猪乙型脑炎病毒广西分离株FC792E基因主要抗原域的原核表达及抗原性鉴定

对广西猪JEV FC792株的E基因主要抗原域Ⅰ、Ⅱ基因(Ea基因)进行原核表达及抗原性鉴定,为猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)诊断抗原和基因工程疫苗的研制奠定基础.结果:成功构建广西猪JEV FC792株Ea基因的克隆重组质粒pMD18-T-Ea及表达重组质粒 pET32a-Ea,经SDS-PAGE及Western blot鉴定表明,JEV FC792株Ea蛋白在Roetta(DE3)菌中成功进行融合表达,表达出约58 KDa的融合蛋白;经抗原性鉴定表明,表达的融合蛋白Ea能与猪JEV阳性血清抗体发生特异性反应,融合蛋白Ea具有良好的JEV抗原性.     

猪繁殖与呼吸综合征和猪乙型脑炎双重一步法RT-PCR诊断试剂盒的研制

根据GenBank中的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）ORF7N基因、猪乙型脑炎病毒（JEV）NS1基因序列,设计了2对引物,通过反应条件的优化,成功研制了检测PRRSV和JEV的双重一步法RT-PCR诊断试剂盒,扩增产物分别为245、504 bp。敏感性、 特异性结果显示,该RT-PCR诊断试剂盒对2种病毒的最低核酸检测量分别为PRRSV0.2ng/L、JEV 0.4ng/L,而对猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒的扩增结果均为阴性。对52份疑似病猪样品的检测结果表明,该双重一步法RT-PCR诊断试剂盒检测结果与单一PCR检测结果完全符合。结果表明该双重一步法RT-PCR诊断试剂盒具有很好的特异性和敏感性,可用于临床猪繁殖与呼吸综合征和猪乙型脑炎的检测。     

猪流行性乙型脑炎的综合防控

正流行性乙型脑炎,是由乙型脑炎病毒(JEV)引起的一种蚊媒性人畜共患传染病,对人畜健康危害极大。该病多发于每年7—10月蚊虫滋生繁衍和活动季节。猪是该病毒的主要增殖宿主、扩散宿主和传染源,易感季节在管理不善的猪群中感染率极高,是夏秋季养猪场主要流行病之一,     

夏秋季节谨防猪乙型脑炎

乙型脑炎又称流行性乙型脑炎、日本乙型脑炎,简称乙脑,是由乙型脑炎病毒(JEV)引起的一种人畜共患传染病,在我国属于二类疫病。猪感染后表现为高热、流产、产死胎及公猪睾丸炎。本病由蚊虫传播,常于夏末秋初流行,该病对人类危害巨大,是人类中枢神经系统最常见的虫媒病之一,近年来,乙脑的流行有增强的趋势。     

人畜共患病的头号“杀手” ——狂犬病

流行性乙型脑炎(简称乙脑)是由日本脑炎病毒(JEV)而引起的急性人畜共患传染病,猪感染后主要是妊娠母猪表现流产,产死胎,公猪表现睾丸肿大,少数病猪表现有神经症状.     

广西猪乙型脑炎病毒的分离及初步鉴定

【目的】了解广西猪乙型脑炎（JE）地方流行毒株特点,为有效防控广西猪JE奠定基础。【方法】对从广西各地猪场采集疑似JE病例猪的脑组织、流产胎儿、死胎、木乃伊胎、公猪精液、猪舍蚊子等靶组织样品进行猪乙型脑炎病毒（JEV）检测,并选择部分阳性样品进行JEV分离鉴定及病毒E基因遗传进化分析。【结果】在采集的465份JE疑似病料样品中,有72份为JEV阳性;通过接种BHK-21细胞、乳鼠及SPF鸡胚,分离获得两株JEV地方分离毒株,分别命名为GP株和LC株;遗传进化分析显示,GP株和LC株之间的核苷酸和氨基酸同源性分别为99.9%和99.8%;两株分离株与疫苗毒株SA14-14-2的核苷酸同源性分别为99.7%和99.9%,氨基酸同源性分别为99.4%和99.6%,且均属GIII型JEV。【结论】广西受检猪群存在较严重的JEV感染,应引起重视并加强防控。     

慎防人畜共患病 猪流行性乙型脑炎

流行性乙型脑炎(简称乙脑)是由日本脑炎病毒(JEV)而引起的急性人畜共患传染病,猪感染后主要是妊娠母猪表现流产,产死胎,公猪表现睾丸肿大,少数病猪表现有神经症状.     

猪乙型脑炎病毒SYBR-GreenⅠ实时荧光定量PCR方法的建立

为建立猪乙型脑炎病毒(JEV)的定量检测方法,根据E基因序列,设计1对特异性引物,建立检测JEV的荧光定量PCR方法。结果显示,该方法灵敏度达到10~3拷贝/μL,对猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病毒(PRV)均无交叉反应,具有良好的特异性和重复性;采用JEV攻毒小鼠,荧光定量PCR比普通PCR更能灵敏地检出组织带毒量。该方法可用于组织样品中乙脑病毒的定量检测以及临床乙脑病毒感染的早期检测和定量分析猪乙脑病毒感染程度。     

广西猪乙型脑炎病毒的分离及初步鉴定

【目的】了解广西猪乙型脑炎（JE）地方流行毒株特点,为有效防控广西猪JE奠定基础。【方法】对从广西各地猪场采集疑似JE病例猪的脑组织、流产胎儿、死胎、木乃伊胎、公猪精液、猪舍蚊子等靶组织样品进行猪乙型脑炎病毒（JEV）检测,并选择部分阳性样品进行JEV分离鉴定及病毒E基因遗传进化分析。【结果】在采集的465份JE疑似病料样品中,有72份为JEV阳性;通过接种BHK-21细胞、乳鼠及SPF鸡胚,分离获得两株JEV地方分离毒株,分别命名为GP株和LC株;遗传进化分析显示,GP株和LC株之间的核苷酸和氨基酸同源性分别为99.9%和99.8%;两株分离株与疫苗毒株SA14-14-2的核苷酸同源性分别为99.7%和99.9%,氨基酸同源性分别为99.4%和99.6%,且均属G III型JEV。【结论】广西受检猪群存在较严重的JEV感染,应引起重视并加强防控。     

乙型脑炎病毒非结构蛋白的表达及与hnRNP K的相互作用

【目的】为探明JEV病毒复制与宿主蛋白的关系。【方法】首先构建非结构蛋白质粒,然后将构建成功的非结构蛋白的质粒转染至Vero细胞中,24 h在荧光显微镜下观察蛋白表达情况,再分别与pCMV-MYC-hnRNP K质粒同时转染至Vero细胞中,培养24 h,收取细胞蛋白样,进行Co-IP试验相关步骤,用Western-blot实验进行结果呈现,得出试验结果。【结果】构建的非结构蛋白质粒在Vero细胞中可以表达,通过与表达hnRNP K蛋白的质粒共转染,通过Co-IP试验经Western-blot结果分析能够得出JEV的NS1与hnRNP K之间存在相互作用,JEV的NS2a、NS3、NS5与宿主hnRNP K之间不存在相互作用。【结论】JEV的NS1蛋白与宿主蛋白hnRNP K存在相互作用,为JEV非结构蛋白的研究进一步拓宽了思路,同时为JEV病毒在宿主细胞中的生命活动周期的研究提供了基础,为深入研究JEV病毒复制提供了新方向。     

遵义市规模化猪场猪繁殖障碍性疫病的血清学调查

为给遵义市规模化猪场猪繁殖障碍性疫病的防治提供参考依据,对遵义市9个规模化猪场送检的血清分别进行了猪细小病毒(PPV)﹑猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)﹑猪瘟病毒(HCV)﹑猪伪狂犬病毒(PRV)﹑猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪乙型脑炎病毒(JEV)等6种猪繁殖障碍性疫病的ELISA抗体检测。结果表明:免疫群体中HCV、PCV2、PRV、PPV、JEV和PRRSV的平均阳性率分别为63.2%、80.2%、58.4%、57.5%、68.1%和48.8%,非免疫群体中PCV2、PRV、PPV和JEV的平均阳性率分别为62.8%、36.7%、32.1%和29.6%,存在PCV2、PRV、PPV、JEV不同程度的野毒感染。     

猪流行性乙型脑炎的综合防治

正流行性乙型脑炎,是由乙型脑炎病毒(JEV)引起的一种蚊媒性人畜共患病。本病多发生于7～10月蚊虫滋生繁衍和活动旺盛季节,猪是该病毒最主要的增殖宿主、扩散宿主和传染源,易感季节在管理不善的猪群中感染率极高,是夏、秋季猪场主要流行病之一,常呈散发性或地方性流行,严重危害养猪业的健康发展,需要采取综合性措施加以防控。一、临床症状与病理变化     

广西猪乙型脑炎血清流行病学调查分析

【目的】了解广西地区猪乙型脑炎（JE）的感染情况及流行态势,为制定广西猪群JE监测和防控体系提供参考依据。【方法】2008～2010年,采集广西边境14市未经JE疫苗免疫的2597份猪血清,采用LAT检测乙型脑炎病毒（JEV）血清抗体,并对不同区域、季节和年龄段等猪群JE流行状况进行分析。【结果】广西受检猪群JEV血清抗体平均阳性率为60.65%;感染率以桂南地区最高（72.15%）,桂北地区最低（35.71%）;夏秋季节（5～11月）是主要流行季节,平均JEV血清抗体阳性率达70.67%,3～4月仅为26.75%;2008～2010年,猪群JEV血清抗体阳性率总体呈上升趋势。【结论】广西受检猪群JE感染较普遍,有一定的地域性及季节性,且感染率呈逐年上升趋势。猪是JEV重要的贮存宿主及传染源,应采取有效的监测与防控措施,杜绝猪JE的流行传播。     

广西猪乙型脑炎血清流行病学调查分析

【目的】了解广西地区猪乙型脑炎（JE）的感染情况及流行态势,为制定广西猪群JE监测和防控体系提供参考依据。【方法】2008～2010年,采集广西边境14市未经JE疫苗免疫的2597份猪血清,采用LAT检测乙型脑炎病毒（JEV）血清抗体,并对不同区域、季节和年龄段等猪群JE流行状况进行分析。【结果】广西受检猪群JEV血清抗体平均阳性率为60.65%;感染率以桂南地区最高（72.15%）,桂北地区最低（35.71%）;夏秋季节（5～11月）是主要流行季节,平均JEV血清抗体阳性率达70.67%,3～4月仅为26.75%;2008～2010年,猪群JEV血清抗体阳性率总体呈上升趋势。【结论】广西受检猪群JE感染较普遍,有一定的地域性及季节性,且感染率呈逐年上升趋势。猪是JEV重要的贮存宿主及传染源,应采取有效的监测与防控措施,杜绝猪JE的流行传播。     

猪日本乙型脑炎病毒NS5原核表达和多克隆抗体制备

提取猪日本乙型脑炎病毒(JEV)上海分离株的基因组RNA,反转录合成cDNA,扩增JEV-NS5基因片段,亚克隆到原核表达载体pET-28(a)上,构建重组原核表达质粒pET-28(a)-JEV-NS5,转化大肠埃希氏菌BL21(DE3)菌株,IPTG诱导表达重组JEV-NS5蛋白,获得分子质量为103 ku的重组蛋白.该蛋白主要以包涵体形式表达,表达量占总菌体蛋白的35%以上,His-band Ni+纯化后,获得高纯度重组蛋白占总蛋白的比例达75%以上.以纯化的蛋白免疫小鼠,制备小鼠抗JEV-NS5抗体,抗体效价达到3×104,并能与病毒感染的样本反应,证明该蛋白具有较好的特异性.     

猪乙型脑炎病毒RT-PCR检测方法的建立

根据猪乙型脑炎病毒(JEV)基因序列,设计合成了一对引物,以JEV疫苗株为模板,建立了检测JEV的RT PCR方法。应用该方法对JEV疫苗株RNA进行扩增,获得与预期大小相符,长度为430 bp的特异性目的片段;RT PCR产物测序结果与文献报道的JEV不同毒株的序列同源性达到98%~100%;敏感性测定该RT PCR可扩增到10 pg的JEV-RNA。结果表明,建立的RT PCR方法对JEV的检测敏感性高、特异性强。     

猪流行性脑炎的综合防治

猪流行性脑炎,最早发生在日本,又称日本乙型脑炎。猪流行性乙型脑炎是由流行性乙型脑炎病毒引起的一种人畜共患传染病。病猪主要表现怀孕母猪高热、流产、死胎和公猪睾丸炎,或发生睾丸肿胀。猪流行性乙型脑炎病毒是披     

猪乙脑病毒重组E基因的克隆表达及间接ELISA检测方法研究

参照已发表的猪乙脑病毒(JEV)基因组序列,设计引物,扩增出E基因,克隆到pMD19-T载体中。序列分析表明:E基因与NCBI登录的JEV毒株E基因序列同源性达到96.6%—99.7%;遗传进化分析表明:该JEV属于GIII病毒。将E基因片段亚克隆到pET32a-E,IPTG诱导表达E蛋白。Western Blot检测表明:该重组蛋白能与JEV高免血清发生非特异性反应,证明该表达产物为JEV E蛋白。以重组E蛋白为包被抗原,建立检测猪JEV抗体的间接ELISA方法,检测160份猪血清样品,与猪JEV抗体检测试剂盒进行平行性对比,结果显示二者的吻合率为92.2%,表明建立的ELISA方法具有较好的特异性,有望为临床提供一种JEV血清抗体检测方法。     

日本乙型脑炎病毒对猪外周血单核细胞炎性因子mRNA转录时相影响的研究

为分析猪日本乙型脑炎病毒(JEV)感染猪外周血单核细胞后对其促炎因子转录的影响,探讨JEV感染的分子免疫致病机制。采用real-time RT-PCR方法,测定并分析了JEV感染猪外周血单核细胞(PBMC)后病毒RNA含量及白细胞介素(IL-8、IL-12p35、IL-12p40、IL-17、IL-18)炎性细胞因子mRNA转录时相的变化。结果显示,JEV感染猪PBMC后引起IL-8,IL-12p35和p40的分泌呈现不规则的曲线,IL-18表达量持续升高;IL-17表达量持续下降,仅在感染后48 h的时候达到峰值。以上结果表明,JEV感染PBMC可促使炎性因子分泌增加,参与细胞免疫应答。     

乙型脑炎病毒可视化快速检测方法的建立

利用环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立了简便、可靠的快速检测乙型脑炎病毒JEV(Japanese encephalitis virus)的可视化方法。根据Gen Bank数据库中JEV Henan-09-03毒株(Gen Bank ID:GQ336809.1) E蛋白序列,设计了3对特异性LAMP引物,建立Bst DNA Polymerase等温扩增体系,优化后的反应体系可高灵敏性、特异性检测JEV。本方法通过在扩增产物中加入SYBR Green I染料后用石蜡进行封闭,在可见光下根据反应液荧光的颜色深浅来判断JEV扩增阳性强弱。结果显示,该方法的灵敏度可达5copies·m L-1,且与其他病毒,如乙型肝炎病毒HBV(Hepatitis B virus,HBV)无交叉反应。