GnRH主动免疫与手术去势公猪的粪便Ca、P含量差异及机制研究

实验旨在探讨促性腺激素释放激素(GnRH)主动免疫与手术去势对公猪粪便Ca、P含量差异影响以及影响机制。选择30头10周龄、体重(27.62±2.18 kg)相近(大白×长白×杜洛克)公猪,随机分为对照组、免疫组和手术去势组,每组10头。其中,对照组不做任何处理,手术去势组公猪在出生1周内进行手术阉割,免疫组公猪于10周龄时耳后颈部肌肉注射2 mL 62.5μg GnRH肽当量去势疫苗,8周后加免。加免后饲喂8周屠宰所有公猪,进行血液生长相关激素浓度、小肠黏膜Ca、P转运载体基因表达及粪便Ca、P含量分析。结果显示:与对照组相比,公猪手术去势后十二指肠黏膜Ca转运载体瞬时受体阳离子通道亚家族V成员6(TRPV6)及质膜钙泵1(PMCA1)和P转运载体2B型磷酸钠协同转运蛋白(NPT2b)mRNA表达下调(P0.05),粪便中Ca、P含量增加(P0.05);而公猪GnRH主动免疫后上述Ca、P转运载体基因mRNA表达无显著变化,粪便Ca、P含量低于手术去势公猪(P0.05)。ELISA检测发现,GnRH免疫组公猪血清生长激素(GH)及胰岛素生长因子1(IGF1)浓度高于手术去势组公猪(P0.05),并且血清IGF1浓度与TRPV6、PMCA1及NPT2bmRNA表达呈正相关(P0.05)。结果表明,与外科去势相比,GnRH主动免疫不下调公猪肠道黏膜Ca、P离子转运载体基因表达,因而粪便Ca、P含量较低,这可能与其体内相对较高的GH-IGF1有关。     

GnRH类似肽主动免疫后公猪生长激素水平及体重的变化

10头公猪在 3月龄时用促性腺激素释放激素并列体二聚体 (GnRH TD)主动免疫 ,观测内源GnRH被免疫中和后所产生的生长激素(GH)和体重的变化。注射GnRH TD与卵清蛋白 (OVA)的偶联物 2次 ,结果发现免疫组公猪外周血清中生长激素水平高于阴、阳对照组 ,公猪的生长速度极显著高于阴性对照组 (P <0 0 1 ) ,表明GnRH TD主动免疫能增加猪的体重     

GnRH主动免疫对SD雄鼠下丘脑GnRH合成及性腺反馈系统的影响

探讨GnRH主动免疫对SD雄鼠下丘脑GnRH合成及性腺反馈系统的影响。36只SD雄鼠随机分为免疫组、手术去势组及对照组,免疫组于12周龄时初免,8周后加免。放免法测定血清抗体滴度、激素浓度及下丘脑正中隆起GnRH含量,实时荧光定量PCR分析下丘脑生殖相关基因mRNA的变化。结果显示,GnRH主动免疫后12只免疫鼠中11只血清GnRH抗体滴度显著升高,血清LH、FSH及T浓度显著降低(P<0.05),睾丸严重萎缩(免疫去势鼠)。与对照鼠相比,免疫去势显著降低下丘脑GnRH含量(P<0.01),且显著下调下丘脑雌激素α受体(ERα)、雄激素受体(AR)、Kiss-1、GPR54及GnRH的mRNA表达水平(P<0.05)。手术去势鼠除血清LH、FSH浓度及下丘脑ERα的mRAN表达水平显著高于对照鼠外(P<0.05),其余指标均与免疫去势鼠类似。结果首次表明,GnRH主动免疫抑制性腺负反馈调节作用及降低了下丘脑GnRH的合成。     

在梅山猪与大白猪的杂种猪中，粪臭素和雄烯酮的沉积与细胞色素P4502E1之间的关系

本文研究了在含梅山猪50%的公猪中,与公猪膻味有关的年龄、阉割和日龄对粪臭素和雄烯酮在背膘中沉积的影响。在未去势公猪的背膘中,粪臭素和雄烯酮的沉积随着年龄(114、144和174 d)的增加而增加。去势能明显地减少各个年龄阶段粪臭素和雄烯酮的水平,但能明显地增加各个年龄阶段细胞色素P4502E1的水平,而细胞色素P4502E1是肝脏中粪臭素代谢所涉及的最初的酶。这些结果表明,雄烯酮水平的下降是由于去势影响了细胞色素P4502E1的表达调控,导致了粪臭素水平的下降。在日粮中饲喂甜菜会使粪臭素的水平减少,使细胞色素P4502E1的表达水平增加,但不会影响雄烯酮的水平。这表明,通过去势和在日粮中添加细胞色素P4502E1可以减少粪臭素的沉积。然而,通过日粮中改变细胞色素P4502E1的作用机理与去势不同。     

主动免疫GnRH疫苗对公犬生殖功能的影响

为了探究促性腺激素释放激素(GnRH)疫苗对公犬生殖功能的影响,试验将GnRH基因克隆至原核表达载体中,转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,用终浓度为1 mmol/L IPTG诱导蛋白表达,通过SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行蛋白鉴定,将鉴定正确的GnRH蛋白纯化后制备成抗原。选取6只2～4月龄健康公犬随机分成2组,每组3只,其中免疫组每只犬免疫GnRH蛋白1 mg,共免疫3次,每次间隔4周,分别于免疫前和一免、二免、三免后14天采血,通过ELISA检测血清GnRH抗体及睾酮水平,并于最后一次采血结束后制备睾丸组织切片,观察睾丸组织形态。结果表明：3次免疫后免疫组GnRH抗体水平均显著高于对照组(P<0.05),睾酮水平均显著低于对照组(P<0.05),免疫组睾丸相对较小,曲精小管中生精细胞数量较少,管径较细。说明主动免疫GnRH疫苗抑制了公犬的性腺发育和生殖器官的成熟。     

GnRH主动免疫雌性大鼠调控机制研究

旨在探讨GnRH主动免疫雌性SD大鼠的调控机制。24只雌性SD大鼠随机分为免疫组、卵巢切除组和空白对照组(n=8),免疫组于12周龄注射疫苗,4周后加免;卵巢切除组11周龄外科手术摘除卵巢;空白对照组不作任何处理。使用放射免疫分析法测定血清激素E2、P4、FSH和LH含量,荧光定量PCR分析各基因mRNA表达情况。结果显示,主动免疫显著降低血清E2、P4、FSH和LH含量,至56周处死时,E2和LH含量有微弱上升,但4种激素含量均显著低于空白对照组(P0.05)。与空白对照组相比,主动免疫显著下调下丘脑GPR54、KiSS-1、GnRH和ER-αmRNA,垂体GnRH-R、FSH-β和LH-βmRNA以及卵巢FSHR、LHR和ER-αmRNA的表达水平(P0.05)。结果表明,GnRH主动免疫能显著抑制雌性SD大鼠性腺发育,降低血清性激素含量,通过下丘脑ER-αmRNA-GPR54/KiSS-1通路保持动物较长时间去势;但GnRH主动免疫造成的动物去势存在恢复的可能。     

梅山猪与大白猪的杂种猪中粪臭素和雄烯酮的沉积与细胞色素P4502E1之间的关系

作者研究了在含梅山猪50％的公猪中，与公猪膻味有关的日龄、阉割和日粮对粪臭素和雄烯酮在背膘中沉积的影响。在未去势公猪的背膘中，粪臭素和雄烯酮的沉积随着日龄(114、144和174d)的增加而增加。去势能明显降低各个日龄阶段粪臭素和雄烯酮水平，但能明显增加各个日龄阶段细胞色素P4502E1的水平，而细胞色素P4502E1是肝脏中粪臭素代谢所涉及的最初的酶。这些结果表明，     

SD雄鼠3种不同新蛋白构型GnRH去势抗原免疫学及生物学效果对比研究

旨在对比研究SD雄鼠3种不同新蛋白构型GnRH抗原的免疫学及生物学效果。本研究新蛋白构型GnRH抗原设计采用增加GnRH拷贝数和增大抗原分子量方法。以化学合成法合成G6K-GnRH并列体(G6K-GnRH-tandem,G6KT)作为新蛋白GnRH抗原制备的基本单元。将G6KT二聚化,形成抗原Ⅰ(G6KTD),将G6KT和G6KTD分别与卵清蛋白(OVA)偶联,分别形成抗原П(G6KT-OVA)及抗原Ⅲ(G6KTD-OVA)。试验分5组:完整对照组(不做任何处理,intact control)、外科阉割去势组(surgical castrates)及3种新蛋白构型GnRH免疫组(G6KTD、G6KT-OVA及G6KTD-OVA免疫组)。将(G6KTD、G6KT-OVA、G6KTD-OVA)3种不同新蛋白构型GnRH抗原配于Specol佐剂,分别免疫SD雄鼠,6周龄时初免,腿部肌肉注射1 mL乳化抗原(含相应新构型GnRH蛋白100μg),8周后加免,注射剂量与方法同初次免疫,每试验组12只雄鼠。放免法及酶联免疫法测定血清抗体及生殖激素浓度变化,qPCR检测垂体-睾丸生殖相关基因mRNA表达变化。结果显示:1)SD雄鼠主动免疫3种不同新蛋白构型GnRH抗原后均能产生良好的抗体反应。2)G6KT-OVA及G6KTD-OVA免疫组仅初免就能诱发较高水平的抗体产生,并显著降低雄鼠血清LH、FSH、睾酮(T)及抑制素B (INHB)浓度(P<0.05);试验结束时,该两种抗原免疫组雄鼠睾丸重量及体积均降低,精子发生完全被终止,垂体GnRHR、LHβ、FSHβ及睾丸LHR、FSHR、INHα、INβA及INHβB mRNA表达显著下调(P<0.05)。3)G6KTD免疫组12只雄鼠中,9只(75%)在加免后血清LH、FSH、T及INHB浓度显著降低(P<0.05),试验结束时睾丸重量及体积均显著降低(P<0.05),精子发生受到明显抑制(P<0.05)。综上表明:新蛋白构型G6KT-OVA和G6KTD-OVA具有极强的免疫原性,初次免疫就能达到抑制生殖激素分泌的目的,在作为单剂量GnRH疫苗方面具良好的开发前景;同时G6KTD也具有较强的免疫原性,可不与载体蛋白偶联单独作为GnRH去势抗原,继而避开GnRH分子与载体蛋白偶联所面临的GnRH抗原损失严重及与载体蛋白偶联的后续纯化等问题。本研究结果为研发高效GnRH去势疫苗及其大规模应用提供了理论参考。     

公猪免疫去势法初报

12头断奶二花脸公猪等分成二组。一组分猪用2mg GnRH-BSA完全福氏佐剂作初始免疫,接着每隔2周用等量GnRH-BSA不完全福氏佐剂进行二次加强免疫;另一组单用BSA作对照、所有供试猪在免疫后20周屠宰,测定血浆睾酮水平、GnRH抗体滴度、睾丸重量及组织学变化、经GnRH免疫的公猪,免疫3周后GnRH抗体滴度开始上升,到第5周高达1:3000,血浆睾酮水平和睾丸重量比对照公猪明显下降,结果表明,GnRH主动免疫公猪能达到去势之目的。     

不同佐剂GnRH疫苗主动免疫对公猪睾丸发育和血清睾酮的影响

为探讨铝胶佐剂与白油Span佐剂的GnRH疫苗对公猪睾丸发育和血清睾酮的影响,12头初生公猪随机分为GnRH疫苗铝胶佐剂免疫组和GnRH疫苗白油Span佐剂免疫组(下简称铝胶组和白油组).9周龄初免,17周龄加强免疫,25周龄屠宰.游标卡尺测量猪阴囊直径和睾丸大小,石蜡切片观察睾丸组织发育,ELISA法和放射免疫分析(RIA)法分别检测GnRH抗体水平和血清睾酮水平.结果表明,铝胶组与白油组GnRH抗体效价差异不显著(P0.05).铝胶组血清睾酮水平于17,21周龄(P＜0.05)和25周龄(P＜0.01)显著地低于白油组,阴囊直径,睾丸直径、横径、周长及睾丸血量均显著地低于白油组(P＜0.05).铝胶组与白油组猪睾丸曲精小管均出现不同程度的空泡化,白油组零星分布少量精子,铝胶组无精子产生.这表明在公猪免疫去势的效果上,辅以铝胶佐剂的GnRH疫苗比辅以白油Span佐剂的GnRH疫苗好.     

猪睾丸中脂联素受体与LHR、CYP11A1、StAR基因表达的发育变化及其相关性研究

旨在了解皖南花猪睾丸组织脂联素受体mRNA与睾酮合成相关因子mRNA表达的发育性变化及其相关性,探讨脂联素与睾酮生成的关系.本研究用荧光实时定量PCR法检测0、30、45、90和180 d等不同日龄(各日龄样本数5头)皖南花猪睾丸组织脂联素受体(AdpR1、AdpR2)和LHR、CYP11A1、StAR mRNA的表达水平.结果,AdpR1、CYP11 A1和StAR mRNA的表达有极显著的发育性变化(P＜0.01),AdpR1 mRNA的表达先增加后降低,45 d达到最大值;CYP11A1和StAR mRNA的表达先升高后降低再升高,45 d达到最大表达量.LHR mRNA的表达也有显著的发育性变化(P＜0.05),整体表现为先升高后降低.AdpR1与CYP11A1 mRNA的表达量显著相关(r=0.587,P＜0.05);LHR与CYP11A1、StAR mRNA的表达量分别显著相关(r=0.528,P＜0.05;r=0.552,P＜0.05);CYP11 A1与StAR mRNA表达量极显著相关(r=0.709,P＜0.01).AdpR1mRNA在睾丸组织的高表达提示脂联素可能通过AdpR1介导对睾丸的调节作用,其发育性变化和CYP11A1 mRNA呈正相关,提示脂联素对睾酮的生成有一定的促进作用.     

促性腺激素释放激素类似肽主动免疫对公猪生殖机能的影响

10头公猪在3月龄时用促性腺激素并列体二聚体(GnRHTD)主动免疫,观测内源GnRH被免疫中和所产生的内分泌和生殖机能的变化。注射GnRHTD与卵清蛋白(OVA)的偶联物2次,结果发现GnRHTD主动免疫能降低外周血清睾酮浓度,睾丸重量也明显下降。组织切片显示,曲细精管有少数退化的精原细胞。这些变化表明:公猪接种GnRHTDOVA能诱发免疫反应,中和内源GnRH的生物活性,且抑制睾酮的合成,从而导致性器官发育受阻。     

GnRH一次性主动免疫对公猪血清睾酮含量的影响

采用以促性腺激素释放激素(GnRH)并列体(GnRH-tandem)为基本结构的免疫去势苗对公猪进行一次性主动免疫。结果表明免疫组的公猪睾酮浓度极显著地低于完整组;睾丸长度极显著地小于完整组;屠宰体重明显高于完整组。因此,GnRH一次性免疫有望取代传统的外科阉割,在实际养猪生产中得到推广和应用。     

高脂诱导非酒精性脂肪肝对CYP2A5表达的影响

为了研究高脂诱导脂肪肝对CYP2A5表达的影响,选取雄性C57BL/6J小鼠18只,随机分成对照组(control)、高脂组(NAFLD)和阳性对照组(PYR),每组6只,分别饲喂基础饲料和高脂饲料,阳性对照组饲喂基础饲料在处死前一天给予吡唑诱导,连续8周后小鼠断颈处死,取肝脏测定mRNA,CYP2A5的蛋白表达和酶活性。其结果阳性对照组CYP2A5的mRNA、蛋白表达和酶活性与对照组相比分别增加229%、80%、151%差异极显著(P0.01)。高脂诱导组与对照组相比CYP2A5的mRNA、蛋白表达和酶活性分别增加69%、34%、43%(P0.01)。表明高脂诱导非酒精性脂肪肝可增加CYP2A5的mRNA、蛋白表达水平和酶活力。     

皮质酮处理对产蛋鸡肝脏胆固醇代谢的影响

为研究慢性应激对产蛋鸡肝脏胆固醇代谢的影响,试验选用48只158日龄如皋黄鸡,随机分成2个处理组,每组8个重复,每个重复3只鸡。对照组注射等体积的生理盐水(含15%酒精),试验组注射4 mg/kg的皮质酮,连续注射7 d建立慢性应激模型。试验结束后对其血浆和肝脏中胆固醇含量以及肝脏中胆固醇代谢相关基因的mRNA和蛋白表达进行分析。结果显示:皮质酮处理显著促进了产蛋鸡肝脏重以及肝脏和血浆中总胆固醇含量(P<0.01),显著促进了产蛋鸡肝脏中胆固醇合成基因SREBP2和HMGCR的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),胆固醇降解基因CYP7A1的蛋白表达、CYP27A1和转运基因LDLR的mRNA和蛋白表达水平在皮质酮处理后亦显著上调(P<0.05)。研究表明,皮质酮通过上调肝脏中胆固醇合成基因SREBP2和HMGCR以及转运基因LDLR的mRNA和蛋白表达,进而造成产蛋鸡肝脏中胆固醇累积。     

中草药添加剂对公猪精液品质、血清激素及基因表达量的影响

为了考察中草药添加剂对公猪精液品质、血清激素及基因表达的影响,试验将24头日龄、体况相近的大约克种公猪随机分为3组,对照组饲喂基础日粮,试验1组饲喂基础日粮+2%中草药添加剂,试验2组饲喂基础日粮+3%中草药添加剂,测定公猪精液量、精子畸形率、精液密度、精子活力、促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH)和睾酮(T)含量以及公猪雄性相关基因(GAPDH、CREB、CYP19)表达量等相关数据。结果表明:与对照组相比,试验1,2组精液量有所提高;试验1,2组精子畸形率均低于对照组,其中试验2组显著降低(P0.05);试验1,2组精子密度、精子活力高于对照组,其中试验2组显著高于对照组(P0.05)。与对照组相比,试验1,2组FSH及试验2组LH、T含量显著增加(P0.05);试验2组CREB基因表达量比对照组上调了2.66倍(P0.05),CYP19基因表达量上调了4.63倍(P0.01)。说明饲粮中添加中草药添加剂可以通过调节激素水平改善精液品质,从而提高种公猪精子活力、密度,降低畸形率;3%中草药添加剂效果更佳。     

GnRH类似肽主动免疫对公猪生产性能的影响

将30头公猪分成3组,给免疫组的 10头公猪注射促性腺激素释放激素并列体二 聚体 卵清蛋白复合物,初次免疫时间是3月 龄,5月龄加强免疫1次。同时阉割10头公 猪作为阴性对照组,其余的10头注射卵清蛋 白作阳性对照组。试验期间,统计每头公猪 的平均饲料消耗量和日增重。7月龄时屠宰, 测其活重、屠宰率、料肉比指标。结果表明, 免疫组公猪平均日增重、最终活重(P< 0.05)、屠宰率、料肉比均高于阴性对照组,略 低于阳性对照组。提示GnRH并列体二聚体主动免疫能提高公猪的生产性能。     

GnRH-A免疫对兔去势效果的实验研究

探讨促性腺激素释放激素类似物(GnRH-A)对动物免疫去势的效果和作用机理.用自制的GnRH-A抗原乳剂在30只兔(EG-Ⅰ与EG-Ⅱ组)的颈背部皮下分2～3点注射1.0 mL(100 μg·mL-1)GnRH-A抗原,EG-Ⅱ组3周后加强免疫1次.测定睾丸长度和质量,体质量变化,GnRH抗体效价与血清睾酮浓度.制备的抗原无菌性、安全性和物理性状良好,EG-Ⅱ组睾丸长度与EG-Ⅰ组差异极显著(P<0.01);EG-Ⅱ组的抗体水平也明显高于EG-Ⅰ组;免疫注射后2个试验组与对照组的血清睾酮浓度差异逐渐增加,102 d时EG-Ⅱ组血清睾酮浓度极显著低于对照组(P<0.01),且第28天后EG-Ⅱ组显著低于EG-Ⅰ组(P<0.05);EG-Ⅱ组雄兔的体质量和平均日增质量均最大,显著高于EG-Ⅰ组和对照组(P<0.05).GnRH-A免疫家兔对睾丸发育、血清GnRH抗体效价和睾酮浓度具有显著的影响,加强免疫效果更理想.     

纳豆芽孢杆菌对猪肉品质及粪臭素的影响

为提高猪肉品质,研究纳豆芽孢杆菌单一菌及与乳酸菌的混合菌对肉质及粪臭素的影响。将60头公(去势)母各半的TOPIGS(托佩克)仔猪,随机均分为对照组和添加0.1%纳豆芽孢杆菌的试验组(Bn组)及添加0.1%纳豆芽孢杆菌+0.1%乳酸菌混合菌的试验组(BL组),100 kg体质量时屠宰。与对照组相比,Bn和BL组猪背膘厚度、眼肌面积、肉色、失水率和肌内脂肪含量无显著差异(P0.05),猪肉p H24升高及脂肪中粪臭素含量降低,血清中总胆固醇降低及高密度脂蛋白上升,肝中P450、CYP2A6及CYP2E1升高,粪中大肠杆菌、梭菌及粪臭素含量下降(P0.05)。Bn与BL组间总胆固醇和高密度脂蛋白差异显著(P0.05)。建议日粮中添加混合菌。     

表皮生长因子对脂多糖刺激断奶仔猪肠道钠磷转运载体蛋白Ⅱb表达的影响

本试验旨在研究表皮生长因子(EGF)对脂多糖(LPS)刺激的应激状态下仔猪肠道钠磷转运载体蛋白Ⅱb(NaPi-Ⅱb)表达的影响。本试验由2部分组成,1)细胞试验:以猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)为模型,试验设4个组,对照组(0 ng/mL EGF,0μg/mL LPS)、EGF组(100 ng/mL EGF,0μg/mL LPS)、LPS组(0 ng/mL EGF,1.0μg/mL LPS)、EGF+LPS组(100 ng/mL EGF,1.0μg/mL LPS),每组3个重复; 2)动物试验:选取24头体重接近、健康状况良好的21日龄"长白×大白"二元杂交断奶阉公猪[平均体重(5.76±0.38) kg],随机分为4个组,对照组(基础饲粮)、EGF组(基础饲粮+2 mg/kg EGF)、LPS组(基础饲粮+腹腔注射100μg/kg BW LPS)、EGF+LPS组(基础饲粮+2 mg/kg EGF+腹腔注射100μg/kg BW LPS),每组6个重复,每个重复1头猪。结果表明:1)细胞试验中,与对照组相比,EGF组IPEC-J2细胞NaPi-Ⅱb mRNA及蛋白表达显著下降(P0.05),而EGF+LPS组细胞NaPi-Ⅱb mRNA及蛋白表达显著增加(P0.05),EGF与LPS免疫应激的互作效应对NaPi-Ⅱb mRNA及蛋白表达影响显著(P0.05)。2)动物试验中,各组间血清钙(Ca)含量无显著差异(P0.05),LPS组血清磷(P)含量显著高于对照组、EGF组、EGF+LPS组(P0.05),EGF组血清碱性磷酸酶(ALP)活性显著高于LPS组(P 0.05),EGF与LPS免疫应激互作效应对血清P含量影响显著(P 0.05),对血清Ca含量和ALP活性影响不显著(P 0.05)。与对照组相比,EGF组空肠与回肠NaPi-Ⅱb mRNA表达显著下降(P 0.05),而EGF+LPS组空肠与回肠NaPi-Ⅱb mRNA表达显著增加(P0.05),EGF与LPS免疫应激互作效应对空肠与回肠NaPi-Ⅱb mRNA表达影响显著(P0.05)。细胞与动物试验结果表明,EGF对NaPi-Ⅱb的表达起抑制作用,但在免疫应激状态下可促进NaPi-Ⅱb的表达,表明EGF可促进应激状态下肠道P的主动转运。