ弱毒株呈阳性反应,而与鸡痘病毒（ＦＰＶ）,鸡传染性腔上囊病病毒（ＩＢＤＶ）,ＭＤＶ强毒Ｆ４８Ｅ８株和四平析呈阴性反应,试验结果证明该抗体可以用于鉴别ＮＤＶ弱毒株。     

IBD抗体与IBDV混合组建的新型IBDV疫苗最佳组合的测定

作者研制了一种新型抗ＩＢＤＶ疫苗。该疫苗是将抗血清中所含的抗ＩＢＤＶ抗体（ＢＤＡ）与活的ＩＢＤＶ在冻干前混合制成。为设置ＢＤＡ与ＩＢＤＶ的不同组合，５￣８０ｕＢＤＡ／５０μｌ与１００ＥＩＤ５０／５０μｌ的ＩＢＤＶ悬液在试验１中混合；在试验２中，１０￣９７７ＥＩＤ５０／５０μｌＩＢＤＶ悬液与２４ｕＢＤＡ／５０μｌ混合。疫苗制备物颈部皮下注射于１日龄ＳＰＦ鸡，利用囊重、囊眼观检查和ＩＢＤＶ抗体效价对不     

间接免疫荧光检测禽脑脊髓炎病毒抗体

ＡＥＶＶａｎＲｏｅｋｅｌ鸡胚适应株在鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）和鸡胚神经胶质细胞（ＣＥＢ）传代,用盲传至第６代的ＣＥＦ、ＣＥＢ制成荧光标本。建立了ＡＥＶ荧光抗体检测方法,确定了待检血清稀释度１∶１０和荧光抗体ＦＩＴＣ羊抗鸡ＩｇＧ的稀释度１∶１０的工作浓度。通过对ＮＤＶ、ＭＤＶ、ＩＢＤＶ、ＡＩＶ、Ｒｅｏ等标准阳性血清的交叉试验,证实该法特异性强,且简单、方便、经济,适合于鸡群ＡＥＶ抗体的检测。     

传染性法氏囊病病毒抗体检测诊断试剂盒的研制与应用

本文用提纯的ＩＢＤＶ细胞毒为抗原,抗鸡Ｉｇ单抗１Ｂ７－ＨＲＰ酶结合物为第二抗体建立了检测ＩＢＤＶ抗体的间接ＥＬＩＳＡ,在此基础研制出ＩＢＤＶ抗体检测诊断剂盒,经过１２００份血清进行检测,结果表明,本试剂盒特异性强,灵敏度高,重复性好,快速稳定,易于操作,为雏鸡ＩＢＤＶ母原抗体和疫苗注射后特异性本检测提供了可靠的诊断工具。     

免疫过氧化物酶单层试验检测鸡传染性法氏囊病病毒抗体的研究

建立了检测鸡血清中传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）抗体的免疫过氧化物酶单层试验（ＩＰＭＡ）。用于野外鸡血清中ＩＢＤＶ抗体检测。结果表明，ＩＰＭＡ比琼脂凝胶扩散试验（ＡＧＤ）更敏感、快速稳定。这为ＩＢＤ和其它疾病的诊断提供了一种新方法。     

IBDV灭活病毒口服接种雏鸡后诱导的保护性免疫

本研究检测了口服福尔马林灭活的传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）对雏鸡的免疫效果。灭活ＩＢＤＶ悬浮于含碳酸钠的ＰＢＳ中，当口灌服后，这种抗原可使雏鸡产生一种抗ＩＢＤＶ血清抗体，这些雏鸡可以抵抗病毒的攻击，当用ＥＬＩＳＡ检测时，证实血清中ＩＢＤＶ特异抗体的免疫球蛋白属于ＩｇＧ，曾报道霍乱毒素对哺乳动物有很地的粘膜辅助特性，但不能增强血清抗体应答，雏鸡经口接种，随后经非肠道途径接种抗原可使抗体应答增强。     

传染性法氏囊病病毒抗体检测诊断试剂盒的研制与应用

本文用提纯的ＩＢＤＶ细胞毒为抗原,抗鸡Ｉｇ单抗１Ｂ７ＨＲＰ酶结合物为第二抗体建立了检测ＩＢＤＶ抗体的间接ＥＬＩＳＡ。在此基础上研制出ＩＢＤＶ抗体检测诊断试剂盒。经对１２００份血清进行检测,结果表明：本试剂盒特异性强,灵敏度高,重复性好,快速稳定,易于操作,为雏鸡ＩＢＤＶ母原抗体和疫苗注射后特异性抗体检测提供了可靠的诊断工具。     

应用间接荧光抗体染色法监测鸡传染性支气管炎抗体的研究

本文对间接荧光抗体染色法监测鸡传性支气管炎抗体进行了研究。试验结果表明感染鸡性染性支气管炎病毒的鸡成纤维细胞（ＣＥＦ）不适宜做ＩＦＡ方法的抗原，而感染ＩＢＶ后３６－４８小量的鸡胚肾细胞制做ＩＦＡ抗原效果很好。应用１０％犊牛血清封闭并适当改进洗涤条件要非特异性荧光。本试验将所建立的ＩＦＡ方法与美国ＫＰＬ生产的ＩＢＶ－ＥＬＩＳＡ进行了比较。应用ＩＦＡ方法第七天查出血清抗体。通过对十二个鸡群进行流行病调     

口蹄疫合成肽酶联免疫吸附试验试剂盒在口蹄疫抗体检测中的应用

前言 口蹄疫（ｆｏｏｔ－ａｎｄ－ｍｏｕｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ ＦＭＤ）是由口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）引起偶蹄兽的一种多呈急性热性、高度接触感染的传染病，被国际兽疫局（ＯＩＥ）列为Ａ类家畜传染病之首，各国对此均非常重视。ＯＩＥ推荐的检测ＦＭＤＶ抗体的标准方法是中和试验，由于这一方法必须使用活病毒，非普通实验室所能操作，而且中和试验全然不能区分免疫抗体和感染抗体。利用病毒感染相关抗原（ＶＩＡ）所进行的琼脂扩散试验曾一度广泛用于区分免疫抗体和感染抗体，但由于疫苗中无法排除ＶＩ－Ａ，使得多次免疫动物后也会产生Ｖ…