壳聚糖/pcDNA-DPV-gC基因在雏鸭体内的抗原表达和分布

 【目的】以DPV gC基因疫苗（pcDNA-DPV-gC）为模型,采用复凝法制备壳聚糖/pcDNA-DPV-gC纳米微球,对其在雏鸭体内的抗原表达和分布进行初步研究。【方法】将壳聚糖/pcDNA-DPV-gC基因疫苗以肌注、滴鼻和口服3种途径免疫20日龄雏鸭,于免疫后不同时间点（4h、12h、1d、3d、5d、7d、2 w、4 w、6 w和10 w）分别随机宰杀2只雏鸭,采集肝、脾、肺、肾、胰、脑、胸腺、哈氏腺、法氏囊、食道、十二指肠、盲肠和直肠,应用间接免疫组化检测DPV gC基因在雏鸭体内的抗原表达和分布。【结果】①肌注组免疫雏鸭1 d,肝脏、法氏囊、十二指肠、盲肠和直肠检测到DPV gC蛋白;滴鼻组免疫雏鸭12 h,肺脏出现阳性信号,1 d哈氏腺和法氏囊检测到DPV gC蛋白;口服组免疫雏鸭12 h,食道出现中等强度的阳性信号,1 d法氏囊、十二指肠、盲肠和直肠检测到DPV gC蛋白;②在3种免疫途径中,肝脏、肺脏、法氏囊、哈氏腺、食道、十二指肠、盲肠和直肠是DPV gC抗原表达的主要器官;阳性信号主要在肝细胞、肺上皮细胞、法氏囊和哈氏腺淋巴细胞、食道上皮细胞和肠道粘膜上皮细胞及固有层细胞等部位;③不同免疫途径免疫的壳聚糖/pcDNA-DPV-gC基因疫苗在雏鸭体内的抗原表达量和持续时间的总体表达规律为：肌注组＞滴鼻组＞口服组。【结论】壳聚糖能促进DPV gC基因在雏鸭体内的表达和分布,肌肉注射是壳聚糖/pcDNA-DPV-gC基因疫苗首选的免疫方式。     

湖羊促性腺激素释放激素受体基因(GnRHR)在消化系统中的表达谱分析

建立湖羊促性腺激素释放激素受体(gonadotropin releasing hormone receptor,GnRHR)基因的实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测方法,并采用该方法对湖羊消化系统中胃肠各组织的GnRHR mRNA表达水平进行检测。结果表明:GnRHR mRNA在瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠和直肠部位均有表达,其中瘤胃GnRHR mRNA表达量最高,极显著高于其他各组织(P<0.01);网胃GnRHR mRNA表达量极显著高于十二指肠(P<0.01),显著高于瓣胃、盲肠和直肠(P<0.05);皱胃GnRHR mRNA表达量极显著高于瓣胃、空肠、回肠和盲肠(P<0.01),显著高于结肠和直肠(P<0.05);结肠GnRHR mRNA表达量显著高于十二指肠和直肠(P<0.05)。研究证实了GnRHR mRNA在湖羊消化系统中有表达,这为GnRH功能的多样性研究提供了新的依据。     

猪胃肠道组织中趋化因子CCL28的表达研究

应用RT—PCR方法，分别检测了CCL28在15d和30d龄仔猪胃肠道组织中的表达。结果表明，CCL28在15d龄猪的十二指肠、回肠、盲肠、结肠、直肠和30d龄仔猪的十二指肠上段、下段、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠、胃组织中有表达；在15d龄仔猪的十二指肠上段、空肠、胃组织中无表达，在回肠、结肠组织中表达弱；在30d龄仔猪的十二指肠、空肠、盲肠、胃组织中表达弱。CCL28的时空表达提示其与仔猪胃肠道黏膜组织的发育及在不同部位的作用有关。     

CCL28受体在仔猪胃肠道组织中的表达研究

应用RT-PCR的方法，分别检测了CCR10（CCL28受体）在15d和30d仔猪胃肠道组织中的表达。结果表明，CCR10在15d仔猪的十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、胃和30d仔猪的十二指肠下段、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠、胃组织有表达；15d仔猪的十二指肠下段、直肠组织中无表达，空肠、盲肠、胃组织表达较少；30d仔猪的十二指肠上段组织无表达，十二指肠下段、直肠和胃组织表达弱。     

鸭瘟弱毒疫苗诱导IgA、IgM和IgG产生规律的研究

【目的】探讨鸭瘟弱毒苗诱导鸭局部黏膜和系统免疫中抗体发生的规律。【方法】将DPV弱毒苗Cha株经皮下、口服和滴鼻途径免疫20日龄樱桃谷鸭后60 d内定时随机剖杀5只鸭,采集血清、气管和消化道（食道、十二指肠、空肠和直肠）分泌液,应用间接ELISA检测抗DPV的IgA、IgM和IgG抗体滴度（以lg表示）。【结果】所有免疫鸭检测样品中均可检测到DPV特异性IgG、IgM和IgA抗体。血清中抗体滴度由高到低均为IgG、IgM和IgA,其中IgM检出时间最早,IgG存留时间最长。皮下免疫DPV弱毒苗可更早诱导鸭血清中生成特异性IgG,且抗体滴度最高;气管和消化道分泌液中抗体滴度由高到低均为IgA、IgM和IgG,其中IgA和IgM检出时间最早,IgA存留时间最长。口服和滴鼻途径免疫鸭消化道和气管分泌液中IgA滴度较皮下免疫鸭高。【结论】不同途径免疫鸭瘟弱毒疫苗均可迅速诱导免疫鸭体液免疫介导的黏膜免疫和系统免疫。以DPV特异性IgA为主要抗体的黏膜免疫在预防DPV强毒早期对鸭消化道和呼吸道等局部黏膜的感染中具有十分重要的作用,使DPV弱毒疫苗快速产生免疫保护的机制从黏膜免疫的角度得到一定程度解释。     

亚硒酸二葡萄糖酯对产蛋后期蛋鸭肠道形态和微生物的影响

选用240只50周龄健康的临武鸭蛋鸭,随机分成5组：对照组(第1组)在基础饲粮中添加0.2 mg/kg(以硒计)的亚硒酸钠,第2、3、4、5组分别在基础饲粮中添加0.1、0.2、0.3、0.4mg/kg(以硒计)的亚硒酸二葡萄糖酯。每组6个重复,每重复8只鸭。预试期7d,正试期63d。试验结束后测定供试鸭的十二指肠、空肠和回肠形态指标及回肠和盲肠的微生物多样性。结果表明：与对照组相比,饲粮添加亚硒酸二葡萄糖酯对产蛋后期蛋鸭的十二指肠、空肠和回肠绒毛高度、隐窝深度、肠壁厚度、绒毛高度与隐窝深度的比值均无显著影响;添加亚硒酸二葡萄糖酯组降低了回肠中变形菌门和埃希氏菌属–志贺氏杆菌属及盲肠中变形菌门和厌氧螺菌属的相对丰度,提高了回肠中肠杆菌属及盲肠中拟杆菌门和普雷沃氏菌属、肠杆菌属、理研菌科RC9菌属的相对丰度;第2组回肠中属、种水平的OTU数显著高于对照组的,肠道菌群α多样性最高,回肠中厚壁菌门相对丰度最高且埃希氏菌属–志贺氏杆菌属相对丰度最低,盲肠中拟杆菌门相对丰度最高。综上可知,饲粮添加亚硒酸二葡萄糖酯降低了回肠中有害微生物的相对丰度,有利于肠道健康,饲粮中亚硒酸二葡萄糖酯的适宜添加量...     

黄淮白山羊肠道黏膜组织结构及杯状细胞分布特点

为探明黄淮白山羊肠道黏膜组织结构和杯状细胞分布特点,取成年健康黄淮白山羊3头,经麻醉后颈静脉放血致死,立即取小肠和大肠各3段,投入到4%多聚甲醛固定液中固定72 h,制作组织切片,经HE和PAS染色后,观察黄淮白山羊小肠和大肠黏膜组织结构和杯状细胞分布特点。结果表明,黄淮白山羊十二指肠和空肠的上皮细胞呈高柱状,固有层分布有较多的淋巴细胞,回肠黏膜的上皮细胞呈低柱状,黏膜下层中含大量的集合淋巴小结,盲肠、结肠和直肠的上皮细胞呈低柱状,大肠腺发达,腺体间弥散着淋巴细胞,直肠的固有层中可见淋巴小结,上皮之间的杯状细胞呈顶浆分泌的形式分泌黏多糖。黄淮白山羊小肠杯状细胞分泌的黏多糖以中性为主,大肠杯状细胞分泌的黏多糖以酸性为主。大肠三段杯状细胞数量极显著(P<0.01)高于小肠杯状细胞,大肠中结肠杯状细胞数量显著(P<0.05)高于盲肠和直肠,小肠中回肠杯状细胞数量显著(P<0.05)高于十二指肠和空肠。因此,黄淮白山羊从十二指肠到回肠,上皮细胞由高柱状逐渐向低柱状变化,杯状细胞主要分布于大肠,在结肠中数量最多。     

布氏、巨型和堆型艾美耳球虫在鸡体内发育特性的研究

利用肠粘膜压片镜检的方法,对 E.brunetti,E.maxima 和 E.acervulina 在鸡体内的发育部位和各期虫体的形态学特性进行了研究,经三次重复试验检查结果表明,E.brunetti 第一代、第二代裂殖生殖主要在空肠和回肠进行;第三代裂殖生殖,配子生殖和卵囊形成主要在空肠、回肠、直肠和盲肠近端进行;第三代裂殖生殖,配子生殖和卵囊形成主要在空肠、回肠、直肠和盲肠近端进行.朋代裂殖体出现时间分别为接种后24～48h;56～80h 和88～96h;小配子体与大配子体均于104～112h 出现,未完全成熟的卵囊和极少数成熟卵囊见于112～120h。     

鸭瘟病毒对SPF鸭的致病性研究

【目的】探讨鸭瘟病毒（Duck plague virus,DPV）对SPF鸭的致病性。【方法】将DPV分别通过点眼滴鼻和皮下注射接种途径人工感染SPF鸭,以未攻毒健康SPF鸭为对照,观察各组鸭的发病情况及症状,于感染后不同时间随机剖杀试验组和对照组SPF鸭,采集肝脏、脾脏、肾脏、肺、心脏、气管、食道、肠道、胸腺、法氏囊、脑和泄殖腔等组织,常规方法制备石蜡切片,HE染色,观察各器官病理组织学变化,同时利用间接免疫荧光染色法（IFA）对DPV抗原在鸭体内的分布进行检测,并进行血常规和血液生化指标检测,分析了DPV对SPF鸭淋巴细胞转化率的影响。【结果】DPV接种后,引起鸭高热、下痢,组织器官出血、坏死,食道、泄殖腔黏膜出血、溃疡并有灰黄色假膜覆盖;病理组织学变化以血管壁损伤为主,肝、脾细胞变性、坏死,消化道黏膜上皮细胞坏死脱落。DPV感染后,在鸭的脾脏、胸腺、法氏囊、肝脏、食道、泄殖腔、肠道、肾脏、肺及气管中均检测到DPV抗原,且以肝脏、脾脏等组织中荧光最强;在脑和心脏中均未检测到DPV抗原。DPV感染组鸭血清中白细胞总数（WBC）、红细胞总数（RBC）、血小板总数（PLT）和总蛋白（TP）、血红蛋白（HGB）含量及丙氨酸氨基转移酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性、淋巴细胞转化率与对照组差异大多达显著或极显著水平。【结论】DPV感染主要引起SPF鸭各组织器官广泛性出血;脾脏、胸腺、法氏囊等免疫器官首先受到攻击和损害,并造成免疫抑制;皮下注射接种DPV比点眼滴鼻接种对SPF鸭的致病性强。     

不同月龄羊驼小肠肥大细胞的数量变化研究

为了揭示不同月龄羊驼的小肠肥大细胞的数量变化及分布规律,本实验分别选择3月龄、12月龄的各3头羊驼的十二指肠、空肠、回肠,利用甲苯胺蓝染色方法进行研究,通过统计学软件分析得出结果:随年龄增长,羊驼十二指肠肥大细胞数量增多,空肠和回肠肥大细胞数量则减少,十二指肠、空肠肥大细胞数量之间差异极显著(P<0.01),回肠肥大细胞数量差异未达极显著(P>0.01);3月龄羊驼十二指肠、回肠之间的肥大细胞数量差异极显著(P<0.01),回肠、空肠之间的肥大细胞数量差异未达极显著(P>0.01);12月龄羊驼十二指肠、空肠、回肠之间的肥大细胞数量差异极显著(P<0.01)。以上结果显示:不同发育阶段的羊驼小肠肥大细胞数量与年龄呈正相关。     

芽孢乳杆菌S1对断奶前后仔猪肠道乳酸菌、大肠杆菌和挥发性脂肪酸含量变化的影响

将6窝仔猪随机分成对照组和处理组,研究外源乳酸菌芽孢乳杆菌S1对仔猪空肠和结肠食糜中乳酸菌和大肠杆菌的数量及挥发性脂肪酸(VFA)含量的影响.结果表明:仔猪断奶前,空肠和结肠食糜中乳酸菌和大肠杆菌的数量较稳定;断奶后,仔猪空肠和结肠食糜中乳酸菌和大肠杆菌的数量均明显下降,乳酸菌的下降更显著.与对照组相比,芽孢乳杆菌S1能提高断奶后仔猪空肠和结肠食糜中乳酸菌与大肠杆菌的数量比值.断奶后,仔猪结肠VFA含量明显下降,与对照组相比,处理组结肠VFA含量明显较高.     

Tissue distribution of deoxynivalenol in piglets following intravenous administration

Contamination of deoxynivalenol(DON) in grains is common worldwide and pigs are particularly susceptible to this mycotoxin. The distribution of DON in porcine tissues following intravenous administration was investigated in this study. Fifteen pigs were randomly divided into three groups. Animals in groups A and B were administrated with DON at the dose of 250 and 750 μg kg–1 body weight, respectively, while group C served as blank control. Plasma, bile and 27 tissues were collected at 30 min post-administration. DON concentrations in all samples were tested using high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry(HPLC-MS/MS). To observe the distribution of DON in tissues, these samples were further subjected to the immunohistochemical analyses. Totally, the bile and 13 tissues were sampled for DON-based detection, including kidney, mesenteric lymph nodes, muscle, stomach, jejunum, colon, plasma, spleen, rectum, cecum, liver, ileum, and duodenum. No significant difference was observed for the concentrations of DON in duodenum, ileum and liver samples between groups A and B; while the DON concentrations in cecum and rectum of group B were significantly higher(P-value 0.05) than those in group A. In addition, the DON concentrations in stomach, jejunum, colon, mesenteric lymph nodes, muscle, kidney, spleen, bile, and plasma of group B were remarkably higher than those of group A(P-value0.01). Levels of DON in other 14 tissues including medulla oblongata, midbrain, diencephalon, pons, tip and tongue body, tongue, soft palate, tonsils, pharyngeal mucosa, oral buccal mucosa, thymus, thyroid, esophagus and adrenal gland were all below the limit of detection. The results of immunohistochemistry showed that 11 tissue samples(medullaoblongata, tonsil, adrenal medulla, thyroid gland, thyroid, stomach, duodenum, jejunum, kidney, spleen, and mesenteric lymph nodes) were positive and DON was mainly distributed around blood vessels in these tissues. Therefore, we believed that concentrations of DON in tissues differ when pigs are in exposure to various dosages and DON causes lesions in many pig tissues.     

代乳粉对早期断奶沂蒙黑山羊羔小肠发育、菌群多样性及葡萄糖转运载体基因表达的影响

【目的】研究饲喂代乳粉对早期断奶沂蒙黑山羊羔小肠发育、菌群多样性及葡萄糖转运载体基因表达的影响,为沂蒙黑山羊早期断奶羔羊的培育提供理论依据。【方法】将36只双胎沂蒙黑山羊羔羊分成2组,每组6个重复,每个重复3只。其中,对照组(Ⅰ组)羔羊随母哺乳至75日龄,试验组(Ⅱ组)于10日龄断奶后饲喂代乳粉。分别于试验的第10、15、25、45和75 天称羔羊活体重以及屠宰后十二指肠、空肠、回肠重量,并收集各肠段内容物、黏膜组织样品。采用16S rDNA的PCR-DGGE技术和实时荧光定量PCR等方法,分析小肠菌群定植规律及葡萄糖转运载体(SGLT-1、GLUT-2)基因mRNA表达量。【结果】Ⅱ组羔羊45 d时平均日增重和空肠、回肠重量显著高于Ⅰ组(P＜0.05),而75 d时平均日增重和回肠重量极显著高于Ⅰ组(P＜0.01)。十二指肠在45和75 d、空肠在15 d及回肠在10 d时两组间菌群变化较为明显,二者菌群多样性指数回肠最高,其次空肠、十二指肠;两组各肠段优势菌群均为溶淀粉乳杆菌和普雷沃氏菌属,但随着日龄增加,Ⅰ组各肠段益生菌属总细菌数量呈下降趋势,Ⅱ组却与此相反。Ⅱ组在10 d时SGLT-1和GLUT-2基因mRNA表达量最低,而25 d后Ⅱ组表达量均高于Ⅰ组,且差异不显著(P＞0.05);上述基因表达量呈现肠段部位间差异,其中SGLT-1基因mRNA表达量变化空肠最大,十二指肠最低,而GLUT-2基因mRNA表达量变化十二指肠最大,回肠最低。【结论】饲喂代乳粉在第25 天时可促进沂蒙黑山羊早期断奶羔羊空肠、回肠有益菌提前定植,并通过调控葡萄糖转运载体基因表达而引起葡萄糖吸收转运的改变,进而影响羔羊后期肠道组织及机体的生长发育。     

仔猪HSP70蛋白表达与断奶腹泻关系研究

为了探讨HSP70在断奶过程中的作用,试验通过免疫组化方法检测民猪、长白猪断奶仔猪的胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠六个组织中HSP70蛋白的组织定位与定量变化.结果表明,胃肠道中HSP70蛋白主要在黏膜上皮和肠腺内表达,在各组织内的表达没有因腹泻与否而发生组织定位的改变,在除胃以外的其他消化道组织中,长白健康组仔...     

猪增生性肠炎黏膜免疫相关细胞数量研究

为了揭示猪增生性肠炎黏膜免疫相关细胞数量的变化情况.采用组织学方法,比较PCR检验阳性猪(获得胞内劳森氏菌特异性扩增产物)与阴性猪(无胞内劳森氏菌特异性扩增产物)的十二指肠、空肠、回肠黏膜淋巴细胞、杯状细胞、肥大细胞的数量和分布变化.结果表明,阳性猪十二指肠、空肠黏膜上皮内每100个柱状细胞间淋巴细胞的数量同比阴性猪稍...     

肉鸡肠道CDX2 mRNA表达的肠段差异性与发育性变化

选用遗传背景相同的1日龄父母代雄性Arbor Acre(AA)肉雏鸡120羽,随机分为4个重复,采用相对定量RT-PCR方法,以从肉鸡30 d肠道样品为模板,研究肉鸡肠道尾形相关同源盒基因(cadua-related type homeoboxgene)家族中CDX2 mRNA表达的组织特异性;以从肉鸡十二指肠和空肠样品为模板,研究肉鸡肠道CDX2 mBNA表达的发育性变化.结果显示:AA肉鸡十二指肠CDX2 mRNA的表达丰度高于空肠(P=0.09)、回肠(P=0.06)和结直肠(P=0.05);从肉鸡CDX2 mRNA在十二指肠及空肠中的表达具有相同的发育模式,2～30 d下降,44 d回升,58 d略微下降;在2和44 d时的表达丰度显著高于30 d(P<0.05).以上结果表明:从肉鸡肠道近端CDX2mRNA的表达丰度高于远端(P>0.05).AA肉鸡十二指肠及空肠CDX2 mRNA的表达具有相同的发育模式,表明CDX2 mKNA表达受到发育阶段的调控,且在十二指肠和空肠间具有稳定性.