不同产羔数小尾寒羊FOXL2和FIGLA基因的表达研究

为了探索FOXL2和FIGLA基因与绵羊产羔数之间的关系,利用荧光定量PCR检测了二者在多羔小尾寒羊和单羔小尾寒羊8个重要繁殖相关组织中的表达水平。结果表明:FOXL2和FIGLA基因均在卵巢组织中高表达,其次在下丘脑、垂体、输卵管、子宫体以及子宫角中呈中等丰度表达,在大脑和小脑组织中表达量相对较低。其中,FOXL2基因在多羔小尾寒羊小脑和子宫体中的表达量显著高于单羔组(P0.05),但在多羔小尾寒羊垂体和卵巢中的表达量显著低于单羔组(P0.05),在多羔小尾寒羊下丘脑中的表达量极显著低于单羔组(P0.01);FIGLA基因在多羔小尾寒羊大脑中的表达量显著高于单羔组(P0.05),在其它各组织间表达差异均不显著(P0.05)。研究初步表明,FOXL2基因表达可能对绵羊产羔数有一定影响,FIGLA基因表达对绵羊产羔数没有影响。     

GnRH主动免疫对雄性大鼠垂体-睾丸轴功能的影响

本研究用GnRH并列体二聚物(GnRH-TDK)主动免疫SD雄性大鼠观察其对大鼠垂体-睾丸轴功能的影响,以探讨GnRH主动免疫去势的分子机理.24只性成熟SD雄鼠随机分为免疫组和对照组,免疫组雄鼠于12周龄时初免,8周后加免,对照组雄鼠不做任何注射.每两周采集血液放免法检测血清抗体滴度及激素含量变化.加免后4周脱颈处死所有雄鼠,收集垂体、睾丸实时荧光定量PCR分析相关生殖基因mRNA的变化.结果显示,GnRH主动免疫后12只免疫雄鼠中11只血清GnRH抗体滴度显著上升,血清LH、FSH及睾酮(T)均极显著下降到检测限附近或以下(p＜0.01),同时睾丸严重萎缩,其重量及体积下降到对照组睾丸的20％(p＜0.01),组织切片显示,曲细精管上皮组织严重受损,管内仅有少数退化的精原细胞.与对照组相比,GnRH主动免疫极显著下调雄鼠垂体GnRH受体、LH-β、FSH-β和睾丸LH受体及FSH受体mRNA表达水平(p＜0.01).由此可见,GnRH主动免疫可通过下调垂体GnRH受体、促性腺激素亚基及睾丸LH、FSH受体基因表达,影响垂体-睾丸轴的功能.     

SD雄鼠3种不同新蛋白构型GnRH去势抗原免疫学及生物学效果对比研究

旨在对比研究SD雄鼠3种不同新蛋白构型GnRH抗原的免疫学及生物学效果。本研究新蛋白构型GnRH抗原设计采用增加GnRH拷贝数和增大抗原分子量方法。以化学合成法合成G6K-GnRH并列体(G6K-GnRH-tandem,G6KT)作为新蛋白GnRH抗原制备的基本单元。将G6KT二聚化,形成抗原Ⅰ(G6KTD),将G6KT和G6KTD分别与卵清蛋白(OVA)偶联,分别形成抗原П(G6KT-OVA)及抗原Ⅲ(G6KTD-OVA)。试验分5组:完整对照组(不做任何处理,intact control)、外科阉割去势组(surgical castrates)及3种新蛋白构型GnRH免疫组(G6KTD、G6KT-OVA及G6KTD-OVA免疫组)。将(G6KTD、G6KT-OVA、G6KTD-OVA)3种不同新蛋白构型GnRH抗原配于Specol佐剂,分别免疫SD雄鼠,6周龄时初免,腿部肌肉注射1 mL乳化抗原(含相应新构型GnRH蛋白100μg),8周后加免,注射剂量与方法同初次免疫,每试验组12只雄鼠。放免法及酶联免疫法测定血清抗体及生殖激素浓度变化,qPCR检测垂体-睾丸生殖相关基因mRNA表达变化。结果显示:1)SD雄鼠主动免疫3种不同新蛋白构型GnRH抗原后均能产生良好的抗体反应。2)G6KT-OVA及G6KTD-OVA免疫组仅初免就能诱发较高水平的抗体产生,并显著降低雄鼠血清LH、FSH、睾酮(T)及抑制素B (INHB)浓度(P<0.05);试验结束时,该两种抗原免疫组雄鼠睾丸重量及体积均降低,精子发生完全被终止,垂体GnRHR、LHβ、FSHβ及睾丸LHR、FSHR、INHα、INβA及INHβB mRNA表达显著下调(P<0.05)。3)G6KTD免疫组12只雄鼠中,9只(75%)在加免后血清LH、FSH、T及INHB浓度显著降低(P<0.05),试验结束时睾丸重量及体积均显著降低(P<0.05),精子发生受到明显抑制(P<0.05)。综上表明:新蛋白构型G6KT-OVA和G6KTD-OVA具有极强的免疫原性,初次免疫就能达到抑制生殖激素分泌的目的,在作为单剂量GnRH疫苗方面具良好的开发前景;同时G6KTD也具有较强的免疫原性,可不与载体蛋白偶联单独作为GnRH去势抗原,继而避开GnRH分子与载体蛋白偶联所面临的GnRH抗原损失严重及与载体蛋白偶联的后续纯化等问题。本研究结果为研发高效GnRH去势疫苗及其大规模应用提供了理论参考。     

GnRH主动免疫对雌鼠下丘脑-垂体-卵巢轴调控的影响

本研究采用GnRH并列体二聚物(GnRH-Tandem-Dimer,GTD)为免疫原主动免疫SD雌鼠,检测下丘脑-垂体-卵巢轴生殖相关基因表达变化,分析主动免疫GTD对SD雌鼠生殖功能的影响。选取48只性成熟SD雌鼠随机分为GTD免疫去势组和空白组。免疫组雌鼠于12周龄时初免GTD免疫去势疫苗,4周后加免。每两周采集血液检测血清激素含量变化。分别于加免后4、8、12周处死大鼠,每组处死8只,收集血液;并采集下丘脑、垂体、卵巢,分析生殖相关基因mRNA表达变化。结果显示,GTD主动免疫后大鼠卵巢严重萎缩,重量下降到对照组的23.12%(p0.05);血清FSH、LH、P4及E2含量均显著下降(p0.05);除下丘脑GnRH mRNA先上升后下降外,下丘脑ER、垂体GnRH-R、LH-β、FSH-β和卵巢LH-R、FSH-R和ER mRNA表达水平显著下调(p0.05)。结果表明,GTD主动免疫可通过对生殖内分泌激素分泌的调节和对生殖相关基因mRNA表达水平的调控,影响下丘脑-垂体-卵巢轴的功能。     

microRNA对动物生殖轴以及胚胎着床影响的研究进展

表观调控作为调节基因功能的一种重要手段,其对生殖内分泌方面的调控起着重要作用。microRNA(miRNA)作为一类小的非编码RNA,也是一种表观遗传因子,它广泛参与生物体内各种生理及病理过程,对哺乳动物繁殖起着重要的调控作用。本文围绕miRNA在哺乳动物繁殖相关组织的表达及调控作用和miRNA对胚胎着床的影响进行综述,为理解miRNA对繁殖方面的表观调控、改善哺乳动物繁殖能力提供理论基础。     

DNA甲基化调控动物季节性行为和繁殖的研究进展

动物的生物学行为会随生存环境、季节变换发生一些显著的改变,这些行为变化在动物生存、生长发育、繁殖甚至疾病中扮演着重要角色。近年来研究指出,DNA甲基化参与了动物季节性行为及繁殖性能的调控。本文概述了DNA甲基化常见的发生区域,动物季节性行为变化及动物繁殖性能(初情期、季节性发情、性腺发育等)受DNA甲基化调控的研究进展,为从表观遗传角度分析动物季节性行为变化和动物繁殖的分子机制提供理论参考和研究思路。     

绵羊PER3基因组织表达及多态性与季节性繁殖的相关性研究

为了探究PER3基因的组织表达水平及其多态性与绵羊季节性繁殖的关系,为绵羊育种提供理论基础,该试验通过实时荧光定量PCR(qPCR)研究PER3基因在季节性发情的苏尼特羊和常年发情的小尾寒羊松果体、下丘脑、垂体、卵巢、输卵管以及子宫组织中的表达情况,同时利用SequenomMassARRAY~(○R)SNP技术对季节性发情绵羊品种(草原型藏羊、苏尼特羊、滩羊共204只)和常年发情绵羊品种(小尾寒羊、湖羊、策勒黑羊共564只)PER3基因的13个SNPs进行分型检测,并与小尾寒羊产羔数进行关联分析。结果表明:PER3基因在绵羊的松果体、下丘脑、垂体、卵巢、输卵管以及子宫组织中均有表达,且其在季节性繁殖的苏尼特羊的表达均高于常年发情的小尾寒羊(卵巢组织除外),在松果体和子宫组织中达到显著差异水平(P0.05);分型结果表明,在该实验室前期通过重测序得到的PER3基因13个SNPs中,g.43657503AG、g.43670012TC、g.43670807AG、g.43677259TC和g.43707227GA 5个SNPs在季节性发情和常年发情绵羊品种之间的基因型频率、等位基因频率均达到显著差异水平(P0.05);关联分析结果表明,PER3基因的13个SNPs与小尾寒羊产羔数并无显著关联(P0.05)。该研究表明,PER3基因在松果体、下丘脑和垂体等繁殖相关组织的表达,在苏尼特羊中均高于小尾寒羊,暗示着较高水平的PER3的表达可能与绵羊的季节性发情调控有关。     

GnRH主动免疫对SD雄鼠下丘脑GnRH合成及性腺反馈系统的影响

探讨GnRH主动免疫对SD雄鼠下丘脑GnRH合成及性腺反馈系统的影响。36只SD雄鼠随机分为免疫组、手术去势组及对照组,免疫组于12周龄时初免,8周后加免。放免法测定血清抗体滴度、激素浓度及下丘脑正中隆起GnRH含量,实时荧光定量PCR分析下丘脑生殖相关基因mRNA的变化。结果显示,GnRH主动免疫后12只免疫鼠中11只血清GnRH抗体滴度显著升高,血清LH、FSH及T浓度显著降低(P<0.05),睾丸严重萎缩(免疫去势鼠)。与对照鼠相比,免疫去势显著降低下丘脑GnRH含量(P<0.01),且显著下调下丘脑雌激素α受体(ERα)、雄激素受体(AR)、Kiss-1、GPR54及GnRH的mRNA表达水平(P<0.05)。手术去势鼠除血清LH、FSH浓度及下丘脑ERα的mRAN表达水平显著高于对照鼠外(P<0.05),其余指标均与免疫去势鼠类似。结果首次表明,GnRH主动免疫抑制性腺负反馈调节作用及降低了下丘脑GnRH的合成。     

GnRH主动免疫对雄性藏绵羊血液中甲状腺激素含量的影响

为探讨GnRH并列体二聚物(GnRH-TDK)对雄性藏绵羊甲状腺功能的影响,采用GnRH-TDK主动免疫雄性藏绵羊,并将雄性藏绵羊随机分为免疫去势、手术去势及对照3个组,其中免疫去势组于25周龄时初免,8周后加免;手术去势组在试验开始前1周进行外科手术去势;对照组不做任何处理。以初免当天为0周,每4周采集血样1次,加免后8周屠宰所有试验羊并分离两侧睾丸,应用酶联免疫法(ELISA)测定血清抗体滴度及LH、FSH、T、TSH、T3和T4含量变化。结果表明,免疫去势组绵羊产生了良好的抗体反应,初免及加免后体内抗GnRH抗体滴度均快速升高,且血清T含量显著下降(P0.05),至屠宰时仍维持在较低水平(4.27 ng·m L~(-1)),同时睾丸严重萎缩。与对照组相比,免疫去势组血清TSH、T3及T4未显著下降。由此可见,GnRH主动免疫对血清中TSH、T3及T4浓度无明显影响,即GnRH主动免疫对雄性藏绵羊甲状腺功能无影响。本研究结果为GnRH主动免疫去势的分子机制以及对机体的影响奠定了理论基础。     

GnRH主动去势免疫对公猪肝脏脂肪代谢的影响

为研究促性腺激素释放激素(GnRH)主动免疫对公猪肝脏脂肪代谢关键基因转录水平和酶含量的影响,选用36头公猪随机分为对照组、免疫组和手术组(n=12),测定血清睾酮、甘油三酯、血糖及肝脏组织中脂肪代谢关键酶含量,实时荧光定量PCR分析肝脏组织关键基因mRNA表达变化。结果显示:GnRH主动免疫后公猪血清甘油三酯含量呈上升趋势,血清睾酮含量显著下降(P0.05)。与对照组公猪相比,免疫去势显著提高肝脏脂肪酸合成酶(FAS)及乙酰辅酶A羧化酶(ACC)含量(P0.05),且显著提高肝脏FAS、ACC、微粒体甘油三脂转运蛋白(MTTP)基因mRNA表达水平(P0.05),显著下调激素敏感酯酶(HSL)与过氧化物酶体增殖物激活型受体γ(PPARγ)基因mRNA表达水平(P0.05)。但免疫公猪血清甘油三酯含量及肝脏FAS、ACC、固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)mRNA表达仍显著低于手术去势公猪相应指标(P0.05)。上述结果表明,GnRH主动免疫提高了公猪肝脏脂肪合能力,但其脂肪合成能力仍低于传统手术去势公猪。